ਅਸੀਂ ਪਹਿਲਾਂ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੀ ਸੀ ਕਿ ਜਿਗਰ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ ਵਾਲੇ ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਵਿੱਚ ਅੰਤੜੀਆਂ ਤੋਂ ਪ੍ਰਾਪਤ ਟ੍ਰਿਪਟੋਫਨ ਮੈਟਾਬੋਲਾਈਟ ਇੰਡੋਲ-3-ਪ੍ਰੋਪੀਓਨਿਕ ਐਸਿਡ (IPA) ਦੇ ਸੀਰਮ ਪੱਧਰ ਘੱਟ ਹੁੰਦੇ ਹਨ। ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ ਸੀਰਮ IPA ਪੱਧਰਾਂ ਦੇ ਸਬੰਧ ਵਿੱਚ ਮੋਟੇ ਜਿਗਰਾਂ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟੋਮ ਅਤੇ DNA ਮਿਥਾਈਲੋਮ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ, ਨਾਲ ਹੀ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਵਿੱਚ ਹੈਪੇਟਿਕ ਸਟੈਲੇਟ ਸੈੱਲਾਂ (HSCs) ਦੇ ਫੀਨੋਟਾਈਪਿਕ ਇਨਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਨ ਵਿੱਚ IPA ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ।
ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ ਟਾਈਪ 2 ਡਾਇਬਟੀਜ਼ ਮਲੇਟਸ (T2DM) ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ 116 ਮੋਟੇ ਮਰੀਜ਼ ਸ਼ਾਮਲ ਸਨ (ਉਮਰ 46.8 ± 9.3 ਸਾਲ; BMI: 42.7 ± 5.0 kg/m²) ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਨੇ ਕੁਓਪੀਓ ਬੈਰੀਆਟ੍ਰਿਕ ਸਰਜਰੀ ਸੈਂਟਰ (KOBS) ਵਿਖੇ ਬੈਰੀਆਟ੍ਰਿਕ ਸਰਜਰੀ ਕਰਵਾਈ ਸੀ। ਸਰਕੂਲੇਟਿੰਗ IPA ਪੱਧਰਾਂ ਨੂੰ ਤਰਲ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫੀ-ਮਾਸ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਮੈਟਰੀ (LC-MS) ਦੁਆਰਾ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਜਿਗਰ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟੋਮ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੁੱਲ RNA ਸੀਕਵੈਂਸਿੰਗ ਦੁਆਰਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ DNA ਮਿਥਾਈਲੇਸ਼ਨ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ Infinium HumanMethylation450 BeadChip ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਲਈ ਮਨੁੱਖੀ ਹੈਪੇਟਿਕ ਸਟੈਲੇਟ ਸੈੱਲ (LX-2) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।
ਸੀਰਮ IPA ਪੱਧਰ ਜਿਗਰ ਵਿੱਚ ਐਪੋਪਟੋਟਿਕ, ਮਾਈਟੋਫੈਜਿਕ, ਅਤੇ ਲੰਬੀ ਉਮਰ ਦੇ ਮਾਰਗਾਂ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਜੀਨਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਨਾਲ ਸੰਬੰਧਿਤ ਹਨ। AKT ਸੀਰੀਨ/ਥ੍ਰੀਓਨਾਈਨ ਕਾਇਨੇਜ 1 (AKT1) ਜੀਨ ਜਿਗਰ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟ ਅਤੇ DNA ਮਿਥਾਈਲੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰੋਫਾਈਲਾਂ ਵਿੱਚ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਭਰਪੂਰ ਅਤੇ ਪ੍ਰਮੁੱਖ ਇੰਟਰੈਕਟਿੰਗ ਜੀਨ ਸੀ। IPA ਇਲਾਜ ਨੇ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕੀਤਾ, ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਸਾਹ ਘਟਾਇਆ, ਅਤੇ LX-2 ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ, ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਅਤੇ ਬਚਾਅ ਨੂੰ ਨਿਯਮਤ ਕਰਨ ਲਈ ਜਾਣੇ ਜਾਂਦੇ ਜੀਨਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਨੂੰ ਸੰਸ਼ੋਧਿਤ ਕਰਕੇ ਸੈੱਲ ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨ ਅਤੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਗਤੀਸ਼ੀਲਤਾ ਨੂੰ ਬਦਲਿਆ।
ਇਕੱਠੇ ਮਿਲ ਕੇ, ਇਹ ਡੇਟਾ ਇਸ ਗੱਲ ਦਾ ਸਮਰਥਨ ਕਰਦੇ ਹਨ ਕਿ IPA ਦੇ ਸੰਭਾਵੀ ਇਲਾਜ ਪ੍ਰਭਾਵ ਹਨ ਅਤੇ ਇਹ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ HSC ਫੀਨੋਟਾਈਪ ਨੂੰ ਇੱਕ ਅਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਸਥਿਤੀ ਵੱਲ ਬਦਲ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ HSC ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਅਤੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਮੈਟਾਬੋਲਿਜ਼ਮ ਵਿੱਚ ਦਖਲ ਦੇ ਕੇ ਜਿਗਰ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਦੀ ਸੰਭਾਵਨਾ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦਾ ਹੈ।
ਮੋਟਾਪੇ ਅਤੇ ਮੈਟਾਬੋਲਿਕ ਸਿੰਡਰੋਮ ਦੇ ਪ੍ਰਚਲਨ ਨੂੰ ਮੈਟਾਬੋਲਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੰਬੰਧਿਤ ਫੈਟੀ ਜਿਗਰ ਬਿਮਾਰੀ (MASLD) ਦੀਆਂ ਵਧਦੀਆਂ ਘਟਨਾਵਾਂ ਨਾਲ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਹੈ; ਇਹ ਬਿਮਾਰੀ ਆਮ ਆਬਾਦੀ ਦੇ 25% ਤੋਂ 30% ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਦੀ ਹੈ [1]। MASLD ਈਟੀਓਲੋਜੀ ਦਾ ਮੁੱਖ ਨਤੀਜਾ ਜਿਗਰ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ ਹੈ, ਇੱਕ ਗਤੀਸ਼ੀਲ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਜੋ ਰੇਸ਼ੇਦਾਰ ਐਕਸਟਰਸੈਲੂਲਰ ਮੈਟ੍ਰਿਕਸ (ECM) [2] ਦੇ ਨਿਰੰਤਰ ਇਕੱਠੇ ਹੋਣ ਦੁਆਰਾ ਦਰਸਾਈ ਜਾਂਦੀ ਹੈ। ਜਿਗਰ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਮੁੱਖ ਸੈੱਲ ਹੈਪੇਟਿਕ ਸਟੈਲੇਟ ਸੈੱਲ (HSCs) ਹਨ, ਜੋ ਚਾਰ ਜਾਣੇ-ਪਛਾਣੇ ਫੀਨੋਟਾਈਪ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ: ਸ਼ਾਂਤ, ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ, ਅਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ, ਅਤੇ ਸੇਨਸੈਂਟ [3, 4]। HSCs ਨੂੰ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ α-ਸਮੂਥ ਮਾਸਪੇਸ਼ੀ ਐਕਟਿਨ (α-SMA) ਅਤੇ ਟਾਈਪ I ਕੋਲੇਜਨ (Col-I) [5, 6] ਦੇ ਵਧੇ ਹੋਏ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਦੇ ਨਾਲ, ਇੱਕ ਸ਼ਾਂਤ ਰੂਪ ਤੋਂ ਪ੍ਰੋਲੀਫੇਰੇਟਿਵ ਫਾਈਬਰੋਬਲਾਸਟ-ਵਰਗੇ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਬਦਲਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਜਿਗਰ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ ਰਿਵਰਸਲ ਦੌਰਾਨ, ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ HSCs ਨੂੰ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਜਾਂ ਅਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲਤਾ ਦੁਆਰਾ ਖਤਮ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਇਹਨਾਂ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਵਿੱਚ ਫਾਈਬਰੋਜੈਨਿਕ ਜੀਨਾਂ ਦਾ ਡਾਊਨਰੇਗੂਲੇਸ਼ਨ ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਸਰਵਾਈਵਲ ਜੀਨਾਂ (ਜਿਵੇਂ ਕਿ NF-κB ਅਤੇ PI3K/Akt ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਮਾਰਗ) [7, 8] ਦਾ ਮੋਡਿਊਲੇਸ਼ਨ, ਅਤੇ ਨਾਲ ਹੀ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਗਤੀਸ਼ੀਲਤਾ ਅਤੇ ਕਾਰਜ ਵਿੱਚ ਬਦਲਾਅ [9] ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ।
ਅੰਤੜੀ ਵਿੱਚ ਪੈਦਾ ਹੋਣ ਵਾਲੇ ਟ੍ਰਿਪਟੋਫਨ ਮੈਟਾਬੋਲਾਈਟ ਇੰਡੋਲ-3-ਪ੍ਰੋਪੀਓਨਿਕ ਐਸਿਡ (IPA) ਦੇ ਸੀਰਮ ਪੱਧਰ, ਜੋ ਕਿ MASLD [10–13] ਸਮੇਤ ਮਨੁੱਖੀ ਪਾਚਕ ਰੋਗਾਂ ਵਿੱਚ ਘੱਟ ਪਾਏ ਗਏ ਹਨ। IPA ਖੁਰਾਕ ਫਾਈਬਰ ਦੇ ਸੇਵਨ ਨਾਲ ਜੁੜਿਆ ਹੋਇਆ ਹੈ, ਇਸਦੇ ਐਂਟੀਆਕਸੀਡੈਂਟ ਅਤੇ ਸਾੜ ਵਿਰੋਧੀ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਲਈ ਜਾਣਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਵਿਵੋ ਅਤੇ ਇਨ ਵਿਟਰੋ [11–14] ਵਿੱਚ ਖੁਰਾਕ-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਗੈਰ-ਅਲਕੋਹਲਿਕ ਸਟੀਟੋਹੇਪੇਟਾਈਟਸ (NASH) ਫੀਨੋਟਾਈਪ ਨੂੰ ਘੱਟ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਕੁਝ ਸਬੂਤ ਸਾਡੇ ਪਿਛਲੇ ਅਧਿਐਨ ਤੋਂ ਆਉਂਦੇ ਹਨ, ਜਿਸ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ ਕੁਓਪੀਓ ਬੈਰੀਆਟ੍ਰਿਕ ਸਰਜਰੀ ਅਧਿਐਨ (KOBS) ਵਿੱਚ ਜਿਗਰ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਮੋਟੇ ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਜਿਗਰ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ ਵਾਲੇ ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਵਿੱਚ ਸੀਰਮ IPA ਪੱਧਰ ਘੱਟ ਸਨ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਅਸੀਂ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ IPA ਇਲਾਜ ਜੀਨਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਨੂੰ ਘਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਜੋ ਮਨੁੱਖੀ ਹੈਪੇਟਿਕ ਸਟੈਲੇਟ ਸੈੱਲ (LX-2) ਮਾਡਲ ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਅਡੈਸ਼ਨ, ਸੈੱਲ ਮਾਈਗ੍ਰੇਸ਼ਨ ਅਤੇ ਹੇਮੇਟੋਪੋਏਟਿਕ ਸਟੈਮ ਸੈੱਲ ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਦੇ ਕਲਾਸੀਕਲ ਮਾਰਕਰ ਹਨ ਅਤੇ ਇੱਕ ਸੰਭਾਵੀ ਹੈਪੇਟੋਪ੍ਰੋਟੈਕਟਿਵ ਮੈਟਾਬੋਲਾਈਟ ਹੈ [15]। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਇਹ ਅਸਪਸ਼ਟ ਹੈ ਕਿ IPA HSC ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਅਤੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਬਾਇਓਐਨਰਜੇਟਿਕਸ ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰਕੇ ਜਿਗਰ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ ਰਿਗਰੈਸ਼ਨ ਨੂੰ ਕਿਵੇਂ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ।
ਇੱਥੇ, ਅਸੀਂ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਾਂ ਕਿ ਸੀਰਮ IPA ਮੋਟੇ ਪਰ ਗੈਰ-ਟਾਈਪ 2 ਡਾਇਬਟੀਜ਼ (KOBS) ਵਿਅਕਤੀਆਂ ਦੇ ਜਿਗਰ ਵਿੱਚ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ, ਮਾਈਟੋਫੈਜੀ, ਅਤੇ ਲੰਬੀ ਉਮਰ ਦੇ ਮਾਰਗਾਂ ਵਿੱਚ ਭਰਪੂਰ ਜੀਨਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਨਾਲ ਜੁੜਿਆ ਹੋਇਆ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਅਸੀਂ ਪਾਇਆ ਕਿ IPA ਇਨਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਮਾਰਗ ਰਾਹੀਂ ਸਰਗਰਮ ਹੀਮੇਟੋਪੋਇਟਿਕ ਸਟੈਮ ਸੈੱਲਾਂ (HSCs) ਦੀ ਕਲੀਅਰੈਂਸ ਅਤੇ ਡਿਗਰੇਡੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਨਤੀਜੇ IPA ਲਈ ਇੱਕ ਨਵੀਂ ਭੂਮਿਕਾ ਦਾ ਖੁਲਾਸਾ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਜੋ ਇਸਨੂੰ ਜਿਗਰ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ ਰਿਗਰੈਸ਼ਨ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਸੰਭਾਵੀ ਇਲਾਜ ਟੀਚਾ ਬਣਾਉਂਦੇ ਹਨ।
KOBS ਸਮੂਹ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਪਿਛਲੇ ਅਧਿਐਨ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ ਜਿਗਰ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ ਵਾਲੇ ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਵਿੱਚ ਜਿਗਰ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਘੱਟ ਸੰਚਾਰਿਤ IPA ਪੱਧਰ ਸਨ [15]। ਟਾਈਪ 2 ਡਾਇਬਟੀਜ਼ ਦੇ ਸੰਭਾਵੀ ਉਲਝਣ ਵਾਲੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨੂੰ ਬਾਹਰ ਕੱਢਣ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਟਾਈਪ 2 ਡਾਇਬਟੀਜ਼ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ 116 ਮੋਟੇ ਮਰੀਜ਼ਾਂ (ਔਸਤ ਉਮਰ ± SD: 46.8 ± 9.3 ਸਾਲ; BMI: 42.7 ± 5.0 kg/m2) (ਸਾਰਣੀ 1) ਨੂੰ ਅਧਿਐਨ ਆਬਾਦੀ [16] ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਚੱਲ ਰਹੇ KOBS ਅਧਿਐਨ ਤੋਂ ਭਰਤੀ ਕੀਤਾ। ਸਾਰੇ ਭਾਗੀਦਾਰਾਂ ਨੇ ਲਿਖਤੀ ਸੂਚਿਤ ਸਹਿਮਤੀ ਦਿੱਤੀ ਅਤੇ ਅਧਿਐਨ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ ਨੂੰ ਹੇਲਸਿੰਕੀ ਦੇ ਐਲਾਨਨਾਮੇ (54/2005, 104/2008 ਅਤੇ 27/2010) ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਉੱਤਰੀ ਸਾਵੋ ਕਾਉਂਟੀ ਹਸਪਤਾਲ ਦੀ ਨੈਤਿਕਤਾ ਕਮੇਟੀ ਦੁਆਰਾ ਮਨਜ਼ੂਰੀ ਦਿੱਤੀ ਗਈ।
ਜਿਗਰ ਦੇ ਬਾਇਓਪਸੀ ਨਮੂਨੇ ਬੈਰੀਐਟ੍ਰਿਕ ਸਰਜਰੀ ਦੌਰਾਨ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ ਅਤੇ ਪਹਿਲਾਂ ਦੱਸੇ ਗਏ ਮਾਪਦੰਡਾਂ [17, 18] ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਤਜਰਬੇਕਾਰ ਪੈਥੋਲੋਜਿਸਟਾਂ ਦੁਆਰਾ ਹਿਸਟੋਲੋਜੀਕਲ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਮੁਲਾਂਕਣ ਮਾਪਦੰਡਾਂ ਦਾ ਸਾਰ ਪੂਰਕ ਸਾਰਣੀ S1 ਵਿੱਚ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਹੈ ਅਤੇ ਪਹਿਲਾਂ ਵਰਣਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ [19]।
ਫਾਸਟਿੰਗ ਸੀਰਮ ਦੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਮੈਟਾਬੋਲੋਮਿਕਸ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ (n = 116) ਲਈ ਅਣ-ਟਾਰਗੇਟਡ ਲਿਕਵਿਡ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫੀ-ਮਾਸ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਮੈਟਰੀ (LC-MS) ਦੁਆਰਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਨਮੂਨਿਆਂ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ UHPLC-qTOF-MS ਸਿਸਟਮ (1290 LC, 6540 qTOF-MS, ਐਜਿਲੈਂਟ ਟੈਕਨਾਲੋਜੀਜ਼, ਵਾਲਡਬਰੋਨ, ਕਾਰਲਸਰੂਹੇ, ਜਰਮਨੀ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਪਹਿਲਾਂ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਹੈ19। ਆਈਸੋਪ੍ਰੋਪਾਈਲ ਅਲਕੋਹਲ (IPA) ਦੀ ਪਛਾਣ ਧਾਰਨ ਸਮੇਂ ਅਤੇ MS/MS ਸਪੈਕਟ੍ਰਮ ਦੀ ਸ਼ੁੱਧ ਮਿਆਰਾਂ ਨਾਲ ਤੁਲਨਾ 'ਤੇ ਅਧਾਰਤ ਸੀ। ਸਾਰੇ ਹੋਰ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣਾਂ ਵਿੱਚ IPA ਸਿਗਨਲ ਤੀਬਰਤਾ (ਪੀਕ ਏਰੀਆ) 'ਤੇ ਵਿਚਾਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ [20]।
ਪੂਰੇ ਜਿਗਰ ਦੇ RNA ਸੀਕੁਐਂਸਿੰਗ ਨੂੰ Illumina HiSeq 2500 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਡੇਟਾ ਨੂੰ ਪਹਿਲਾਂ ਦੱਸੇ ਅਨੁਸਾਰ ਪ੍ਰੀਪ੍ਰੋਸੈਸ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ [19, 21, 22]। ਅਸੀਂ MitoMiner 4.0 ਡੇਟਾਬੇਸ [23] ਤੋਂ ਚੁਣੇ ਗਏ 1957 ਜੀਨਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਫੰਕਸ਼ਨ/ਬਾਇਓਜੇਨੇਸਿਸ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਾਂ ਦਾ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਵਿਭਿੰਨ ਸਮੀਕਰਨ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ। ਜਿਗਰ ਦੇ DNA ਮਿਥਾਈਲੇਸ਼ਨ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਨੂੰ Infinium HumanMethylation450 BeadChip (Illumina, San Diego, CA, USA) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਉਸੇ ਵਿਧੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜਿਵੇਂ ਪਹਿਲਾਂ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਸੀ [24, 25]।
ਮਨੁੱਖੀ ਜਿਗਰ ਦੇ ਸਟੈਲੇਟ ਸੈੱਲ (LX-2) ਪ੍ਰੋ. ਸਟੀਫਨੋ ਰੋਮੀਓ ਦੁਆਰਾ ਦਿਆਲਤਾ ਨਾਲ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ ਅਤੇ ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ DMEM/F12 ਮਾਧਿਅਮ (ਬਾਇਓਵੈਸਟ, L0093-500, 1% ਪੈੱਨ/ਸਟ੍ਰੈਪ; ਲੋਂਜ਼ਾ, DE17-602E, 2% FBS; ਗਿਬਕੋ, 10270-106) ਵਿੱਚ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਅਤੇ ਸੰਭਾਲਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। IPA ਦੀ ਕਾਰਜਸ਼ੀਲ ਖੁਰਾਕ ਦੀ ਚੋਣ ਕਰਨ ਲਈ, LX-2 ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ DMEM/F12 ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ 24 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ IPA (10 μM, 100 μM ਅਤੇ 1 mM; ਸਿਗਮਾ, 220027) ਦੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, HSCs ਨੂੰ ਅਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਕਰਨ ਲਈ IPA ਦੀ ਯੋਗਤਾ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰਨ ਲਈ, LX-2 ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ 5 ng/ml TGF-β1 (R&D ਸਿਸਟਮ, 240-B-002/CF) ਅਤੇ 1 mM IPA ਨਾਲ 24 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ ਸੀਰਮ-ਮੁਕਤ ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ ਸਹਿ-ਇਲਾਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਸੰਬੰਧਿਤ ਵਾਹਨ ਨਿਯੰਤਰਣਾਂ ਲਈ, TGF-β1 ਇਲਾਜ ਲਈ 0.1% BSA ਵਾਲਾ 4 nM HCL ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ IPA ਇਲਾਜ ਲਈ 0.05% DMSO ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ ਦੋਵਾਂ ਨੂੰ ਸੁਮੇਲ ਇਲਾਜ ਲਈ ਇਕੱਠੇ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।
ਨਿਰਮਾਤਾ ਦੀਆਂ ਹਦਾਇਤਾਂ ਅਨੁਸਾਰ 7-AAD (ਬਾਇਓਲੇਜੈਂਡ, ਸੈਨ ਡਿਏਗੋ, CA, USA, Cat# 640922) ਵਾਲੀ FITC Annexin V Apoptosis Detection Kit ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। ਸੰਖੇਪ ਵਿੱਚ, LX-2 (1 × 105 ਸੈੱਲ/ਖੂਹ) ਨੂੰ ਰਾਤੋ-ਰਾਤ 12-ਖੂਹ ਪਲੇਟਾਂ ਵਿੱਚ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ ਫਿਰ IPA ਜਾਂ IPA ਅਤੇ TGF-β1 ਦੀਆਂ ਕਈ ਖੁਰਾਕਾਂ ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। ਅਗਲੇ ਦਿਨ, ਫਲੋਟਿੰਗ ਅਤੇ ਐਡਰੈਂਟ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਇਕੱਠਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ, ਟ੍ਰਾਈਪਸਿਨਾਈਜ਼ ਕੀਤਾ ਗਿਆ, PBS ਨਾਲ ਧੋਤਾ ਗਿਆ, Annexin V ਬਾਈਡਿੰਗ ਬਫਰ ਵਿੱਚ ਦੁਬਾਰਾ ਸਸਪੈਂਡ ਕੀਤਾ ਗਿਆ, ਅਤੇ FITC-Annexin V ਅਤੇ 7-AAD ਨਾਲ 15 ਮਿੰਟ ਲਈ ਇਨਕਿਊਬੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ।
ਜੀਵਤ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਆ ਨੂੰ Mitotracker™ Red CMXRos (MTR) (ਥਰਮੋ ਫਿਸ਼ਰ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ, ਕਾਰਲਸਬੈਡ, CA) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਆਕਸੀਡੇਟਿਵ ਗਤੀਵਿਧੀ ਲਈ ਰੰਗਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। MTR ਅਸੈਸ ਲਈ, LX-2 ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ IPA ਅਤੇ TGF-β1 ਨਾਲ ਬਰਾਬਰ ਘਣਤਾ 'ਤੇ ਇਨਕਿਊਬੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। 24 ਘੰਟਿਆਂ ਬਾਅਦ, ਜੀਵਤ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਟ੍ਰਾਈਪਸਿਨਾਈਜ਼ ਕੀਤਾ ਗਿਆ, PBS ਨਾਲ ਧੋਤਾ ਗਿਆ, ਅਤੇ ਫਿਰ ਪਹਿਲਾਂ ਦੱਸੇ ਅਨੁਸਾਰ 20 ਮਿੰਟ ਲਈ 37 °C 'ਤੇ ਸੀਰਮ-ਮੁਕਤ ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ 100 μM MTR ਨਾਲ ਇਨਕਿਊਬੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ [26]। ਲਾਈਵ ਸੈੱਲ ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ, ਸੈੱਲ ਆਕਾਰ ਅਤੇ ਸਾਇਟੋਪਲਾਜ਼ਮਿਕ ਜਟਿਲਤਾ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕ੍ਰਮਵਾਰ ਫਾਰਵਰਡ ਸਕੈਟਰ (FSC) ਅਤੇ ਸਾਈਡ ਸਕੈਟਰ (SSC) ਪੈਰਾਮੀਟਰਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ।
ਸਾਰਾ ਡਾਟਾ (30,000 ਘਟਨਾਵਾਂ) NovoCyte Quanteon (Agilent) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ NovoExpress® 1.4.1 ਜਾਂ FlowJo V.10 ਸੌਫਟਵੇਅਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਨਿਰਮਾਤਾ ਦੀਆਂ ਹਦਾਇਤਾਂ ਅਨੁਸਾਰ ਸੀਹੋਰਸ ਐਕਸਟਰਾਸੈਲੂਲਰ ਫਲਕਸ ਐਨਾਲਾਈਜ਼ਰ (ਐਜਿਲੈਂਟ ਟੈਕਨਾਲੋਜੀਜ਼, ਸੈਂਟਾ ਕਲਾਰਾ, ਸੀਏ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਆਕਸੀਜਨ ਦੀ ਖਪਤ ਦਰ (OCR) ਅਤੇ ਐਕਸਟਰਾਸੈਲੂਲਰ ਐਸਿਡੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਦਰ (ECAR) ਨੂੰ ਅਸਲ ਸਮੇਂ ਵਿੱਚ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਜੋ ਸੀਹੋਰਸ ਐਕਸਟਰਾਸੈਲੂਲਰ ਫਲਕਸ ਐਨਾਲਾਈਜ਼ਰ (ਐਜਿਲੈਂਟ ਟੈਕਨਾਲੋਜੀਜ਼, ਸੈਂਟਾ ਕਲਾਰਾ, ਸੀਏ) ਸੀ ਜੋ ਸੀਹੋਰਸ ਐਕਸਐਫ ਸੈੱਲ ਮੀਟੋ ਸਟ੍ਰੈਸ ਨਾਲ ਲੈਸ ਸੀ। ਸੰਖੇਪ ਵਿੱਚ, 2 × 104 LX-2 ਸੈੱਲ/ਖੂਹ ਨੂੰ XF96 ਸੈੱਲ ਕਲਚਰ ਪਲੇਟਾਂ 'ਤੇ ਸੀਡ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਰਾਤ ਭਰ ਇਨਕਿਊਬੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਸੈੱਲਾਂ ਦਾ ਇਲਾਜ ਆਈਸੋਪ੍ਰੋਪਾਨੋਲ (IPA) ਅਤੇ TGF-β1 (ਪੂਰਕ ਵਿਧੀਆਂ 1) ਨਾਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਡਾਟਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਸੀਹੋਰਸ ਐਕਸਐਫ ਵੇਵ ਸੌਫਟਵੇਅਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਸੀਹੋਰਸ ਐਕਸਐਫ ਸੈੱਲ ਐਨਰਜੀ ਫੀਨੋਟਾਈਪ ਟੈਸਟ ਰਿਪੋਰਟ ਜਨਰੇਟਰ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ, ਇੱਕ ਬਾਇਓਐਨਰਜੈਟਿਕ ਹੈਲਥ ਇੰਡੈਕਸ (BHI) ਦੀ ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ [27]।
ਕੁੱਲ RNA ਨੂੰ cDNA ਵਿੱਚ ਲਿਪੀਬੱਧ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਖਾਸ ਤਰੀਕਿਆਂ ਲਈ, ਹਵਾਲਾ ਵੇਖੋ [15]। ਮਨੁੱਖੀ 60S ਰਾਈਬੋਸੋਮਲ ਐਸਿਡਿਕ ਪ੍ਰੋਟੀਨ P0 (RPLP0) ਅਤੇ ਸਾਈਕਲੋਫਿਲਿਨ A1 (PPIA) mRNA ਪੱਧਰਾਂ ਨੂੰ ਸੰਵਿਧਾਨਕ ਜੀਨ ਨਿਯੰਤਰਣ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। QuantStudio 6 pro Real-Time PCR ਸਿਸਟਮ (ਥਰਮੋ ਫਿਸ਼ਰ, ਲੈਂਡਸਮੀਰ, ਨੀਦਰਲੈਂਡ) ਨੂੰ TaqMan™ ਫਾਸਟ ਐਡਵਾਂਸਡ ਮਾਸਟਰ ਮਿਕਸ ਕਿੱਟ (ਐਪਲਾਈਡ ਬਾਇਓਸਿਸਟਮ) ਜਾਂ Sensifast SYBR Lo-ROX ਕਿੱਟ (ਬਾਇਓਲਾਈਨ, BIO 94050) ਨਾਲ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ ਤੁਲਨਾਤਮਕ Ct ਮੁੱਲ ਸਾਈਕਲਿੰਗ ਪੈਰਾਮੀਟਰ (ΔΔCt) ਅਤੇ ∆∆Ct ਵਿਧੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਸੰਬੰਧਿਤ ਜੀਨ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਫੋਲਡ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੇ ਵੇਰਵੇ ਪੂਰਕ ਸਾਰਣੀਆਂ S2 ਅਤੇ S3 ਵਿੱਚ ਦਿੱਤੇ ਗਏ ਹਨ।
ਨਿਊਕਲੀਅਰ ਡੀਐਨਏ (ਐਨਸੀਡੀਐਨਏ) ਅਤੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਡੀਐਨਏ (ਐਮਟੀਡੀਐਨਏ) ਨੂੰ ਡੀਐਨਈਜ਼ੀ ਬਲੱਡ ਐਂਡ ਟਿਸ਼ੂ ਕਿੱਟ (ਕਿਆਜੇਨ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੱਢਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਪਹਿਲਾਂ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਹੈ [28]। ਐਮਟੀਡੀਐਨਏ ਦੀ ਸਾਪੇਖਿਕ ਮਾਤਰਾ ਦੀ ਗਣਨਾ ਹਰੇਕ ਟਾਰਗੇਟ ਐਮਟੀਡੀਐਨਏ ਖੇਤਰ ਦੇ ਤਿੰਨ ਨਿਊਕਲੀਅਰ ਡੀਐਨਏ ਖੇਤਰਾਂ (ਐਮਟੀਡੀਐਨਏ/ਐਨਸੀਡੀਐਨਏ) ਦੇ ਜਿਓਮੈਟ੍ਰਿਕ ਔਸਤ ਨਾਲ ਅਨੁਪਾਤ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰਕੇ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਪੂਰਕ ਵਿਧੀਆਂ 2 ਵਿੱਚ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਹੈ। ਐਮਟੀਡੀਐਨਏ ਅਤੇ ਐਨਸੀਡੀਐਨਏ ਲਈ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੇ ਵੇਰਵੇ ਪੂਰਕ ਸਾਰਣੀ S4 ਵਿੱਚ ਦਿੱਤੇ ਗਏ ਹਨ।
ਲਾਈਵ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਮਾਈਟੋਟ੍ਰੈਕਰ™ ਰੈੱਡ CMXRos (MTR) (ਥਰਮੋ ਫਿਸ਼ਰ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ, ਕਾਰਲਸਬੈਡ, CA) ਨਾਲ ਰੰਗਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਤਾਂ ਜੋ ਇੰਟਰਸੈਲੂਲਰ ਅਤੇ ਇੰਟਰਾਸੈਲੂਲਰ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਨੈੱਟਵਰਕਾਂ ਦੀ ਕਲਪਨਾ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕੇ। LX-2 ਸੈੱਲਾਂ (1 × 104 ਸੈੱਲ/ਖੂਹ) ਨੂੰ ਸੰਬੰਧਿਤ ਕੱਚ-ਤਲ ਵਾਲੇ ਕਲਚਰ ਪਲੇਟਾਂ (Ibidi GmbH, Martinsried, Germany) ਵਿੱਚ ਕੱਚ ਦੀਆਂ ਸਲਾਈਡਾਂ 'ਤੇ ਕਲਚਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। 24 ਘੰਟਿਆਂ ਬਾਅਦ, ਲਾਈਵ LX-2 ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ 37 °C 'ਤੇ 20 ਮਿੰਟ ਲਈ 100 μM MTR ਨਾਲ ਇਨਕਿਊਬੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਨਿਊਕਲੀਅਸ ਨੂੰ DAPI (1 μg/ml, Sigma-Aldrich) ਨਾਲ ਰੰਗਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਪਹਿਲਾਂ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਹੈ [29]। ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਨੈੱਟਵਰਕਾਂ ਨੂੰ Zeiss Axio Observer ਇਨਵਰਟੇਡ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪ (Carl Zeiss Microimaging GmbH, Jena, Germany) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਇੱਕ Zeiss LSM 800 ਕਨਫੋਕਲ ਮੋਡੀਊਲ ਨਾਲ ਲੈਸ ਇੱਕ Zeiss LSM 800 ਕਨਫੋਕਲ ਮੋਡੀਊਲ ਨਾਲ 37 °C 'ਤੇ ਇੱਕ ਨਮੀ ਵਾਲੇ ਮਾਹੌਲ ਵਿੱਚ 63×NA 1.3 ਉਦੇਸ਼ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਵਿਜ਼ੂਅਲਾਈਜ਼ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਅਸੀਂ ਹਰੇਕ ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਕਿਸਮ ਲਈ ਦਸ Z-ਸੀਰੀਜ਼ ਚਿੱਤਰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ। ਹਰੇਕ Z-ਸੀਰੀਜ਼ ਵਿੱਚ 30 ਭਾਗ ਹਨ, ਹਰੇਕ ਦੀ ਮੋਟਾਈ 9.86 μm ਹੈ। ਹਰੇਕ ਨਮੂਨੇ ਲਈ, ZEN 2009 ਸੌਫਟਵੇਅਰ (ਕਾਰਲ ਜ਼ੀਸ ਮਾਈਕ੍ਰੋਇਮੇਜਿੰਗ GmbH, ਜੇਨਾ, ਜਰਮਨੀ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਦਸ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਦ੍ਰਿਸ਼ਟੀਕੋਣਾਂ ਦੀਆਂ ਤਸਵੀਰਾਂ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੀਆਂ ਗਈਆਂ ਸਨ, ਅਤੇ ਪੂਰਕ ਵਿਧੀਆਂ 3 ਵਿੱਚ ਦੱਸੇ ਗਏ ਮਾਪਦੰਡਾਂ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ImageJ ਸੌਫਟਵੇਅਰ (v1.54d) [30, 31] ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ 0.1 M ਫਾਸਫੇਟ ਬਫਰ ਵਿੱਚ 2% ਗਲੂਟਾਰਾਲਡੀਹਾਈਡ ਨਾਲ ਫਿਕਸ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਇਸ ਤੋਂ ਬਾਅਦ 1% ਓਸਮੀਅਮ ਟੈਟਰੋਆਕਸਾਈਡ ਘੋਲ (ਸਿਗਮਾ ਐਲਡਰਿਕ, MO, USA) ਨਾਲ ਫਿਕਸ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਹੌਲੀ-ਹੌਲੀ ਐਸੀਟੋਨ (ਮਰਕ, ਡਾਰਮਸਟੈਡ, ਜਰਮਨੀ) ਨਾਲ ਡੀਹਾਈਡਰੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ ਅੰਤ ਵਿੱਚ ਐਪੌਕਸੀ ਰਾਲ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਅਲਟਰਾਥਿਨ ਭਾਗ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ ਅਤੇ 1% ਯੂਰੇਨਾਇਲ ਐਸੀਟੇਟ (ਮਰਕ, ਡਾਰਮਸਟੈਡ, ਜਰਮਨੀ) ਅਤੇ 1% ਲੀਡ ਸਿਟਰੇਟ (ਮਰਕ, ਡਾਰਮਸਟੈਡ, ਜਰਮਨੀ) ਨਾਲ ਰੰਗੇ ਗਏ ਸਨ। 80 kV ਦੇ ਐਕਸਲਰੇਟਿਡ ਵੋਲਟੇਜ 'ਤੇ JEM 2100F EXII ਟ੍ਰਾਂਸਮਿਸ਼ਨ ਇਲੈਕਟ੍ਰੌਨ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪ (JEOL ਲਿਮਟਿਡ, ਟੋਕੀਓ, ਜਾਪਾਨ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਅਲਟਰਾਸਟ੍ਰਕਚਰਲ ਚਿੱਤਰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।
24 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ IPA ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਗਏ LX-2 ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ Zeiss ਇਨਵਰਟਿਡ ਲਾਈਟ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪ (Zeiss Axio Vert.A1 ਅਤੇ AxioCam MRm, Jena, Germany) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ 50x ਵਿਸਤਾਰ 'ਤੇ ਫੇਜ਼-ਕੰਟਰਾਸਟ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪੀ ਦੁਆਰਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਕਲੀਨਿਕਲ ਡੇਟਾ ਨੂੰ ਔਸਤ ± ਮਿਆਰੀ ਭਟਕਣਾ ਜਾਂ ਮੱਧਮਾਨ (ਇੰਟਰਕੁਆਰਟਾਈਲ ਰੇਂਜ: IQR) ਵਜੋਂ ਦਰਸਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਤਿੰਨ ਅਧਿਐਨ ਸਮੂਹਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਅੰਤਰਾਂ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਕਰਨ ਲਈ ਪਰਿਵਰਤਨ (ਨਿਰੰਤਰ ਵੇਰੀਏਬਲ) ਜਾਂ χ² ਟੈਸਟ (ਸ਼੍ਰੇਣੀਗਤ ਵੇਰੀਏਬਲ) ਦਾ ਇੱਕ-ਪਾਸੜ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਗਲਤ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਦਰ (FDR) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਮਲਟੀਪਲ ਟੈਸਟਿੰਗ ਲਈ ਸੁਧਾਰ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ, ਅਤੇ FDR < 0.05 ਵਾਲੇ ਜੀਨਾਂ ਨੂੰ ਅੰਕੜਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਮੰਨਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਸਪੀਅਰਮੈਨ ਸਹਿ-ਸੰਬੰਧ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੀ ਵਰਤੋਂ IPA ਸਿਗਨਲ ਤੀਬਰਤਾ ਨਾਲ CpG DNA ਮਿਥਾਈਲੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਜੋੜਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਨਾਮਾਤਰ p ਮੁੱਲ (p < 0.05) ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।
ਪਾਥਵੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਇੱਕ ਵੈੱਬ-ਅਧਾਰਤ ਜੀਨ ਸੈੱਟ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਟੂਲ (ਵੈਬਜੈਸਟਾਲਟ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ 268 ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਾਂ (ਨਾਮਮਾਤਰ ਪੀ < 0.01), 119 ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਆ-ਸਬੰਧਤ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਾਂ (ਨਾਮਮਾਤਰ ਪੀ < 0.05), ਅਤੇ 3093 ਜਿਗਰ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਾਂ ਵਿੱਚੋਂ 4350 CpGs ਲਈ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜੋ ਸਰਕੂਲੇਟਿੰਗ ਸੀਰਮ IPA ਪੱਧਰਾਂ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਹੋਏ ਸਨ। ਮੁਫ਼ਤ ਵਿੱਚ ਉਪਲਬਧ ਵੈਨੀ ਡੀਬੀ (ਵਰਜਨ 2.1.0) ਟੂਲ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਓਵਰਲੈਪਿੰਗ ਜੀਨਾਂ ਨੂੰ ਲੱਭਣ ਲਈ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ, ਅਤੇ ਸਟ੍ਰਿੰਗਡੀਬੀ (ਵਰਜਨ 11.5) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਪ੍ਰੋਟੀਨ-ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨੂੰ ਕਲਪਨਾ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।
LX-2 ਪ੍ਰਯੋਗ ਲਈ, ਡੀ'ਅਗੋਸਟੀਨੋ-ਪੀਅਰਸਨ ਟੈਸਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੀ ਸਧਾਰਣਤਾ ਲਈ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਗਈ। ਡੇਟਾ ਘੱਟੋ-ਘੱਟ ਤਿੰਨ ਜੈਵਿਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀਆਂ ਤੋਂ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਬੋਨਫੈਰੋਨੀ ਪੋਸਟਹਾਕ ਟੈਸਟ ਦੇ ਨਾਲ ਇੱਕ-ਪਾਸੜ ANOVA ਦੇ ਅਧੀਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। 0.05 ਤੋਂ ਘੱਟ ਦੇ p-ਮੁੱਲ ਨੂੰ ਅੰਕੜਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਮੰਨਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਡੇਟਾ ਨੂੰ ਔਸਤ ± SD ਵਜੋਂ ਪੇਸ਼ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ, ਅਤੇ ਹਰੇਕ ਚਿੱਤਰ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਦੀ ਸੰਖਿਆ ਦਰਸਾਈ ਗਈ ਹੈ। ਸਾਰੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਅਤੇ ਗ੍ਰਾਫ ਵਿੰਡੋਜ਼ ਲਈ ਗ੍ਰਾਫਪੈਡ ਪ੍ਰਿਜ਼ਮ 8 ਅੰਕੜਾ ਸਾਫਟਵੇਅਰ (ਗ੍ਰਾਫਪੈਡ ਸਾਫਟਵੇਅਰ ਇੰਕ., ਸੰਸਕਰਣ 8.4.3, ਸੈਨ ਡਿਏਗੋ, ਅਮਰੀਕਾ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।
ਪਹਿਲਾਂ, ਅਸੀਂ ਸੀਰਮ IPA ਪੱਧਰਾਂ ਦੇ ਜਿਗਰ, ਪੂਰੇ ਸਰੀਰ ਅਤੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਾਂ ਨਾਲ ਸਬੰਧ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ। ਕੁੱਲ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟ ਪ੍ਰੋਫਾਈਲ ਵਿੱਚ, ਸੀਰਮ IPA ਪੱਧਰਾਂ ਨਾਲ ਜੁੜਿਆ ਸਭ ਤੋਂ ਮਜ਼ਬੂਤ ​​ਜੀਨ MAPKAPK3 (FDR = 0.0077; ਮਾਈਟੋਜਨ-ਐਕਟੀਵੇਟਿਡ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਕਾਇਨੇਜ-ਐਕਟੀਵੇਟਿਡ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਕਾਇਨੇਜ 3) ਸੀ; ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਆ-ਸਬੰਧਤ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟ ਪ੍ਰੋਫਾਈਲ ਵਿੱਚ, ਸਭ ਤੋਂ ਮਜ਼ਬੂਤ ​​ਸੰਬੰਧਿਤ ਜੀਨ AKT1 (FDR = 0.7621; AKT ਸੀਰੀਨ/ਥ੍ਰੀਓਨਾਈਨ ਕਾਇਨੇਜ 1) (ਵਾਧੂ ਫਾਈਲ 1 ਅਤੇ ਵਾਧੂ ਫਾਈਲ 2) ਸੀ।
ਫਿਰ ਅਸੀਂ ਗਲੋਬਲ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਾਂ (n = 268; p < 0.01) ਅਤੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਆ-ਸਬੰਧਤ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਾਂ (n = 119; p < 0.05) ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ, ਅੰਤ ਵਿੱਚ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਨੂੰ ਸਭ ਤੋਂ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਕੈਨੋਨੀਕਲ ਮਾਰਗ (p = 0.0089) ਵਜੋਂ ਪਛਾਣਿਆ। ਸੀਰਮ IPA ਪੱਧਰਾਂ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਾਂ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ (FDR = 0.00001), ਮਾਈਟੋਫੈਜੀ (FDR = 0.00029), ਅਤੇ TNF ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਮਾਰਗਾਂ (FDR = 0.000006) (ਚਿੱਤਰ 1A, ਸਾਰਣੀ 2, ਅਤੇ ਪੂਰਕ ਅੰਕੜੇ 1A-B) 'ਤੇ ਧਿਆਨ ਕੇਂਦਰਿਤ ਕੀਤਾ।
ਸੀਰਮ IPA ਪੱਧਰਾਂ ਦੇ ਨਾਲ ਮਨੁੱਖੀ ਜਿਗਰ ਵਿੱਚ ਗਲੋਬਲ, ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਆ-ਸਬੰਧਤ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਾਂ ਅਤੇ DNA ਮਿਥਾਈਲੇਸ਼ਨ ਦਾ ਓਵਰਲੈਪਿੰਗ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ। A 268 ਗਲੋਬਲ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਾਂ, 119 ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਆ-ਸਬੰਧਤ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਾਂ, ਅਤੇ DNA ਮਿਥਾਈਲੇਟਿਡ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਾਂ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਜੋ ਸੀਰਮ IPA ਪੱਧਰਾਂ ਨਾਲ ਸੰਬੰਧਿਤ 3092 CpG ਸਾਈਟਾਂ ਨਾਲ ਮੈਪ ਕੀਤੇ ਗਏ ਹਨ (ਗਲੋਬਲ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਾਂ ਅਤੇ DNA ਮਿਥਾਈਲੇਟਿਡ ਲਈ p ਮੁੱਲ < 0.01, ਅਤੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਾਂ ਲਈ p ਮੁੱਲ < 0.05)। ਮੁੱਖ ਓਵਰਲੈਪਿੰਗ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਾਂ ਨੂੰ ਵਿਚਕਾਰ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ (AKT1 ਅਤੇ YKT6)। B ਹੋਰ ਜੀਨਾਂ ਨਾਲ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਇੰਟਰੈਕਸ਼ਨ ਸਕੋਰ (0.900) ਵਾਲੇ 13 ਜੀਨਾਂ ਦਾ ਇੰਟਰੈਕਸ਼ਨ ਮੈਪ 56 ਓਵਰਲੈਪਿੰਗ ਜੀਨਾਂ (ਕਾਲੀ ਲਾਈਨ ਖੇਤਰ) ਤੋਂ ਬਣਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ ਜੋ ਔਨਲਾਈਨ ਟੂਲ StringDB ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਸੀਰਮ IPA ਪੱਧਰਾਂ ਨਾਲ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤੌਰ 'ਤੇ ਜੁੜੇ ਹੋਏ ਸਨ। ਹਰਾ: ਜੀਨ ਓਨਟੋਲੋਜੀ (GO) ਸੈਲੂਲਰ ਕੰਪੋਨੈਂਟ ਨਾਲ ਮੈਪ ਕੀਤੇ ਗਏ: ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਆ (GO:0005739)। AKT1 ਉਹ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਹੈ ਜਿਸਦਾ ਡੇਟਾ (ਟੈਕਸਟ ਮਾਈਨਿੰਗ, ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ, ਡੇਟਾਬੇਸਾਂ ਅਤੇ ਸਹਿ-ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਦੇ ਅਧਾਰ ਤੇ) ਦੇ ਅਧਾਰ ਤੇ ਦੂਜੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨਾਂ ਨਾਲ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ ਲਈ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਸਕੋਰ (0.900) ਹੈ। ਨੈੱਟਵਰਕ ਨੋਡ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਕਿਨਾਰੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਵਿਚਕਾਰ ਕਨੈਕਸ਼ਨਾਂ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ।
ਕਿਉਂਕਿ ਅੰਤੜੀਆਂ ਦੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਬਾਇਓਟਾ ਮੈਟਾਬੋਲਾਈਟਸ ਡੀਐਨਏ ਮਿਥਾਈਲੇਸ਼ਨ [32] ਰਾਹੀਂ ਐਪੀਜੇਨੇਟਿਕ ਰਚਨਾ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਅਸੀਂ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਕਿ ਕੀ ਸੀਰਮ ਆਈਪੀਏ ਪੱਧਰ ਜਿਗਰ ਡੀਐਨਏ ਮਿਥਾਈਲੇਸ਼ਨ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਹੋਏ ਸਨ। ਅਸੀਂ ਪਾਇਆ ਕਿ ਸੀਰਮ ਆਈਪੀਏ ਪੱਧਰਾਂ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਦੋ ਪ੍ਰਮੁੱਖ ਮਿਥਾਈਲੇਸ਼ਨ ਸਾਈਟਾਂ ਪ੍ਰੋਲਾਈਨ-ਸੀਰੀਨ-ਅਮੀਰ ਖੇਤਰ 3 (C19orf55) ਅਤੇ ਹੀਟ ਸ਼ੌਕ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਪਰਿਵਾਰ ਬੀ (ਛੋਟਾ) ਮੈਂਬਰ 6 (HSPB6) (ਵਾਧੂ ਫਾਈਲ 3) ਦੇ ਨੇੜੇ ਸਨ। 4350 CpG (p < 0.01) ਦਾ ਡੀਐਨਏ ਮਿਥਾਈਲੇਸ਼ਨ ਸੀਰਮ ਆਈਪੀਏ ਪੱਧਰਾਂ ਨਾਲ ਸੰਬੰਧਿਤ ਸੀ ਅਤੇ ਲੰਬੀ ਉਮਰ ਦੇ ਰੈਗੂਲੇਟਰੀ ਮਾਰਗਾਂ (p = 0.006) (ਚਿੱਤਰ 1A, ਸਾਰਣੀ 2, ਅਤੇ ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 1C) ਵਿੱਚ ਭਰਪੂਰ ਸੀ।
ਮਨੁੱਖੀ ਜਿਗਰ ਵਿੱਚ ਸੀਰਮ IPA ਪੱਧਰਾਂ, ਗਲੋਬਲ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਾਂ, ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਆ-ਸਬੰਧਤ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਾਂ, ਅਤੇ DNA ਮਿਥਾਈਲੇਸ਼ਨ ਵਿਚਕਾਰ ਸਬੰਧਾਂ ਨੂੰ ਸਮਝਣ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਪਿਛਲੇ ਪਾਥਵੇਅ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ (ਚਿੱਤਰ 1A) ਵਿੱਚ ਪਛਾਣੇ ਗਏ ਜੀਨਾਂ ਦਾ ਇੱਕ ਓਵਰਲੈਪ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ। 56 ਓਵਰਲੈਪਿੰਗ ਜੀਨਾਂ (ਚਿੱਤਰ 1A ਵਿੱਚ ਕਾਲੀ ਲਾਈਨ ਦੇ ਅੰਦਰ) ਦੇ ਪਾਥਵੇਅ ਸੰਸ਼ੋਧਨ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੇ ਨਤੀਜਿਆਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਪਾਥਵੇਅ (p = 0.00029) ਨੇ ਤਿੰਨ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣਾਂ ਵਿੱਚ ਆਮ ਦੋ ਜੀਨਾਂ ਨੂੰ ਉਜਾਗਰ ਕੀਤਾ: AKT1 ਅਤੇ YKT6 (YKT6 v-SNARE homolog), ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਵੇਨ ਚਿੱਤਰ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 2 ਅਤੇ ਚਿੱਤਰ 1A) ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ। ਦਿਲਚਸਪ ਗੱਲ ਇਹ ਹੈ ਕਿ, ਅਸੀਂ ਪਾਇਆ ਕਿ AKT1 (cg19831386) ਅਤੇ YKT6 (cg24161647) ਸੀਰਮ IPA ਪੱਧਰਾਂ (ਵਾਧੂ ਫਾਈਲ 3) ਨਾਲ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੰਬੰਧਿਤ ਸਨ। ਜੀਨ ਉਤਪਾਦਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਸੰਭਾਵੀ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕਰਨ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਇਨਪੁਟ ਵਜੋਂ 56 ਓਵਰਲੈਪਿੰਗ ਜੀਨਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਆਮ ਖੇਤਰ ਸਕੋਰ (0.900) ਵਾਲੇ 13 ਜੀਨਾਂ ਦੀ ਚੋਣ ਕੀਤੀ ਅਤੇ ਇੱਕ ਇੰਟਰਐਕਸ਼ਨ ਮੈਪ ਬਣਾਇਆ। ਵਿਸ਼ਵਾਸ ਪੱਧਰ (ਹਾਸ਼ੀਏ 'ਤੇ ਵਿਸ਼ਵਾਸ) ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ, ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਸਕੋਰ (0.900) ਵਾਲਾ AKT1 ਜੀਨ ਸਿਖਰ 'ਤੇ ਸੀ (ਚਿੱਤਰ 1B)।
ਪਾਥਵੇਅ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ, ਅਸੀਂ ਪਾਇਆ ਕਿ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਮੁੱਖ ਪਾਥਵੇਅ ਸੀ, ਇਸ ਲਈ ਅਸੀਂ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਕਿ ਕੀ IPA ਇਲਾਜ ਇਨ ਵਿਟਰੋ HSCs ਦੇ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਕਰੇਗਾ। ਅਸੀਂ ਪਹਿਲਾਂ ਦਿਖਾਇਆ ਸੀ ਕਿ IPA ਦੀਆਂ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਖੁਰਾਕਾਂ (10 μM, 100 μM, ਅਤੇ 1 mM) LX-2 ਸੈੱਲਾਂ ਲਈ ਗੈਰ-ਜ਼ਹਿਰੀਲੀਆਂ ਸਨ [15]। ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ 10 μM ਅਤੇ 100 μM 'ਤੇ IPA ਇਲਾਜ ਨੇ ਵਿਵਹਾਰਕ ਅਤੇ ਨੈਕਰੋਟਿਕ ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਵਧਾ ਦਿੱਤੀ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਨਿਯੰਤਰਣ ਸਮੂਹ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ, ਸੈੱਲ ਵਿਵਹਾਰਕਤਾ 1 mM IPA ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 'ਤੇ ਘਟੀ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਸੈੱਲ ਨੈਕਰੋਸਿਸ ਦਰ ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਬਦਲਾਅ ਨਹੀਂ ਰਿਹਾ (ਚਿੱਤਰ 2A, B)। ਅੱਗੇ, LX-2 ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਅਨੁਕੂਲ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਲੱਭਣ ਲਈ, ਅਸੀਂ 24 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ 10 μM, 100 μM, ਅਤੇ 1 mM IPA ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ (ਚਿੱਤਰ 2A-E ਅਤੇ ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 3A-B)। ਦਿਲਚਸਪ ਗੱਲ ਇਹ ਹੈ ਕਿ, IPA 10 μM ਅਤੇ 100 μM ਨੇ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਦਰ (%) ਨੂੰ ਘਟਾ ਦਿੱਤਾ, ਹਾਲਾਂਕਿ, IPA 1 mM ਨੇ ਨਿਯੰਤਰਣ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਦੇਰ ਨਾਲ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਅਤੇ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਦਰ (%) ਨੂੰ ਵਧਾਇਆ ਅਤੇ ਇਸ ਲਈ ਇਸਨੂੰ ਹੋਰ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਲਈ ਚੁਣਿਆ ਗਿਆ (ਚਿੱਤਰ 2A–D)।
IPA LX-2 ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਫਲੋ ਸਾਇਟੋਮੈਟਰੀ ਦੁਆਰਾ ਐਪੋਪਟੋਟਿਕ ਰੇਟ ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨ ਨੂੰ ਮਾਪਣ ਲਈ Annexin V ਅਤੇ 7-AAD ਡਬਲ ਸਟੈਨਿੰਗ ਵਿਧੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। BA ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ 24 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ 10 μM, 100 μM ਅਤੇ 1 mM IPA ਨਾਲ ਜਾਂ F–H TGF-β1 (5 ng/ml) ਅਤੇ 1 mM IPA ਨਾਲ ਸੀਰਮ-ਮੁਕਤ ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ 24 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ ਇਨਕਿਊਬੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। A: ਜੀਵਤ ਸੈੱਲ (Annexin V -/ 7AAD-); B: necrotic ਸੈੱਲ (Annexin V -/ 7AAD+); C, F: ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ (Annexin V +/ 7AAD-); D, G: ਦੇਰ ਨਾਲ (Annexin V+/7AAD.+); E, H: ਐਪੋਪਟੋਟਿਕ ਰੇਟ (%) ਵਿੱਚ ਕੁੱਲ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਅਤੇ ਦੇਰ ਨਾਲ ਐਪੋਪਟੋਟਿਕ ਸੈੱਲਾਂ ਦਾ ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤ। ਡੇਟਾ ਨੂੰ ਔਸਤ ± SD, n = 3 ਸੁਤੰਤਰ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਵਜੋਂ ਦਰਸਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ। ਬੋਨਫੈਰੋਨੀ ਪੋਸਟ ਹਾਕ ਟੈਸਟ ਦੇ ਨਾਲ ਇੱਕ-ਪਾਸੜ ANOVA ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਅੰਕੜਾਤਮਕ ਤੁਲਨਾਵਾਂ ਕੀਤੀਆਂ ਗਈਆਂ। *p < 0.05; ****p < 0.0001
ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਅਸੀਂ ਪਹਿਲਾਂ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ, 5 ng/ml TGF-β1 ਕਲਾਸੀਕਲ ਮਾਰਕਰ ਜੀਨਾਂ ਦੀ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਨੂੰ ਵਧਾ ਕੇ HSC ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ [15]। LX-2 ਸੈੱਲਾਂ ਦਾ ਇਲਾਜ 5 ng/ml TGF-β1 ਅਤੇ 1 mM IPA ਦੇ ਸੁਮੇਲ ਨਾਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ (ਚਿੱਤਰ 2E–H)। TGF-β1 ਇਲਾਜ ਨੇ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਦਰ ਨੂੰ ਨਹੀਂ ਬਦਲਿਆ, ਹਾਲਾਂਕਿ, IPA ਸਹਿ-ਇਲਾਜ ਨੇ TGF-β1 ਇਲਾਜ (ਚਿੱਤਰ 2E–H) ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਦੇਰ ਨਾਲ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਅਤੇ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਦਰ (%) ਨੂੰ ਵਧਾਇਆ। ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ 1 mM IPA TGF-β1 ਇੰਡਕਸ਼ਨ ਤੋਂ ਸੁਤੰਤਰ ਤੌਰ 'ਤੇ LX-2 ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਅਸੀਂ LX-2 ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਸਾਹ ਲੈਣ 'ਤੇ IPA ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦੀ ਹੋਰ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ। ਨਤੀਜਿਆਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ 1 mM IPA ਨੇ ਆਕਸੀਜਨ ਖਪਤ ਦਰ (OCR) ਮਾਪਦੰਡਾਂ ਨੂੰ ਘਟਾਇਆ: ਗੈਰ-ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਸਾਹ ਲੈਣ, ਬੇਸਲ ਅਤੇ ਵੱਧ ਤੋਂ ਵੱਧ ਸਾਹ ਲੈਣ, ਪ੍ਰੋਟੋਨ ਲੀਕ ਅਤੇ ATP ਉਤਪਾਦਨ ਕੰਟਰੋਲ ਸਮੂਹ (ਚਿੱਤਰ 3A, B) ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਬਾਇਓਐਨਰਜੈਟਿਕ ਸਿਹਤ ਸੂਚਕਾਂਕ (BHI) ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਬਦਲਾਅ ਨਹੀਂ ਆਇਆ।
IPA LX-2 ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਸਾਹ ਘਟਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਸਾਹ ਵਕਰ (OCR) ਨੂੰ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਸਾਹ ਪੈਰਾਮੀਟਰਾਂ (ਗੈਰ-ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਸਾਹ, ਬੇਸਲ ਸਾਹ, ਵੱਧ ਤੋਂ ਵੱਧ ਸਾਹ, ਪ੍ਰੋਟੋਨ ਲੀਕ, ATP ਪੀੜ੍ਹੀ, SRC ਅਤੇ BHI) ਵਜੋਂ ਪੇਸ਼ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ। ਸੈੱਲ A ਅਤੇ B ਨੂੰ ਕ੍ਰਮਵਾਰ 10 μM, 100 μM ਅਤੇ 1 mM IPA ਨਾਲ 24 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ ਇਨਕਿਊਬੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਸੈੱਲ C ਅਤੇ D ਨੂੰ ਕ੍ਰਮਵਾਰ TGF-β1 (5 ng/ml) ਅਤੇ 1 mM IPA ਨਾਲ ਸੀਰਮ-ਮੁਕਤ ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ 24 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ ਇਨਕਿਊਬੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਸਾਰੇ ਮਾਪਾਂ ਨੂੰ CyQuant ਕਿੱਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ DNA ਸਮੱਗਰੀ ਲਈ ਆਮ ਬਣਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ। BHI: ਬਾਇਓਐਨਰਜੈਟਿਕ ਸਿਹਤ ਸੂਚਕਾਂਕ; SRC: ਸਾਹ ਰਿਜ਼ਰਵ ਸਮਰੱਥਾ; OCR: ਆਕਸੀਜਨ ਖਪਤ ਦਰ। ਡੇਟਾ ਨੂੰ ਔਸਤ ± ਮਿਆਰੀ ਭਟਕਣਾ (SD), n = 5 ਸੁਤੰਤਰ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਵਜੋਂ ਪੇਸ਼ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ। ਇੱਕ-ਪਾਸੜ ANOVA ਅਤੇ ਬੋਨਫੈਰੋਨੀ ਪੋਸਟਹਾਕ ਟੈਸਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਅੰਕੜਾਤਮਕ ਤੁਲਨਾਵਾਂ ਕੀਤੀਆਂ ਗਈਆਂ ਸਨ। *p < 0.05; **p < 0.01; ਅਤੇ ***p < 0.001
TGF-β1-ਐਕਟੀਵੇਟਿਡ LX-2 ਸੈੱਲਾਂ ਦੇ ਬਾਇਓਐਨਰਜੈਟਿਕ ਪ੍ਰੋਫਾਈਲ 'ਤੇ IPA ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦੀ ਵਧੇਰੇ ਵਿਆਪਕ ਸਮਝ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ, ਅਸੀਂ OCR (ਚਿੱਤਰ 3C,D) ਦੁਆਰਾ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਆਕਸੀਡੇਟਿਵ ਫਾਸਫੋਰਿਲੇਸ਼ਨ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ। ਨਤੀਜਿਆਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ TGF-β1 ਇਲਾਜ ਕੰਟਰੋਲ ਸਮੂਹ (ਚਿੱਤਰ 3C,D) ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਵੱਧ ਤੋਂ ਵੱਧ ਸਾਹ, ਸਾਹ ਰਿਜ਼ਰਵ ਸਮਰੱਥਾ (SRC) ਅਤੇ BHI ਨੂੰ ਘਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਸੁਮੇਲ ਇਲਾਜ ਨੇ ਬੇਸਲ ਸਾਹ, ਪ੍ਰੋਟੋਨ ਲੀਕ ਅਤੇ ATP ਉਤਪਾਦਨ ਨੂੰ ਘਟਾ ਦਿੱਤਾ, ਪਰ SRC ਅਤੇ BHI TGF-β1 (ਚਿੱਤਰ 3C,D) ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਗਏ ਲੋਕਾਂ ਨਾਲੋਂ ਕਾਫ਼ੀ ਜ਼ਿਆਦਾ ਸਨ।
ਅਸੀਂ ਸੀਹੋਰਸ ਸੌਫਟਵੇਅਰ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 4A–D) ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ "ਸੈਲੂਲਰ ਐਨਰਜੀ ਫੀਨੋਟਾਈਪ ਟੈਸਟ" ਵੀ ਕੀਤਾ। ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 3B ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ, TGF-β1 ਇਲਾਜ ਤੋਂ ਬਾਅਦ OCR ਅਤੇ ECAR ਦੋਵੇਂ ਮੈਟਾਬੋਲਿਕ ਸੰਭਾਵੀ ਘੱਟ ਗਏ ਸਨ, ਹਾਲਾਂਕਿ, ਨਿਯੰਤਰਣ ਸਮੂਹ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਸੁਮੇਲ ਅਤੇ IPA ਇਲਾਜ ਸਮੂਹਾਂ ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਅੰਤਰ ਨਹੀਂ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਨਿਯੰਤਰਣ ਸਮੂਹ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 4C) ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਸੁਮੇਲ ਅਤੇ IPA ਇਲਾਜ ਤੋਂ ਬਾਅਦ OCR ਦੇ ਬੇਸਲ ਅਤੇ ਤਣਾਅ ਦੇ ਪੱਧਰ ਦੋਵੇਂ ਘੱਟ ਗਏ ਸਨ। ਦਿਲਚਸਪ ਗੱਲ ਇਹ ਹੈ ਕਿ, ਸੁਮੇਲ ਥੈਰੇਪੀ ਦੇ ਨਾਲ ਇੱਕ ਸਮਾਨ ਪੈਟਰਨ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ, ਜਿੱਥੇ TGF-β1 ਇਲਾਜ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ECAR ਦੇ ਬੇਸਲ ਅਤੇ ਤਣਾਅ ਦੇ ਪੱਧਰਾਂ ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਬਦਲਾਅ ਨਹੀਂ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 4C)। HSCs ਵਿੱਚ, ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਆਕਸੀਡੇਟਿਵ ਫਾਸਫੋਰਿਲੇਸ਼ਨ ਵਿੱਚ ਕਮੀ ਅਤੇ TGF-β1 ਇਲਾਜ ਦੇ ਸੰਪਰਕ ਤੋਂ ਬਾਅਦ SCR ਅਤੇ BHI ਨੂੰ ਬਹਾਲ ਕਰਨ ਲਈ ਸੁਮੇਲ ਇਲਾਜ ਦੀ ਯੋਗਤਾ ਨੇ ਮੈਟਾਬੋਲਿਕ ਸੰਭਾਵੀ (OCR ਅਤੇ ECAR) ਨੂੰ ਨਹੀਂ ਬਦਲਿਆ। ਇਕੱਠੇ ਕੀਤੇ ਜਾਣ 'ਤੇ, ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ IPA HSCs ਵਿੱਚ ਬਾਇਓਐਨਰਜੈਟਿਕਸ ਨੂੰ ਘਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਇਹ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ IPA ਇੱਕ ਘੱਟ ਊਰਜਾਵਾਨ ਪ੍ਰੋਫਾਈਲ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ ਜੋ HSC ਫੀਨੋਟਾਈਪ ਨੂੰ ਅਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲਤਾ ਵੱਲ ਬਦਲਦਾ ਹੈ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 4D)।
ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਡਾਇਨਾਮਿਕਸ 'ਤੇ IPA ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦੀ ਜਾਂਚ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨ ਅਤੇ ਨੈੱਟਵਰਕ ਕਨੈਕਸ਼ਨਾਂ ਦੇ ਤਿੰਨ-ਅਯਾਮੀ ਮਾਤਰਾਕਰਨ ਦੇ ਨਾਲ-ਨਾਲ MTR ਸਟੈਨਿੰਗ (ਚਿੱਤਰ 4 ਅਤੇ ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 5) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤੀ ਗਈ। ਚਿੱਤਰ 4 ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ, ਨਿਯੰਤਰਣ ਸਮੂਹ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ, TGF-β1 ਇਲਾਜ ਨੇ ਔਸਤ ਸਤਹ ਖੇਤਰ, ਸ਼ਾਖਾ ਨੰਬਰ, ਕੁੱਲ ਸ਼ਾਖਾ ਲੰਬਾਈ, ਅਤੇ ਸ਼ਾਖਾ ਜੰਕਸ਼ਨ ਨੰਬਰ (ਚਿੱਤਰ 4A ਅਤੇ B) ਨੂੰ ਘਟਾ ਦਿੱਤਾ ਅਤੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਆ ਦੇ ਅਨੁਪਾਤ ਨੂੰ ਗੋਲਾਕਾਰ ਤੋਂ ਵਿਚਕਾਰਲੇ ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨ (ਚਿੱਤਰ 4C) ਵਿੱਚ ਬਦਲ ਦਿੱਤਾ। ਸਿਰਫ਼ IPA ਇਲਾਜ ਨੇ ਔਸਤ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਵਾਲੀਅਮ ਨੂੰ ਘਟਾ ਦਿੱਤਾ ਅਤੇ ਕੰਟਰੋਲ ਸਮੂਹ (ਚਿੱਤਰ 4A) ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਆ ਦੇ ਅਨੁਪਾਤ ਨੂੰ ਗੋਲਾਕਾਰ ਤੋਂ ਵਿਚਕਾਰਲੇ ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨ ਵਿੱਚ ਬਦਲ ਦਿੱਤਾ। ਇਸਦੇ ਉਲਟ, ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਝਿੱਲੀ ਸੰਭਾਵੀ-ਨਿਰਭਰ MTR (ਚਿੱਤਰ 4A ਅਤੇ E) ਦੁਆਰਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕੀਤੀ ਗਈ ਗੋਲਾਕਾਰਤਾ, ਔਸਤ ਸ਼ਾਖਾ ਲੰਬਾਈ, ਅਤੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਗਤੀਵਿਧੀ ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਬਦਲਾਅ ਨਹੀਂ ਰਿਹਾ ਅਤੇ ਇਹ ਮਾਪਦੰਡ ਸਮੂਹਾਂ ਵਿੱਚ ਵੱਖਰੇ ਨਹੀਂ ਸਨ। ਇਕੱਠੇ ਲਏ ਜਾਣ 'ਤੇ, ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਕਿ TGF-β1 ਅਤੇ IPA ਇਲਾਜ ਜੀਵਤ LX-2 ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਆਕਾਰ ਅਤੇ ਆਕਾਰ ਦੇ ਨਾਲ-ਨਾਲ ਨੈੱਟਵਰਕ ਜਟਿਲਤਾ ਨੂੰ ਸੰਸ਼ੋਧਿਤ ਕਰਦੇ ਦਿਖਾਈ ਦਿੰਦੇ ਹਨ।
IPA LX-2 ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਗਤੀਸ਼ੀਲਤਾ ਅਤੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ DNA ਭਰਪੂਰਤਾ ਨੂੰ ਬਦਲਦਾ ਹੈ। A. ਸੀਰਮ-ਮੁਕਤ ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ 24 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ TGF-β1 (5 ng/ml) ਅਤੇ 1 mM IPA ਨਾਲ ਇਨਕਿਊਬੇਟ ਕੀਤੇ ਲਾਈਵ LX-2 ਸੈੱਲਾਂ ਦੀਆਂ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧੀ ਕਨਫੋਕਲ ਤਸਵੀਰਾਂ ਜੋ Mitotracker™ Red CMXRos ਨਾਲ ਰੰਗੇ ਹੋਏ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਨੈੱਟਵਰਕਾਂ ਅਤੇ DAPI ਨਾਲ ਨਿਊਕਲੀਅਸ ਰੰਗੇ ਹੋਏ ਨੀਲੇ ਰੰਗ ਦੇ ਦਿਖਾਉਂਦੀਆਂ ਹਨ। ਸਾਰੇ ਡੇਟਾ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਤੀ ਸਮੂਹ ਘੱਟੋ-ਘੱਟ 15 ਤਸਵੀਰਾਂ ਸਨ। ਅਸੀਂ ਹਰੇਕ ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਕਿਸਮ ਲਈ 10 Z-ਸਟੈਕ ਚਿੱਤਰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ। ਹਰੇਕ Z-ਧੁਰੀ ਕ੍ਰਮ ਵਿੱਚ 30 ਟੁਕੜੇ ਸਨ, ਹਰੇਕ ਦੀ ਮੋਟਾਈ 9.86 μm ਸੀ। ਸਕੇਲ ਬਾਰ: 10 μm। B. ਚਿੱਤਰ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਥ੍ਰੈਸ਼ਹੋਲਡਿੰਗ ਲਾਗੂ ਕਰਕੇ ਪਛਾਣੇ ਗਏ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧੀ ਵਸਤੂਆਂ (ਸਿਰਫ਼ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਆ) ਦੀ ਪਛਾਣ ਕੀਤੀ ਗਈ। ਹਰੇਕ ਸਮੂਹ ਵਿੱਚ ਸਾਰੇ ਸੈੱਲਾਂ ਲਈ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨਿਕ ਨੈੱਟਵਰਕ ਕਨੈਕਸ਼ਨਾਂ ਦਾ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਅਤੇ ਤੁਲਨਾ ਕੀਤੀ ਗਈ। C. ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਆਕਾਰ ਅਨੁਪਾਤ ਦੀ ਬਾਰੰਬਾਰਤਾ। 0 ਦੇ ਨੇੜੇ ਮੁੱਲ ਗੋਲਾਕਾਰ ਆਕਾਰਾਂ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ 1 ਦੇ ਨੇੜੇ ਮੁੱਲ ਫਿਲਾਮੈਂਟਸ ਆਕਾਰਾਂ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ। ਡੀ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਡੀਐਨਏ (mtDNA) ਸਮੱਗਰੀ ਨੂੰ ਸਮੱਗਰੀ ਅਤੇ ਵਿਧੀਆਂ ਵਿੱਚ ਦੱਸੇ ਅਨੁਸਾਰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। E ਮਾਈਟੋਟ੍ਰੈਕਰ™ ਰੈੱਡ CMXRos ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਫਲੋ ਸਾਇਟੋਮੈਟਰੀ (30,000 ਘਟਨਾਵਾਂ) ਦੁਆਰਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਸਮੱਗਰੀ ਅਤੇ ਵਿਧੀਆਂ ਵਿੱਚ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਹੈ। ਡੇਟਾ ਨੂੰ ਔਸਤ ± SD, n = 3 ਸੁਤੰਤਰ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਵਜੋਂ ਪੇਸ਼ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ। ਇੱਕ-ਪਾਸੜ ANOVA ਅਤੇ ਬੋਨਫੈਰੋਨੀ ਪੋਸਟਹਾਕ ਟੈਸਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਅੰਕੜਾਤਮਕ ਤੁਲਨਾਵਾਂ ਕੀਤੀਆਂ ਗਈਆਂ ਸਨ। *p < 0.05; **p < 0.01; ***p < 0.001; ****p < 0.0001
ਫਿਰ ਅਸੀਂ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਸੰਖਿਆ ਦੇ ਸੂਚਕ ਵਜੋਂ LX-2 ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ mtDNA ਸਮੱਗਰੀ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ। ਕੰਟਰੋਲ ਸਮੂਹ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ, TGF-β1-ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਸਮੂਹ (ਚਿੱਤਰ 4D) ਵਿੱਚ mtDNA ਸਮੱਗਰੀ ਵਧਾਈ ਗਈ ਸੀ। TGF-β1-ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਸਮੂਹ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ, ਮਿਸ਼ਰਨ ਇਲਾਜ ਸਮੂਹ (ਚਿੱਤਰ 4D) ਵਿੱਚ mtDNA ਸਮੱਗਰੀ ਘਟਾਈ ਗਈ ਸੀ, ਜੋ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੀ ਹੈ ਕਿ IPA mtDNA ਸਮੱਗਰੀ ਅਤੇ ਸੰਭਵ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਸੰਖਿਆ ਦੇ ਨਾਲ-ਨਾਲ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਸਾਹ (ਚਿੱਤਰ 3C) ਨੂੰ ਘਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, IPA ਮਿਸ਼ਰਨ ਇਲਾਜ ਵਿੱਚ mtDNA ਸਮੱਗਰੀ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦਾ ਜਾਪਦਾ ਸੀ ਪਰ MTR-ਵਿਚੋਲੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਗਤੀਵਿਧੀ (ਚਿੱਤਰ 4A-C) ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਨਹੀਂ ਕਰਦਾ ਸੀ।
ਅਸੀਂ LX-2 ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ, ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ, ਸਰਵਾਈਵਲ, ਅਤੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਡਾਇਨਾਮਿਕਸ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਜੀਨਾਂ ਦੇ mRNA ਪੱਧਰਾਂ ਨਾਲ IPA ਦੇ ਸਬੰਧ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ (ਚਿੱਤਰ 5A–D)। ਕੰਟਰੋਲ ਗਰੁੱਪ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ, TGF-β1-ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਸਮੂਹ ਨੇ ਕੋਲੇਜਨ ਟਾਈਪ I α2 ਚੇਨ (COL1A2), α-ਸਮੂਥ ਮਾਸਪੇਸ਼ੀ ਐਕਟਿਨ (αSMA), ਮੈਟ੍ਰਿਕਸ ਮੈਟਾਲੋਪ੍ਰੋਟੀਨੇਜ਼ 2 (MMP2), ਮੈਟਾਲੋਪ੍ਰੋਟੀਨੇਜ਼ 1 (TIMP1) ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਇਨਿਹਿਬਟਰ, ਅਤੇ ਡਾਇਨਾਮਾਈਨ 1-ਵਰਗੇ ਜੀਨ (DRP1) ਵਰਗੇ ਜੀਨਾਂ ਦੀ ਵਧੀ ਹੋਈ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਨੂੰ ਦਿਖਾਇਆ, ਜੋ ਕਿ ਵਧੇ ਹੋਏ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ ਅਤੇ ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਕੰਟਰੋਲ ਗਰੁੱਪ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ, TGF-β1 ਇਲਾਜ ਨੇ ਨਿਊਕਲੀਅਰ ਪ੍ਰੈਗਨੇਨ X ਰੀਸੈਪਟਰ (PXR), ਕੈਸਪੇਸ 8 (CASP8), MAPKAPK3, B-ਸੈੱਲ α ਦੇ ਇਨਿਹਿਬਟਰ, ਨਿਊਕਲੀਅਰ ਫੈਕਟਰ κ ਜੀਨ ਲਾਈਟ ਪੇਪਟਾਇਡ (NFκB1A) ਦੇ ਇਨਿਹਿਬਟਰ, ਅਤੇ ਨਿਊਕਲੀਅਰ ਫੈਕਟਰ κB ਕਿਨੇਜ਼ ਸਬਯੂਨਿਟ β (IKBKB) ਦੇ ਇਨਿਹਿਬਟਰ (ਚਿੱਤਰ 5A–D) ਦੇ mRNA ਪੱਧਰ ਨੂੰ ਘਟਾ ਦਿੱਤਾ। TGF-β1 ਇਲਾਜ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ, TGF-β1 ਅਤੇ IPA ਦੇ ਨਾਲ ਸੁਮੇਲ ਇਲਾਜ ਨੇ COL1A2 ਅਤੇ MMP2 ਦੀ ਸਮੀਕਰਨ ਨੂੰ ਘਟਾ ਦਿੱਤਾ, ਪਰ PXR, TIMP1, B-ਸੈੱਲ ਲਿਮਫੋਮਾ-2 (BCL-2), CASP8, NFκB1A, NFκB1-β, ਅਤੇ IKBKB ਦੇ mRNA ਪੱਧਰਾਂ ਨੂੰ ਵਧਾ ਦਿੱਤਾ। IPA ਇਲਾਜ ਨੇ MMP2, Bcl-2-ਸਬੰਧਤ ਪ੍ਰੋਟੀਨ X (BAX), AKT1, ਆਪਟਿਕ ਐਟ੍ਰੋਫੀ ਪ੍ਰੋਟੀਨ 1 (OPA1), ਅਤੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਫਿਊਜ਼ਨ ਪ੍ਰੋਟੀਨ 2 (MFN2) ਦੀ ਸਮੀਕਰਨ ਨੂੰ ਕਾਫ਼ੀ ਘਟਾ ਦਿੱਤਾ, ਜਦੋਂ ਕਿ CASP8, NFκB1A, NFκB1B, ਅਤੇ IKBKB ਦੀ ਸਮੀਕਰਨ ਨੂੰ ਕੰਟਰੋਲ ਸਮੂਹ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਵਧਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਕੈਸਪੇਸ-3 (CASP3), ਐਪੋਪਟੋਟਿਕ ਪੇਪਟਾਈਡੇਸ ਐਕਟੀਵੇਟਿੰਗ ਫੈਕਟਰ 1 (APAF1), ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਫਿਊਜ਼ਨ ਪ੍ਰੋਟੀਨ 1 (MFN1), ਅਤੇ ਫਿਸ਼ਨ ਪ੍ਰੋਟੀਨ 1 (FIS1) ਦੀ ਸਮੀਕਰਨ ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਅੰਤਰ ਨਹੀਂ ਪਾਇਆ ਗਿਆ। ਸਮੂਹਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ, ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਕਿ IPA ਇਲਾਜ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ, ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ, ਸਰਵਾਈਵਲ, ਅਤੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਡਾਇਨਾਮਿਕਸ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਜੀਨਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਨੂੰ ਸੰਚਾਲਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਸਾਡਾ ਡੇਟਾ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ IPA ਇਲਾਜ LX-2 ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦਾ ਹੈ; ਉਸੇ ਸਮੇਂ, ਇਹ ਫੀਨੋਟਾਈਪ ਨੂੰ ਅਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲਤਾ ਵੱਲ ਬਦਲ ਕੇ ਬਚਾਅ ਨੂੰ ਉਤੇਜਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ।
IPA LX-2 ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਫਾਈਬਰੋਬਲਾਸਟ, ਐਪੋਪਟੋਟਿਕ, ਵਿਵਹਾਰਕਤਾ, ਅਤੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਡਾਇਨਾਮਿਕਸ ਜੀਨਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਨੂੰ ਸੰਚਾਲਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ। LX-2 ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ 24 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ ਸੀਰਮ-ਮੁਕਤ ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ TGF-β1 ਅਤੇ IPA ਨਾਲ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਹਿਸਟੋਗ੍ਰਾਮ ਐਂਡੋਜੇਨਸ ਕੰਟਰੋਲ (RPLP0 ਜਾਂ PPIA) ਦੇ ਸਾਪੇਖਕ mRNA ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਨੂੰ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ। A ਫਾਈਬਰੋਬਲਾਸਟ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ, B ਐਪੋਪਟੋਟਿਕ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ, C ਬਚੇ ਹੋਏ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ D ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਡਾਇਨਾਮਿਕਸ ਜੀਨ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਡੇਟਾ ਨੂੰ ਔਸਤ ± ਮਿਆਰੀ ਵਿਵਹਾਰ (SD), n = 3 ਸੁਤੰਤਰ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਵਜੋਂ ਪੇਸ਼ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਇੱਕ-ਪਾਸੜ ANOVA ਅਤੇ ਬੋਨਫੈਰੋਨੀ ਪੋਸਟਹਾਕ ਟੈਸਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਅੰਕੜਾਤਮਕ ਤੁਲਨਾਵਾਂ ਕੀਤੀਆਂ ਗਈਆਂ ਸਨ। *p < 0.05; **p < 0.01; ***p < 0.001; ****p < 0.0001
ਫਿਰ, ਸੈੱਲ ਦੇ ਆਕਾਰ (FSC-H) ਅਤੇ ਸਾਇਟੋਪਲਾਜ਼ਮਿਕ ਜਟਿਲਤਾ (SSC-H) ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਫਲੋ ਸਾਇਟੋਮੈਟਰੀ (ਚਿੱਤਰ 6A,B) ਦੁਆਰਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ, ਅਤੇ IPA ਇਲਾਜ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਸੈੱਲ ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਟ੍ਰਾਂਸਮਿਸ਼ਨ ਇਲੈਕਟ੍ਰੌਨ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪੀ (TEM) ਅਤੇ ਫੇਜ਼ ਕੰਟ੍ਰਾਸਟ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪੀ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 6A-B) ਦੁਆਰਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਉਮੀਦ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ, TGF-β1-ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਸਮੂਹ ਵਿੱਚ ਸੈੱਲਾਂ ਦਾ ਆਕਾਰ ਨਿਯੰਤਰਣ ਸਮੂਹ (ਚਿੱਤਰ 6A,B) ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਵਧਿਆ, ਜੋ ਕਿ ਰਫ ਐਂਡੋਪਲਾਜ਼ਮਿਕ ਰੈਟੀਕੁਲਮ (ER*) ਅਤੇ ਫੈਗੋਲੀਸੋਸੋਮ (P) ਦੇ ਕਲਾਸਿਕ ਵਿਸਥਾਰ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਹੇਮੇਟੋਪੋਏਟਿਕ ਸਟੈਮ ਸੈੱਲ (HSC) ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 6A) ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ, TGF-β1-ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਸਮੂਹ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ, TGF-β1 ਅਤੇ IPA ਸੁਮੇਲ ਇਲਾਜ ਸਮੂਹ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 6A) ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਦਾ ਆਕਾਰ, ਸਾਇਟੋਪਲਾਜ਼ਮਿਕ ਜਟਿਲਤਾ (ਚਿੱਤਰ 6A,B), ਅਤੇ ER* ਸਮੱਗਰੀ ਘਟੀ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, IPA ਇਲਾਜ ਨੇ ਕੰਟਰੋਲ ਗਰੁੱਪ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਸੈੱਲ ਦਾ ਆਕਾਰ, ਸਾਇਟੋਪਲਾਜ਼ਮਿਕ ਜਟਿਲਤਾ (ਚਿੱਤਰ 6A,B), P ਅਤੇ ER* ਸਮੱਗਰੀ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 6A) ਨੂੰ ਘਟਾਇਆ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਕੰਟਰੋਲ ਗਰੁੱਪ (ਚਿੱਟੇ ਤੀਰ, ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 6B) ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ IPA ਇਲਾਜ ਦੇ 24 ਘੰਟਿਆਂ ਬਾਅਦ ਐਪੋਪਟੋਟਿਕ ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਸਮੱਗਰੀ ਵਧ ਗਈ। ਸਮੂਹਿਕ ਤੌਰ 'ਤੇ, ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਕਿ 1 mM IPA HSC ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਨੂੰ ਉਤੇਜਿਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ TGF-β1 ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਸੈੱਲ ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨਿਕ ਮਾਪਦੰਡਾਂ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਨੂੰ ਉਲਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਸੈੱਲ ਦੇ ਆਕਾਰ ਅਤੇ ਜਟਿਲਤਾ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ HSC ਅਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲਤਾ ਨਾਲ ਜੁੜਿਆ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ।
IPA LX-2 ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਦੇ ਆਕਾਰ ਅਤੇ ਸਾਇਟੋਪਲਾਸਮਿਕ ਜਟਿਲਤਾ ਨੂੰ ਬਦਲਦਾ ਹੈ। ਪ੍ਰਵਾਹ ਸਾਇਟੋਮੈਟਰੀ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੀਆਂ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧ ਤਸਵੀਰਾਂ। ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਨੇ LX-2 ਸੈੱਲਾਂ ਲਈ ਖਾਸ ਇੱਕ ਗੇਟਿੰਗ ਰਣਨੀਤੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ: ਸੈੱਲ ਆਬਾਦੀ ਨੂੰ ਪਰਿਭਾਸ਼ਿਤ ਕਰਨ ਲਈ SSC-A/FSC-A, ਡਬਲਟਸ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕਰਨ ਲਈ FSC-H/FSC-A, ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਆਕਾਰ ਅਤੇ ਜਟਿਲਤਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ SSC-H/FSC-H। ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ 24 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ ਸੀਰਮ-ਮੁਕਤ ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ TGF-β1 (5 ng/ml) ਅਤੇ 1 mM IPA ਨਾਲ ਇਨਕਿਊਬੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। LX-2 ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਹੇਠਲੇ ਖੱਬੇ ਚਤੁਰਭੁਜ (SSC-H-/FSC-H-), ਉੱਪਰਲੇ ਖੱਬੇ ਚਤੁਰਭੁਜ (SSC-H+/FSC-H-), ਹੇਠਲੇ ਸੱਜੇ ਚਤੁਰਭੁਜ (SSC-H-/FSC-H+), ਅਤੇ ਉੱਪਰਲੇ ਸੱਜੇ ਚਤੁਰਭੁਜ (SSC-H+/FSC-H+) ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਆਕਾਰ ਅਤੇ ਸਾਇਟੋਪਲਾਸਮਿਕ ਜਟਿਲਤਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ ਵੰਡਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। B. ਸੈੱਲ ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ FSC-H (ਫਾਰਵਰਡ ਸਕੈਟਰ, ਸੈੱਲ ਆਕਾਰ) ਅਤੇ SSC-H (ਸਾਈਡ ਸਕੈਟਰ, ਸਾਇਟੋਪਲਾਜ਼ਮਿਕ ਜਟਿਲਤਾ) (30,000 ਘਟਨਾਵਾਂ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਫਲੋ ਸਾਇਟੋਮੈਟਰੀ ਦੁਆਰਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਡੇਟਾ ਨੂੰ ਔਸਤ ± SD, n = 3 ਸੁਤੰਤਰ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਵਜੋਂ ਪੇਸ਼ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ। ਇੱਕ-ਪਾਸੜ ANOVA ਅਤੇ ਬੋਨਫੈਰੋਨੀ ਪੋਸਟਹਾਕ ਟੈਸਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਅੰਕੜਾਤਮਕ ਤੁਲਨਾਵਾਂ ਕੀਤੀਆਂ ਗਈਆਂ ਸਨ। *p < 0.05; **p < 0.01; ***p < 0.001 ਅਤੇ ****p < 0.0001
IPA ਵਰਗੇ ਅੰਤੜੀਆਂ ਦੇ ਮੈਟਾਬੋਲਾਈਟਸ ਖੋਜ ਦਾ ਇੱਕ ਗਰਮ ਵਿਸ਼ਾ ਬਣ ਗਏ ਹਨ, ਜੋ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਕਿ ਅੰਤੜੀਆਂ ਦੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਬਾਇਓਟਾ ਵਿੱਚ ਨਵੇਂ ਟੀਚਿਆਂ ਦੀ ਖੋਜ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ। ਇਸ ਲਈ ਇਹ ਦਿਲਚਸਪ ਹੈ ਕਿ IPA, ਇੱਕ ਮੈਟਾਬੋਲਾਈਟ ਜਿਸਨੂੰ ਅਸੀਂ ਮਨੁੱਖਾਂ ਵਿੱਚ ਜਿਗਰ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ ਨਾਲ ਜੋੜਿਆ ਹੈ [15], ਨੂੰ ਜਾਨਵਰਾਂ ਦੇ ਮਾਡਲਾਂ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਸੰਭਾਵੀ ਐਂਟੀ-ਫਾਈਬਰੋਟਿਕ ਮਿਸ਼ਰਣ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ [13, 14]। ਇੱਥੇ, ਅਸੀਂ ਪਹਿਲੀ ਵਾਰ ਸੀਰਮ IPA ਅਤੇ ਗਲੋਬਲ ਲਿਵਰ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟੋਮਿਕਸ ਅਤੇ DNA ਮਿਥਾਈਲੇਸ਼ਨ ਵਿਚਕਾਰ ਇੱਕ ਸਬੰਧ ਦਾ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਨ ਕਰਦੇ ਹਾਂ ਬਿਨਾਂ ਟਾਈਪ 2 ਡਾਇਬਟੀਜ਼ (T2D) ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਮੋਟੇ ਵਿਅਕਤੀਆਂ ਵਿੱਚ, ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ, ਮਾਈਟੋਫੈਜੀ ਅਤੇ ਲੰਬੀ ਉਮਰ ਨੂੰ ਉਜਾਗਰ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, ਨਾਲ ਹੀ ਇੱਕ ਸੰਭਾਵੀ ਉਮੀਦਵਾਰ ਜੀਨ AKT1 ਜੋ ਜਿਗਰ ਹੋਮਿਓਸਟੈਸਿਸ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਸਾਡੇ ਅਧਿਐਨ ਦੀ ਇੱਕ ਹੋਰ ਨਵੀਨਤਾ ਇਹ ਹੈ ਕਿ ਅਸੀਂ LX-2 ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ, ਸੈੱਲ ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨ, ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਬਾਇਓਐਨਰਜੇਟਿਕਸ ਅਤੇ ਗਤੀਸ਼ੀਲਤਾ ਨਾਲ IPA ਇਲਾਜ ਦੀ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦਾ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਨ ਕੀਤਾ, ਇੱਕ ਘੱਟ ਊਰਜਾ ਸਪੈਕਟ੍ਰਮ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਜੋ HSC ਫੀਨੋਟਾਈਪ ਨੂੰ ਅਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲਤਾ ਵੱਲ ਬਦਲਦਾ ਹੈ, IPA ਨੂੰ ਜਿਗਰ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ ਨੂੰ ਬਿਹਤਰ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਇੱਕ ਸੰਭਾਵੀ ਉਮੀਦਵਾਰ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ।
ਅਸੀਂ ਪਾਇਆ ਕਿ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ, ਮਾਈਟੋਫੈਜੀ ਅਤੇ ਲੰਬੀ ਉਮਰ ਸਰਕੂਲੇਟਿੰਗ ਸੀਰਮ IPA ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਜਿਗਰ ਜੀਨਾਂ ਵਿੱਚ ਭਰਪੂਰ ਸਭ ਤੋਂ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਕੈਨੋਨੀਕਲ ਮਾਰਗ ਸਨ। ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਕੁਆਲਿਟੀ ਕੰਟਰੋਲ (MQC) ਸਿਸਟਮ ਵਿੱਚ ਵਿਘਨ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਡਿਸਫੰਕਸ਼ਨ, ਮਾਈਟੋਫੈਜੀ ਅਤੇ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ MASLD [33, 34] ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਅੰਦਾਜ਼ਾ ਲਗਾ ਸਕਦੇ ਹਾਂ ਕਿ IPA ਜਿਗਰ ਵਿੱਚ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ, ਮਾਈਟੋਫੈਜੀ ਅਤੇ ਲੰਬੀ ਉਮਰ ਦੁਆਰਾ ਸੈੱਲ ਗਤੀਸ਼ੀਲਤਾ ਅਤੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਅਖੰਡਤਾ ਨੂੰ ਬਣਾਈ ਰੱਖਣ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਸਾਡੇ ਡੇਟਾ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ ਤਿੰਨ ਅਸੈਸਾਂ ਵਿੱਚ ਦੋ ਜੀਨ ਆਮ ਸਨ: YKT6 ਅਤੇ AKT1। ਇਹ ਧਿਆਨ ਦੇਣ ਯੋਗ ਹੈ ਕਿ YKT6 ਇੱਕ SNARE ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਹੈ ਜੋ ਸੈੱਲ ਝਿੱਲੀ ਫਿਊਜ਼ਨ ਦੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ। ਇਹ ਆਟੋਫੈਗੋਸੋਮ 'ਤੇ STX17 ਅਤੇ SNAP29 ਦੇ ਨਾਲ ਇੱਕ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਕੰਪਲੈਕਸ ਬਣਾ ਕੇ ਆਟੋਫੈਜੀ ਅਤੇ ਮਾਈਟੋਫੈਜੀ ਵਿੱਚ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਆਟੋਫੈਗੋਸੋਮ ਅਤੇ ਲਾਈਸੋਸੋਮ ਦੇ ਫਿਊਜ਼ਨ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ [35]। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, YKT6 ਫੰਕਸ਼ਨ ਦੇ ਨੁਕਸਾਨ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਮਾਈਟੋਫੈਜੀ ਵਿੱਚ ਵਿਘਨ ਪੈਂਦਾ ਹੈ[36], ਜਦੋਂ ਕਿ YKT6 ਦਾ ਉੱਪਰ-ਨਿਯਮ ਹੈਪੇਟੋਸੈਲੂਲਰ ਕਾਰਸੀਨੋਮਾ (HCC) ਦੀ ਪ੍ਰਗਤੀ ਨਾਲ ਜੁੜਿਆ ਹੋਇਆ ਹੈ, ਜੋ ਸੈੱਲ ਬਚਾਅ ਵਿੱਚ ਵਾਧਾ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ[37]। ਦੂਜੇ ਪਾਸੇ, AKT1 ਸਭ ਤੋਂ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਇੰਟਰੈਕਟਿੰਗ ਜੀਨ ਹੈ ਅਤੇ ਜਿਗਰ ਦੀਆਂ ਬਿਮਾਰੀਆਂ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ PI3K/AKT ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਮਾਰਗ, ਸੈੱਲ ਚੱਕਰ, ਸੈੱਲ ਮਾਈਗ੍ਰੇਸ਼ਨ, ਪ੍ਰਸਾਰ, ਫੋਕਲ ਅਡੈਸ਼ਨ, ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਫੰਕਸ਼ਨ, ਅਤੇ ਕੋਲੇਜਨ સ્ત્રાવ [38–40] ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ। ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ PI3K/AKT ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਮਾਰਗ ਹੈਮੇਟੋਪੋਏਟਿਕ ਸਟੈਮ ਸੈੱਲ (HSCs) ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਐਕਸਟਰਸੈਲੂਲਰ ਮੈਟ੍ਰਿਕਸ (ECM) ਦੇ ਉਤਪਾਦਨ ਲਈ ਜ਼ਿੰਮੇਵਾਰ ਸੈੱਲ ਹਨ, ਅਤੇ ਇਸਦਾ ਡਿਸਰੇਗੂਲੇਸ਼ਨ ਜਿਗਰ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਅਤੇ ਪ੍ਰਗਤੀ ਵਿੱਚ ਯੋਗਦਾਨ ਪਾ ਸਕਦਾ ਹੈ[40]। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, AKT ਮੁੱਖ ਸੈੱਲ ਬਚਾਅ ਕਾਰਕਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਇੱਕ ਹੈ ਜੋ p53-ਨਿਰਭਰ ਸੈੱਲ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਨੂੰ ਰੋਕਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ AKT ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਜਿਗਰ ਸੈੱਲ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ [41, 42] ਦੇ ਰੋਕਥਾਮ ਨਾਲ ਜੁੜਿਆ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਪ੍ਰਾਪਤ ਨਤੀਜਿਆਂ ਤੋਂ ਪਤਾ ਚੱਲਦਾ ਹੈ ਕਿ IPA, ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਵਿੱਚ ਦਾਖਲ ਹੋਣ ਜਾਂ ਬਚਾਅ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਹੈਪੇਟੋਸਾਈਟਸ ਦੇ ਫੈਸਲੇ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਕੇ ਜਿਗਰ ਦੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਆ ਨਾਲ ਸਬੰਧਤ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਇਹਨਾਂ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਨੂੰ AKT ਅਤੇ/ਜਾਂ YKT6 ਉਮੀਦਵਾਰ ਜੀਨਾਂ ਦੁਆਰਾ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਜਿਗਰ ਦੇ ਹੋਮਿਓਸਟੈਸਿਸ ਲਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹਨ।
ਸਾਡੇ ਨਤੀਜਿਆਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ 1 mM IPA ਨੇ TGF-β1 ਇਲਾਜ ਤੋਂ ਸੁਤੰਤਰ LX-2 ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕੀਤਾ ਅਤੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਸਾਹ ਘਟਾਇਆ। ਇਹ ਧਿਆਨ ਦੇਣ ਯੋਗ ਹੈ ਕਿ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ ਰੈਜ਼ੋਲੂਸ਼ਨ ਅਤੇ ਹੇਮਾਟੋਪੋਇਟਿਕ ਸਟੈਮ ਸੈੱਲ (HSC) ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਲਈ ਇੱਕ ਪ੍ਰਮੁੱਖ ਮਾਰਗ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਹ ਜਿਗਰ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ [4, 43] ਦੇ ਉਲਟ ਸਰੀਰਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਮੁੱਖ ਘਟਨਾ ਵੀ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਮਿਸ਼ਰਨ ਇਲਾਜ ਤੋਂ ਬਾਅਦ LX-2 ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ BHI ਦੀ ਬਹਾਲੀ ਨੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਬਾਇਓਐਨਰਜੈਟਿਕਸ ਦੇ ਨਿਯਮਨ ਵਿੱਚ IPA ਦੀ ਸੰਭਾਵੀ ਭੂਮਿਕਾ ਬਾਰੇ ਨਵੀਂ ਸਮਝ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕੀਤੀ। ਆਰਾਮ ਕਰਨ ਅਤੇ ਨਾ-ਸਰਗਰਮ ਸਥਿਤੀਆਂ ਵਿੱਚ, ਹੀਮਾਟੋਪੋਇਟਿਕ ਸੈੱਲ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ATP ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਲਈ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਆਕਸੀਡੇਟਿਵ ਫਾਸਫੋਰਿਲੇਸ਼ਨ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਘੱਟ ਮੈਟਾਬੋਲਿਕ ਗਤੀਵਿਧੀ ਰੱਖਦੇ ਹਨ। ਦੂਜੇ ਪਾਸੇ, HSC ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਗਲਾਈਕੋਲਾਈਟਿਕ ਅਵਸਥਾ ਵਿੱਚ ਦਾਖਲ ਹੋਣ ਦੀਆਂ ਊਰਜਾ ਮੰਗਾਂ ਦੀ ਪੂਰਤੀ ਲਈ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਸਾਹ ਅਤੇ ਬਾਇਓਸਿੰਥੇਸਿਸ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦਾ ਹੈ [44]। ਇਹ ਤੱਥ ਕਿ IPA ਨੇ ਮੈਟਾਬੋਲਿਕ ਸੰਭਾਵੀ ਅਤੇ ECAR ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ, ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ ਗਲਾਈਕੋਲਾਈਟਿਕ ਮਾਰਗ ਨੂੰ ਘੱਟ ਤਰਜੀਹ ਦਿੱਤੀ ਗਈ ਹੈ। ਇਸੇ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਇੱਕ ਹੋਰ ਅਧਿਐਨ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ 1 mM IPA ਕਾਰਡੀਓਮਾਇਓਸਾਈਟਸ, ਮਨੁੱਖੀ ਹੈਪੇਟੋਸਾਈਟ ਸੈੱਲ ਲਾਈਨ (Huh7) ਅਤੇ ਮਨੁੱਖੀ ਨਾੜੀ ਐਂਡੋਥੈਲੀਅਲ ਸੈੱਲਾਂ (HUVEC) ਵਿੱਚ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਸਾਹ ਚੇਨ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਸੰਸ਼ੋਧਿਤ ਕਰਨ ਦੇ ਯੋਗ ਸੀ; ਹਾਲਾਂਕਿ, ਕਾਰਡੀਓਮਾਇਓਸਾਈਟਸ ਵਿੱਚ ਗਲਾਈਕੋਲਾਈਸਿਸ 'ਤੇ IPA ਦਾ ਕੋਈ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨਹੀਂ ਪਾਇਆ ਗਿਆ, ਜੋ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ IPA ਹੋਰ ਸੈੱਲ ਕਿਸਮਾਂ ਦੇ ਬਾਇਓਐਨਰਜੈਟਿਕਸ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ [45]। ਇਸ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਅੰਦਾਜ਼ਾ ਲਗਾਉਂਦੇ ਹਾਂ ਕਿ 1 mM IPA ਇੱਕ ਹਲਕੇ ਰਸਾਇਣਕ ਅਨਕਪਲਰ ਵਜੋਂ ਕੰਮ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਕਿਉਂਕਿ ਇਹ mtDNA ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ ਬਦਲੇ ਬਿਨਾਂ ਫਾਈਬਰੋਜੈਨਿਕ ਜੀਨ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ, ਸੈੱਲ ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨ ਅਤੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਬਾਇਓਐਨਰਜੈਟਿਕਸ ਨੂੰ ਕਾਫ਼ੀ ਘਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ [46]। ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਅਨਕਪਲਰ ਕਲਚਰ-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ ਅਤੇ HSC ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ [47] ਨੂੰ ਰੋਕ ਸਕਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ATP ਉਤਪਾਦਨ ਨੂੰ ਘਟਾ ਸਕਦੇ ਹਨ ਜੋ ਕੁਝ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਅਨਕਪਲਿੰਗ ਪ੍ਰੋਟੀਨ (UCP) ਜਾਂ ਐਡੀਨਾਈਨ ਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡ ਟ੍ਰਾਂਸਲੋਕੇਸ (ANT) ਦੁਆਰਾ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਜਾਂ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਹੁੰਦੇ ਹਨ। ਸੈੱਲ ਕਿਸਮ 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, ਇਹ ਵਰਤਾਰਾ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਤੋਂ ਬਚਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ/ਜਾਂ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ [46]। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਹੇਮੇਟੋਪੋਇਟਿਕ ਸਟੈਮ ਸੈੱਲ ਅਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲਤਾ ਵਿੱਚ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਅਨਕਪਲਰ ਵਜੋਂ IPA ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਨੂੰ ਸਪੱਸ਼ਟ ਕਰਨ ਲਈ ਹੋਰ ਅਧਿਐਨਾਂ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ।
ਫਿਰ ਅਸੀਂ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਕਿ ਕੀ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਸਾਹ ਲੈਣ ਵਿੱਚ ਬਦਲਾਅ ਜੀਵਤ LX-2 ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਤੀਬਿੰਬਤ ਹੁੰਦੇ ਹਨ। ਦਿਲਚਸਪ ਗੱਲ ਇਹ ਹੈ ਕਿ, TGF-β1 ਇਲਾਜ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਅਨੁਪਾਤ ਨੂੰ ਗੋਲਾਕਾਰ ਤੋਂ ਵਿਚਕਾਰਲੇ ਵਿੱਚ ਬਦਲਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਬ੍ਰਾਂਚਿੰਗ ਵਿੱਚ ਕਮੀ ਅਤੇ DRP1 ਦੀ ਵਧੀ ਹੋਈ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਦੇ ਨਾਲ, ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਵਿਖੰਡਨ [48] ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਮੁੱਖ ਕਾਰਕ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਫ੍ਰੈਗਮੈਂਟੇਸ਼ਨ ਸਮੁੱਚੀ ਨੈੱਟਵਰਕ ਜਟਿਲਤਾ ਨਾਲ ਜੁੜਿਆ ਹੋਇਆ ਹੈ, ਅਤੇ ਫਿਊਜ਼ਨ ਤੋਂ ਫਿਸ਼ਨ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀ ਹੀਮੈਟੋਪੋਇਟਿਕ ਸਟੈਮ ਸੈੱਲ (HSC) ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਲਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਵਿਖੰਡਨ ਦੀ ਰੋਕਥਾਮ HSC ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਵੱਲ ਲੈ ਜਾਂਦੀ ਹੈ [49]। ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਸਾਡੇ ਨਤੀਜੇ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ TGF-β1 ਇਲਾਜ ਘੱਟ ਬ੍ਰਾਂਚਿੰਗ ਦੇ ਨਾਲ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਨੈੱਟਵਰਕ ਜਟਿਲਤਾ ਵਿੱਚ ਕਮੀ ਲਿਆ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਐਕਟੀਵੇਟਿਡ ਹੇਮੈਟੋਪੋਇਟਿਕ ਸਟੈਮ ਸੈੱਲਾਂ (HSCs) ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਵਿਖੰਡਨ ਵਿੱਚ ਵਧੇਰੇ ਆਮ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਸਾਡੇ ਡੇਟਾ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ IPA ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਆ ਦੇ ਅਨੁਪਾਤ ਨੂੰ ਗੋਲਾਕਾਰ ਤੋਂ ਵਿਚਕਾਰਲੇ ਆਕਾਰ ਵਿੱਚ ਬਦਲ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ OPA1 ਅਤੇ MFN2 ਦੀ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਨੂੰ ਘਟਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ OPA1 ਦੇ ਡਾਊਨਰੇਗੂਲੇਸ਼ਨ ਨਾਲ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਝਿੱਲੀ ਸੰਭਾਵਨਾ ਵਿੱਚ ਕਮੀ ਆ ਸਕਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ [50] ਨੂੰ ਟਰਿੱਗਰ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। MFN2 ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਫਿਊਜ਼ਨ ਅਤੇ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ [51] ਵਿੱਚ ਵਿਚੋਲਗੀ ਕਰਨ ਲਈ ਜਾਣਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਪ੍ਰਾਪਤ ਨਤੀਜੇ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਕਿ TGF-β1 ਅਤੇ/ਜਾਂ IPA ਦੁਆਰਾ LX-2 ਸੈੱਲਾਂ ਦਾ ਇੰਡਕਸ਼ਨ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਸ਼ਕਲ ਅਤੇ ਆਕਾਰ ਦੇ ਨਾਲ-ਨਾਲ ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਸਥਿਤੀ ਅਤੇ ਨੈੱਟਵਰਕ ਜਟਿਲਤਾ ਨੂੰ ਸੰਸ਼ੋਧਿਤ ਕਰਦਾ ਪ੍ਰਤੀਤ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।
ਸਾਡੇ ਨਤੀਜੇ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ TGFβ-1 ਅਤੇ IPA ਦਾ ਸੰਯੁਕਤ ਇਲਾਜ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਤੋਂ ਬਚਣ ਵਾਲੇ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ, ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਅਤੇ ਬਚਾਅ ਨਾਲ ਸਬੰਧਤ ਜੀਨਾਂ ਦੇ mRNA ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰਕੇ mtDNA ਅਤੇ ਸੈੱਲ ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨਿਕ ਮਾਪਦੰਡਾਂ ਨੂੰ ਘਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਦਰਅਸਲ, IPA ਨੇ AKT1 ਦੇ mRNA ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਦੇ ਪੱਧਰ ਅਤੇ COL1A2 ਅਤੇ MMP2 ਵਰਗੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ ਜੀਨਾਂ ਨੂੰ ਘਟਾ ਦਿੱਤਾ, ਪਰ CASP8 ਦੇ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਦੇ ਪੱਧਰ ਨੂੰ ਵਧਾਇਆ, ਜੋ ਕਿ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਨਾਲ ਜੁੜਿਆ ਹੋਇਆ ਹੈ। ਸਾਡੇ ਨਤੀਜਿਆਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ IPA ਇਲਾਜ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, BAX ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਵਿੱਚ ਕਮੀ ਆਈ ਅਤੇ TIMP1 ਪਰਿਵਾਰਕ ਉਪ-ਯੂਨਿਟਾਂ, BCL-2 ਅਤੇ NF-κB ਦੇ ​​mRNA ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਵਿੱਚ ਵਾਧਾ ਹੋਇਆ, ਜੋ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ IPA ਹੀਮੈਟੋਪੋਇਟਿਕ ਸਟੈਮ ਸੈੱਲਾਂ (HSCs) ਵਿੱਚ ਬਚਾਅ ਸੰਕੇਤਾਂ ਨੂੰ ਉਤੇਜਿਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ ਜੋ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਤੋਂ ਬਚਦੇ ਹਨ। ਇਹ ਅਣੂ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਹੀਮੈਟੋਪੋਇਟਿਕ ਸਟੈਮ ਸੈੱਲਾਂ ਵਿੱਚ ਬਚਾਅ ਦੇ ਪੱਖੋਂ ਪੱਖੀ ਸੰਕੇਤਾਂ ਵਜੋਂ ਕੰਮ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਜੋ ਕਿ ਐਂਟੀ-ਐਪੋਪੋਟੋਟਿਕ ਪ੍ਰੋਟੀਨ (ਜਿਵੇਂ ਕਿ Bcl-2) ਦੀ ਵਧੀ ਹੋਈ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ, ਪ੍ਰੋ-ਐਪੋਪੋਟੋਟਿਕ BAX ਦੀ ਘਟੀ ਹੋਈ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ, ਅਤੇ TIMP ਅਤੇ NF-κB ਵਿਚਕਾਰ ਇੱਕ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਇੰਟਰਪਲੇ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਹੋ ਸਕਦੇ ਹਨ [5, 7]। IPA PXR ਰਾਹੀਂ ਆਪਣੇ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਨੂੰ ਲਾਗੂ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਅਸੀਂ ਪਾਇਆ ਕਿ TGF-β1 ਅਤੇ IPA ਨਾਲ ਮਿਸ਼ਰਨ ਇਲਾਜ ਨੇ PXR mRNA ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਦੇ ਪੱਧਰਾਂ ਨੂੰ ਵਧਾਇਆ, ਜੋ HSC ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਦੇ ਦਮਨ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ PXR ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਵਿਵੋ ਅਤੇ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਦੋਵਾਂ ਵਿੱਚ HSC ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ ਜਾਣਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ [52, 53]। ਸਾਡੇ ਨਤੀਜੇ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ IPA ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰਕੇ, ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ ਅਤੇ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਅਲ ਮੈਟਾਬੋਲਿਜ਼ਮ ਨੂੰ ਘਟਾ ਕੇ, ਅਤੇ ਬਚਾਅ ਸੰਕੇਤਾਂ ਨੂੰ ਵਧਾ ਕੇ ਸਰਗਰਮ HSCs ਦੀ ਕਲੀਅਰੈਂਸ ਵਿੱਚ ਹਿੱਸਾ ਲੈ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਆਮ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਹਨ ਜੋ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ HSC ਫੀਨੋਟਾਈਪ ਨੂੰ ਇੱਕ ਅਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਵਿੱਚ ਬਦਲਦੀਆਂ ਹਨ। ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਵਿੱਚ IPA ਦੀ ਸੰਭਾਵੀ ਵਿਧੀ ਅਤੇ ਭੂਮਿਕਾ ਲਈ ਇੱਕ ਹੋਰ ਸੰਭਾਵਿਤ ਵਿਆਖਿਆ ਇਹ ਹੈ ਕਿ ਇਹ ਮੁੱਖ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਾਈਟੋਫੈਜੀ (ਅੰਦਰੂਨੀ ਮਾਰਗ) ਅਤੇ ਬਾਹਰੀ TNF ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਮਾਰਗ (ਸਾਰਣੀ 1) ਦੁਆਰਾ ਡਿਸਫੰਕਸ਼ਨਲ ਮਾਈਟੋਕੌਂਡਰੀਆ ਨੂੰ ਸਾਫ਼ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਸਿੱਧੇ ਤੌਰ 'ਤੇ NF-κB ਸਰਵਾਈਵਲ ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਮਾਰਗ (ਪੂਰਕ ਚਿੱਤਰ 7) ਨਾਲ ਜੁੜਿਆ ਹੋਇਆ ਹੈ। ਦਿਲਚਸਪ ਗੱਲ ਇਹ ਹੈ ਕਿ, IPA-ਸਬੰਧਤ ਭਰਪੂਰ ਜੀਨ ਐਪੋਪਟੋਟਿਕ ਮਾਰਗ [54] ਵਿੱਚ ਪ੍ਰੋ-ਐਪੋਪਟੋਟਿਕ ਅਤੇ ਪ੍ਰੋ-ਸਰਵਾਈਵਲ ਸਿਗਨਲਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਨ ਦੇ ਯੋਗ ਹਨ, ਜੋ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਕਿ IPA ਇਹਨਾਂ ਜੀਨਾਂ ਨਾਲ ਗੱਲਬਾਤ ਕਰਕੇ ਐਪੋਪਟੋਟਿਕ ਮਾਰਗ ਜਾਂ ਬਚਾਅ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ, HSC ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਦੌਰਾਨ IPA ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਜਾਂ ਬਚਾਅ ਨੂੰ ਕਿਵੇਂ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸਦੇ ਮਕੈਨੀਕਲ ਮਾਰਗ ਅਜੇ ਵੀ ਅਸਪਸ਼ਟ ਹਨ।
IPA ਇੱਕ ਮਾਈਕ੍ਰੋਬਾਇਲ ਮੈਟਾਬੋਲਾਈਟ ਹੈ ਜੋ ਅੰਤੜੀਆਂ ਦੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਬਾਇਓਟਾ ਰਾਹੀਂ ਖੁਰਾਕ ਟ੍ਰਿਪਟੋਫੈਨ ਤੋਂ ਬਣਦਾ ਹੈ। ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ ਇਸ ਵਿੱਚ ਅੰਤੜੀਆਂ ਦੇ ਵਾਤਾਵਰਣ ਵਿੱਚ ਸਾੜ-ਵਿਰੋਧੀ, ਐਂਟੀਆਕਸੀਡੈਂਟ ਅਤੇ ਐਪੀਜੇਨੇਟਿਕ ਰੈਗੂਲੇਟਰੀ ਗੁਣ ਹਨ।[55] ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ IPA ਅੰਤੜੀਆਂ ਦੇ ਰੁਕਾਵਟ ਫੰਕਸ਼ਨ ਨੂੰ ਸੰਸ਼ੋਧਿਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਆਕਸੀਡੇਟਿਵ ਤਣਾਅ ਨੂੰ ਘਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਇਸਦੇ ਸਥਾਨਕ ਸਰੀਰਕ ਪ੍ਰਭਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਯੋਗਦਾਨ ਪਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।[56] ਦਰਅਸਲ, IPA ਨੂੰ ਸਰਕੂਲੇਸ਼ਨ ਰਾਹੀਂ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਅੰਗਾਂ ਤੱਕ ਪਹੁੰਚਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਕਿਉਂਕਿ IPA ਟ੍ਰਿਪਟੋਫੈਨ, ਸੇਰੋਟੋਨਿਨ, ਅਤੇ ਇੰਡੋਲ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵਜ਼ ਦੇ ਨਾਲ ਇੱਕ ਸਮਾਨ ਪ੍ਰਮੁੱਖ ਮੈਟਾਬੋਲਾਈਟ ਬਣਤਰ ਸਾਂਝਾ ਕਰਦਾ ਹੈ, IPA ਮੈਟਾਬੋਲਿਕ ਕਿਰਿਆਵਾਂ ਕਰਦਾ ਹੈ ਜਿਸਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਪ੍ਰਤੀਯੋਗੀ ਮੈਟਾਬੋਲਿਕ ਕਿਸਮਤ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।[52] IPA ਐਨਜ਼ਾਈਮਾਂ ਜਾਂ ਰੀਸੈਪਟਰਾਂ 'ਤੇ ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਾਈਟਾਂ ਲਈ ਟ੍ਰਿਪਟੋਫੈਨ-ਪ੍ਰਾਪਤ ਮੈਟਾਬੋਲਾਈਟਸ ਨਾਲ ਮੁਕਾਬਲਾ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਸੰਭਾਵੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਆਮ ਮੈਟਾਬੋਲਿਕ ਮਾਰਗਾਂ ਨੂੰ ਵਿਘਨ ਪਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਇਸਦੇ ਇਲਾਜ ਵਿੰਡੋ ਨੂੰ ਬਿਹਤਰ ਢੰਗ ਨਾਲ ਸਮਝਣ ਲਈ ਇਸਦੇ ਫਾਰਮਾਕੋਕਾਇਨੇਟਿਕਸ ਅਤੇ ਫਾਰਮਾਕੋਡਾਇਨਾਮਿਕਸ 'ਤੇ ਹੋਰ ਅਧਿਐਨਾਂ ਦੀ ਜ਼ਰੂਰਤ ਨੂੰ ਉਜਾਗਰ ਕਰਦਾ ਹੈ।[57] ਇਹ ਦੇਖਣਾ ਬਾਕੀ ਹੈ ਕਿ ਕੀ ਇਹ ਹੇਮੇਟੋਪੋਏਟਿਕ ਸਟੈਮ ਸੈੱਲਾਂ (HSCs) ਵਿੱਚ ਵੀ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਅਸੀਂ ਸਵੀਕਾਰ ਕਰਦੇ ਹਾਂ ਕਿ ਸਾਡੇ ਅਧਿਐਨ ਦੀਆਂ ਕੁਝ ਸੀਮਾਵਾਂ ਹਨ। ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ IPA ਨਾਲ ਸਬੰਧਤ ਸਬੰਧਾਂ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰਨ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਟਾਈਪ 2 ਡਾਇਬਟੀਜ਼ ਮਲੇਟਸ (T2DM) ਵਾਲੇ ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਨੂੰ ਬਾਹਰ ਰੱਖਿਆ। ਅਸੀਂ ਸਵੀਕਾਰ ਕਰਦੇ ਹਾਂ ਕਿ ਇਹ ਟਾਈਪ 2 ਡਾਇਬਟੀਜ਼ ਮਲੇਟਸ ਅਤੇ ਐਡਵਾਂਸਡ ਜਿਗਰ ਬਿਮਾਰੀ ਵਾਲੇ ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਲਈ ਸਾਡੇ ਖੋਜਾਂ ਦੀ ਵਿਆਪਕ ਪ੍ਰਯੋਜਨਯੋਗਤਾ ਨੂੰ ਸੀਮਤ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ ਮਨੁੱਖੀ ਸੀਰਮ ਵਿੱਚ IPA ਦੀ ਸਰੀਰਕ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 1-10 μM [11, 20] ਹੈ, 1 mM IPA ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਗੈਰ-ਜ਼ਹਿਰੀਲੇ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ [15] ਅਤੇ ਐਪੋਪਟੋਸਿਸ ਦੀ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਦਰ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ ਚੁਣਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਨੇਕਰੋਟਿਕ ਸੈੱਲ ਆਬਾਦੀ ਦੇ ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤ ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਅੰਤਰ ਨਹੀਂ ਸੀ। ਹਾਲਾਂਕਿ ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ IPA ਦੇ ਸੁਪਰਾਫਿਜ਼ੀਓਲੋਜੀਕਲ ਪੱਧਰਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ, ਪਰ ਵਰਤਮਾਨ ਵਿੱਚ IPA [52] ਦੀ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਖੁਰਾਕ ਬਾਰੇ ਕੋਈ ਸਹਿਮਤੀ ਨਹੀਂ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ ਸਾਡੇ ਨਤੀਜੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹਨ, IPA ਦੀ ਵਿਆਪਕ ਮੈਟਾਬੋਲਿਕ ਕਿਸਮਤ ਖੋਜ ਦਾ ਇੱਕ ਸਰਗਰਮ ਖੇਤਰ ਬਣੀ ਹੋਈ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਸੀਰਮ IPA ਪੱਧਰਾਂ ਅਤੇ ਜਿਗਰ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟਾਂ ਦੇ DNA ਮਿਥਾਈਲੇਸ਼ਨ ਵਿਚਕਾਰ ਸਬੰਧ 'ਤੇ ਸਾਡੇ ਖੋਜਾਂ ਨਾ ਸਿਰਫ਼ ਹੀਮੇਟੋਪੋਏਟਿਕ ਸਟੈਮ ਸੈੱਲਾਂ (HSCs) ਤੋਂ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੀਆਂ ਗਈਆਂ ਸਨ, ਸਗੋਂ ਜਿਗਰ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਤੋਂ ਵੀ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੀਆਂ ਗਈਆਂ ਸਨ। ਅਸੀਂ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟੋਮ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਤੋਂ ਸਾਡੇ ਪਿਛਲੇ ਨਤੀਜਿਆਂ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ ਮਨੁੱਖੀ LX-2 ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਦੀ ਚੋਣ ਕੀਤੀ ਕਿ IPA ਹੀਮੇਟੋਪੋਏਟਿਕ ਸਟੈਮ ਸੈੱਲ (HSC) ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ [15] ਨਾਲ ਜੁੜਿਆ ਹੋਇਆ ਹੈ, ਅਤੇ HSCs ਜਿਗਰ ਫਾਈਬਰੋਸਿਸ ਦੀ ਪ੍ਰਗਤੀ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਮੁੱਖ ਸੈੱਲ ਹਨ। ਜਿਗਰ ਕਈ ਸੈੱਲ ਕਿਸਮਾਂ ਤੋਂ ਬਣਿਆ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਇਸ ਲਈ ਹੋਰ ਸੈੱਲ ਮਾਡਲ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਹੈਪੇਟੋਸਾਈਟ-HSC-ਇਮਿਊਨ ਸੈੱਲ ਸਹਿ-ਸੱਭਿਆਚਾਰ ਪ੍ਰਣਾਲੀ, ਕੈਸਪੇਸ ਐਕਟੀਵੇਸ਼ਨ ਅਤੇ ਡੀਐਨਏ ਫ੍ਰੈਗਮੈਂਟੇਸ਼ਨ ਦੇ ਨਾਲ-ਨਾਲ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਪੱਧਰ ਸਮੇਤ ਕਿਰਿਆ ਦੀ ਵਿਧੀ ਨੂੰ IPA ਦੀ ਭੂਮਿਕਾ ਅਤੇ ਹੋਰ ਜਿਗਰ ਸੈੱਲ ਕਿਸਮਾਂ ਨਾਲ ਇਸਦੀ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦਾ ਅਧਿਐਨ ਕਰਨ ਲਈ ਵਿਚਾਰਿਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।