ਇਹ ਲੇਖ "ਜੀਵਾਣੂਆਂ ਅਤੇ ਕੀੜਿਆਂ ਪ੍ਰਤੀ ਫਲ਼ੀਦਾਰਾਂ ਦੇ ਵਿਰੋਧ ਵਿੱਚ ਸੁਧਾਰ" ਖੋਜ ਵਿਸ਼ੇ ਦਾ ਹਿੱਸਾ ਹੈ, ਸਾਰੇ 5 ਲੇਖ ਵੇਖੋ।
ਫੰਗਲ ਪੌਦਿਆਂ ਦੀ ਬਿਮਾਰੀ ਨੈਕਰੋਸਿਸ ਸਕਲੇਰੋਟੀਨੀਆ ਸਕਲੇਰੋਟੀਓਰਮ (ਲਿਬ.) ਡੀ ਬੈਰੀ ਦਾ ਕਾਰਕ ਏਜੰਟ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਮੇਜ਼ਬਾਨ ਪੌਦਿਆਂ ਨੂੰ ਸੰਕਰਮਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਬਹੁ-ਪੱਧਰੀ ਰਣਨੀਤੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਅਧਿਐਨ ਡਾਇਮਾਈਨ ਐਲ-ਓਰਨੀਥਾਈਨ, ਇੱਕ ਗੈਰ-ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਅਮੀਨੋ ਐਸਿਡ ਜੋ ਹੋਰ ਜ਼ਰੂਰੀ ਅਮੀਨੋ ਐਸਿਡਾਂ ਦੇ ਸੰਸਲੇਸ਼ਣ ਨੂੰ ਉਤੇਜਿਤ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਦਾ ਪ੍ਰਸਤਾਵ ਕਰਦਾ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ ਸੂਡੋਮੋਨਾਸ ਸਕਲੇਰੋਟੀਓਰਮ ਕਾਰਨ ਹੋਣ ਵਾਲੇ ਚਿੱਟੇ ਉੱਲੀ ਪ੍ਰਤੀ ਫੇਜ਼ੋਲਸ ਵਲਗਾਰਿਸ ਐਲ. ਦੇ ਅਣੂ, ਸਰੀਰਕ ਅਤੇ ਜੈਵ ਰਸਾਇਣਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਵਧਾਇਆ ਜਾ ਸਕੇ। ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ ਐਲ-ਓਰਨੀਥਾਈਨ ਨੇ ਖੁਰਾਕ-ਨਿਰਭਰ ਤਰੀਕੇ ਨਾਲ ਐਸ. ਪਾਈਰੇਨੋਇਡੋਸਾ ਦੇ ਮਾਈਸੀਲੀਅਲ ਵਾਧੇ ਨੂੰ ਕਾਫ਼ੀ ਹੱਦ ਤੱਕ ਰੋਕਿਆ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਇਹ ਗ੍ਰੀਨਹਾਉਸ ਹਾਲਤਾਂ ਵਿੱਚ ਚਿੱਟੇ ਉੱਲੀ ਦੀ ਗੰਭੀਰਤਾ ਨੂੰ ਕਾਫ਼ੀ ਹੱਦ ਤੱਕ ਘਟਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਐਲ-ਓਰਨੀਥਾਈਨ ਨੇ ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਨੂੰ ਉਤੇਜਿਤ ਕੀਤਾ, ਇਹ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਐਲ-ਓਰਨੀਥਾਈਨ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਗਈ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਪੌਦਿਆਂ ਲਈ ਫਾਈਟੋਟੌਕਸਿਕ ਨਹੀਂ ਸੀ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, L-ornithine ਨੇ ਗੈਰ-ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਐਂਟੀਆਕਸੀਡੈਂਟਸ (ਕੁੱਲ ਘੁਲਣਸ਼ੀਲ ਫੀਨੋਲਿਕਸ ਅਤੇ ਫਲੇਵੋਨੋਇਡਜ਼) ਅਤੇ ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਐਂਟੀਆਕਸੀਡੈਂਟਸ (ਕੈਟਾਲੇਸ (CAT), ਪੇਰੋਕਸੀਡੇਸ (POX), ਅਤੇ ਪੌਲੀਫੇਨੋਲ ਆਕਸੀਡੇਸ (PPO)) ਦੀ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਨੂੰ ਵਧਾਇਆ, ਅਤੇ ਤਿੰਨ ਐਂਟੀਆਕਸੀਡੈਂਟ-ਸਬੰਧਤ ਜੀਨਾਂ (PvCAT1, PvSOD, ਅਤੇ PvGR) ਦੀ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਨੂੰ ਵਧਾਇਆ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਸਿਲੀਕੋ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਵਿੱਚ S. sclerotiorum ਜੀਨੋਮ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਪੁਟੇਟਿਵ oxaloacetate acetylhydrolase (SsOAH) ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਦਾ ਖੁਲਾਸਾ ਹੋਇਆ, ਜੋ ਕਿ ਕਾਰਜਸ਼ੀਲ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ, ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਡੋਮੇਨ ਅਤੇ ਟੌਪੋਲੋਜੀ ਦੇ ਮਾਮਲੇ ਵਿੱਚ Aspergillus fijiensis (AfOAH) ਅਤੇ Penicillium sp. (PlOAH) ਦੇ oxaloacetate acetylhydrolase (SsOAH) ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਸਮਾਨ ਸੀ। ਦਿਲਚਸਪ ਗੱਲ ਇਹ ਹੈ ਕਿ, ਆਲੂ ਡੈਕਸਟ੍ਰੋਜ਼ ਬਰੋਥ (PDB) ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ L-ornithine ਦੇ ਜੋੜ ਨੇ S. sclerotiorum mycelia ਵਿੱਚ SsOAH ਜੀਨ ਦੀ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਨੂੰ ਕਾਫ਼ੀ ਘਟਾ ਦਿੱਤਾ। ਇਸੇ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਪੌਦਿਆਂ ਤੋਂ ਇਕੱਠੇ ਕੀਤੇ ਫੰਗਲ ਮਾਈਸੀਲੀਆ ਵਿੱਚ L-ornithine ਦੇ ਬਾਹਰੀ ਉਪਯੋਗ ਨੇ SsOAH ਜੀਨ ਦੇ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਨੂੰ ਕਾਫ਼ੀ ਘਟਾ ਦਿੱਤਾ। ਅੰਤ ਵਿੱਚ, L-ornithine ਦੇ ਉਪਯੋਗ ਨੇ PDB ਮਾਧਿਅਮ ਅਤੇ ਸੰਕਰਮਿਤ ਪੱਤਿਆਂ ਦੋਵਾਂ ਵਿੱਚ ਆਕਸਾਲਿਕ ਐਸਿਡ ਦੇ સ્ત્રાવ ਨੂੰ ਕਾਫ਼ੀ ਘਟਾ ਦਿੱਤਾ। ਸਿੱਟੇ ਵਜੋਂ, L-ornithine ਸੰਕਰਮਿਤ ਪੌਦਿਆਂ ਦੀ ਰੱਖਿਆ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਦੇ ਨਾਲ-ਨਾਲ ਰੈਡੌਕਸ ਸਥਿਤੀ ਨੂੰ ਬਣਾਈ ਰੱਖਣ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਮੁੱਖ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਚਿੱਟੇ ਉੱਲੀ ਨੂੰ ਕੰਟਰੋਲ ਕਰਨ ਅਤੇ ਬੀਨ ਉਤਪਾਦਨ ਅਤੇ ਹੋਰ ਫਸਲਾਂ 'ਤੇ ਇਸਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨੂੰ ਘਟਾਉਣ ਲਈ ਨਵੀਨਤਾਕਾਰੀ, ਵਾਤਾਵਰਣ ਅਨੁਕੂਲ ਤਰੀਕਿਆਂ ਨੂੰ ਵਿਕਸਤ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ।
ਚਿੱਟੀ ਉੱਲੀ, ਜੋ ਕਿ ਨੈਕਰੋਟ੍ਰੋਫਿਕ ਫੰਗਸ ਸਕਲੇਰੋਟੀਨੀਆ ਸਕਲੇਰੋਟੀਓਰਮ (ਲਿਬ.) ਡੀ ਬੈਰੀ ਕਾਰਨ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਇੱਕ ਵਿਨਾਸ਼ਕਾਰੀ, ਉਪਜ ਘਟਾਉਣ ਵਾਲੀ ਬਿਮਾਰੀ ਹੈ ਜੋ ਗਲੋਬਲ ਬੀਨ (ਫੇਜ਼ੋਲਸ ਵਲਗਾਰਿਸ ਐਲ.) ਉਤਪਾਦਨ ਲਈ ਇੱਕ ਗੰਭੀਰ ਖ਼ਤਰਾ ਪੈਦਾ ਕਰਦੀ ਹੈ (ਬੋਲਟਨ ਐਟ ਅਲ., 2006)। ਸਕਲੇਰੋਟੀਨੀਆ ਸਕਲੇਰੋਟੀਓਰਮ ਮਿੱਟੀ ਤੋਂ ਪੈਦਾ ਹੋਣ ਵਾਲੇ ਫੰਗਲ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਰੋਗਾਣੂਆਂ ਵਿੱਚੋਂ ਇੱਕ ਹੈ ਜਿਸਨੂੰ ਕੰਟਰੋਲ ਕਰਨਾ ਸਭ ਤੋਂ ਮੁਸ਼ਕਲ ਹੈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ 600 ਤੋਂ ਵੱਧ ਪੌਦਿਆਂ ਦੀਆਂ ਕਿਸਮਾਂ ਦੀ ਇੱਕ ਵਿਸ਼ਾਲ ਮੇਜ਼ਬਾਨ ਸ਼੍ਰੇਣੀ ਹੈ ਅਤੇ ਇੱਕ ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਤਰੀਕੇ ਨਾਲ ਮੇਜ਼ਬਾਨ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਨੂੰ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਮੈਸਰੇਟ ਕਰਨ ਦੀ ਸਮਰੱਥਾ ਹੈ (ਲਿਆਂਗ ਅਤੇ ਰੋਲਿਨਸ, 2018)। ਪ੍ਰਤੀਕੂਲ ਹਾਲਤਾਂ ਵਿੱਚ, ਇਹ ਆਪਣੇ ਜੀਵਨ ਚੱਕਰ ਦੇ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਪੜਾਅ ਵਿੱਚੋਂ ਗੁਜ਼ਰਦਾ ਹੈ, ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਮਿੱਟੀ ਵਿੱਚ ਕਾਲੇ, ਸਖ਼ਤ, ਬੀਜ ਵਰਗੇ ਢਾਂਚੇ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਜਾਂ ਸੰਕਰਮਿਤ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਮਾਈਸੀਲੀਅਮ ਜਾਂ ਸਟੈਮ ਪਿਥ ਵਿੱਚ ਚਿੱਟੇ, ਫੁੱਲਦਾਰ ਵਾਧੇ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਸੁਸਤ ਰਹਿੰਦਾ ਹੈ (ਸ਼ਵਾਰਟਜ਼ ਐਟ ਅਲ., 2005)। ਐਸ. ਸਕਲੇਰੋਟੀਓਰਮ ਸਕਲੇਰੋਟੀਆ ਬਣਾਉਣ ਦੇ ਸਮਰੱਥ ਹੈ, ਜੋ ਇਸਨੂੰ ਸੰਕਰਮਿਤ ਖੇਤਾਂ ਵਿੱਚ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਜਿਉਂਦਾ ਰਹਿਣ ਅਤੇ ਬਿਮਾਰੀ ਦੌਰਾਨ ਬਣੇ ਰਹਿਣ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦਾ ਹੈ (ਸ਼ਵਾਰਟਜ਼ ਐਟ ਅਲ., 2005)। ਸਕਲੇਰੋਟੀਆ ਪੌਸ਼ਟਿਕ ਤੱਤਾਂ ਨਾਲ ਭਰਪੂਰ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਮਿੱਟੀ ਵਿੱਚ ਰਹਿ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਬਾਅਦ ਦੀਆਂ ਲਾਗਾਂ ਲਈ ਪ੍ਰਾਇਮਰੀ ਟੀਕਾ ਵਜੋਂ ਕੰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ (ਸ਼ਵਾਰਟਜ਼ ਐਟ ਅਲ., 2005)। ਅਨੁਕੂਲ ਹਾਲਤਾਂ ਵਿੱਚ, ਸਕਲੇਰੋਟੀਆ ਉਗਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਹਵਾ ਵਿੱਚ ਫੈਲਣ ਵਾਲੇ ਬੀਜਾਣੂ ਪੈਦਾ ਕਰਦਾ ਹੈ ਜੋ ਪੌਦੇ ਦੇ ਉੱਪਰਲੇ ਸਾਰੇ ਹਿੱਸਿਆਂ ਨੂੰ ਸੰਕਰਮਿਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਫੁੱਲ, ਤਣੇ ਜਾਂ ਫਲੀਆਂ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ ਪਰ ਇਹਨਾਂ ਤੱਕ ਸੀਮਿਤ ਨਹੀਂ ਹਨ (ਸ਼ਵਾਰਟਜ਼ ਐਟ ਅਲ., 2005)।
ਸਕਲੇਰੋਟੀਨੀਆ ਸਕਲੇਰੋਟੀਓਰਮ ਆਪਣੇ ਮੇਜ਼ਬਾਨ ਪੌਦਿਆਂ ਨੂੰ ਸੰਕਰਮਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਬਹੁ-ਪੱਧਰੀ ਰਣਨੀਤੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਸਕਲੇਰੋਟੀਅਲ ਉਗਣ ਤੋਂ ਲੈ ਕੇ ਲੱਛਣ ਵਿਕਾਸ ਤੱਕ ਤਾਲਮੇਲ ਵਾਲੀਆਂ ਘਟਨਾਵਾਂ ਦੀ ਇੱਕ ਲੜੀ ਸ਼ਾਮਲ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। ਸ਼ੁਰੂ ਵਿੱਚ, ਐਸ. ਸਕਲੇਰੋਟੀਓਰਮ ਮਸ਼ਰੂਮ ਵਰਗੀਆਂ ਬਣਤਰਾਂ ਤੋਂ ਮੁਅੱਤਲ ਸਪੋਰਸ (ਐਸਕੋਸਪੋਰਸ ਕਹਿੰਦੇ ਹਨ) ਪੈਦਾ ਕਰਦਾ ਹੈ ਜਿਸਨੂੰ ਐਪੋਥੀਸੀਆ ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਹਵਾ ਵਿੱਚ ਬਣ ਜਾਂਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਸੰਕਰਮਿਤ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਮਲਬੇ 'ਤੇ ਗੈਰ-ਗਤੀਸ਼ੀਲ ਸਕਲੇਰੋਟੀਆ ਵਿੱਚ ਵਿਕਸਤ ਹੁੰਦੇ ਹਨ (ਬੋਲਟਨ ਐਟ ਅਲ., 2006)। ਫਿਰ ਉੱਲੀ ਪੌਦੇ ਦੀ ਸੈੱਲ ਕੰਧ pH ਨੂੰ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਕਰਨ, ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਡਿਗਰੇਡੇਸ਼ਨ ਅਤੇ ਟਿਸ਼ੂ ਹਮਲੇ ਨੂੰ ਉਤਸ਼ਾਹਿਤ ਕਰਨ (ਹੇਗੇਡਸ ਅਤੇ ਰਿਮਰ, 2005), ਅਤੇ ਮੇਜ਼ਬਾਨ ਪੌਦੇ ਦੇ ਆਕਸੀਡੇਟਿਵ ਫਟਣ ਨੂੰ ਦਬਾਉਣ ਲਈ ਆਕਸਾਲਿਕ ਐਸਿਡ, ਇੱਕ ਵਾਇਰਲੈਂਸ ਫੈਕਟਰ ਨੂੰ ਛੁਪਾਉਂਦੀ ਹੈ। ਇਹ ਐਸਿਡੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਪੌਦੇ ਦੀ ਸੈੱਲ ਕੰਧ ਨੂੰ ਕਮਜ਼ੋਰ ਕਰਦੀ ਹੈ, ਫੰਗਲ ਸੈੱਲ ਕੰਧ ਡੀਗ੍ਰੇਡਿੰਗ ਐਨਜ਼ਾਈਮਜ਼ (CWDEs) ਦੇ ਆਮ ਅਤੇ ਕੁਸ਼ਲ ਸੰਚਾਲਨ ਲਈ ਇੱਕ ਅਨੁਕੂਲ ਵਾਤਾਵਰਣ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦੀ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਜਰਾਸੀਮ ਭੌਤਿਕ ਰੁਕਾਵਟ ਨੂੰ ਪਾਰ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਮੇਜ਼ਬਾਨ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਵੇਸ਼ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ (ਮਾਰਸੀਆਨੋ ਐਟ ਅਲ., 1983)। ਇੱਕ ਵਾਰ ਅੰਦਰ ਜਾਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਐਸ. ਸਕਲੇਰੋਟੀਓਰਮ ਕਈ CWDEs ਨੂੰ ਛੁਪਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਪੌਲੀਗੈਲੈਕਟੂਰੋਨੇਸ ਅਤੇ ਸੈਲੂਲੇਜ਼, ਜੋ ਸੰਕਰਮਿਤ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਵਿੱਚ ਇਸਦੇ ਪ੍ਰਸਾਰ ਨੂੰ ਸੌਖਾ ਬਣਾਉਂਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਟਿਸ਼ੂ ਨੈਕਰੋਸਿਸ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਦੇ ਹਨ। ਜਖਮਾਂ ਅਤੇ ਹਾਈਫਲ ਮੈਟਾਂ ਦੀ ਪ੍ਰਗਤੀ ਚਿੱਟੇ ਉੱਲੀ ਦੇ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਲੱਛਣਾਂ ਵੱਲ ਲੈ ਜਾਂਦੀ ਹੈ (ਹੇਗੇਡਸ ਅਤੇ ਰਿਮਰ, 2005)। ਇਸ ਦੌਰਾਨ, ਮੇਜ਼ਬਾਨ ਪੌਦੇ ਪੈਟਰਨ ਪਛਾਣ ਰੀਸੈਪਟਰਾਂ (PRRs) ਰਾਹੀਂ ਜਰਾਸੀਮ-ਸਬੰਧਤ ਅਣੂ ਪੈਟਰਨਾਂ (PAMPs) ਨੂੰ ਪਛਾਣਦੇ ਹਨ, ਜੋ ਸਿਗਨਲਿੰਗ ਘਟਨਾਵਾਂ ਦੀ ਇੱਕ ਲੜੀ ਨੂੰ ਚਾਲੂ ਕਰਦੇ ਹਨ ਜੋ ਅੰਤ ਵਿੱਚ ਰੱਖਿਆ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰਦੇ ਹਨ।
ਦਹਾਕਿਆਂ ਤੋਂ ਬਿਮਾਰੀ ਨਿਯੰਤਰਣ ਦੇ ਯਤਨਾਂ ਦੇ ਬਾਵਜੂਦ, ਬੀਨਜ਼ ਵਿੱਚ, ਹੋਰ ਵਪਾਰਕ ਫਸਲਾਂ ਵਾਂਗ, ਰੋਗਾਣੂ ਦੇ ਵਿਰੋਧ, ਬਚਾਅ ਅਤੇ ਅਨੁਕੂਲਤਾ ਦੇ ਕਾਰਨ, ਢੁਕਵੇਂ ਰੋਧਕ ਜਰਮਪਲਾਜ਼ਮ ਦੀ ਘਾਟ ਬਣੀ ਹੋਈ ਹੈ। ਇਸ ਲਈ ਬਿਮਾਰੀ ਪ੍ਰਬੰਧਨ ਬਹੁਤ ਚੁਣੌਤੀਪੂਰਨ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸ ਲਈ ਇੱਕ ਏਕੀਕ੍ਰਿਤ, ਬਹੁਪੱਖੀ ਰਣਨੀਤੀ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਸੱਭਿਆਚਾਰਕ ਅਭਿਆਸਾਂ, ਜੈਵਿਕ ਨਿਯੰਤਰਣ, ਅਤੇ ਰਸਾਇਣਕ ਉੱਲੀਨਾਸ਼ਕਾਂ ਦਾ ਸੁਮੇਲ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ (ਓ'ਸੁਲੀਵਾਨ ਐਟ ਅਲ., 2021)। ਚਿੱਟੇ ਉੱਲੀ ਦਾ ਰਸਾਇਣਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਸਭ ਤੋਂ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਹੈ ਕਿਉਂਕਿ ਉੱਲੀਨਾਸ਼ਕ, ਜਦੋਂ ਸਹੀ ਅਤੇ ਸਹੀ ਸਮੇਂ 'ਤੇ ਲਾਗੂ ਕੀਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ, ਤਾਂ ਬਿਮਾਰੀ ਦੇ ਫੈਲਣ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਕੰਟਰੋਲ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਲਾਗ ਦੀ ਗੰਭੀਰਤਾ ਨੂੰ ਘਟਾ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਉਪਜ ਦੇ ਨੁਕਸਾਨ ਨੂੰ ਘੱਟ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਉੱਲੀਨਾਸ਼ਕਾਂ 'ਤੇ ਜ਼ਿਆਦਾ ਵਰਤੋਂ ਅਤੇ ਜ਼ਿਆਦਾ ਨਿਰਭਰਤਾ ਐਸ. ਸਕਲੇਰੋਟੀਓਰਮ ਦੇ ਰੋਧਕ ਕਿਸਮਾਂ ਦੇ ਉਭਾਰ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣ ਸਕਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਗੈਰ-ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਜੀਵਾਂ, ਮਿੱਟੀ ਦੀ ਸਿਹਤ ਅਤੇ ਪਾਣੀ ਦੀ ਗੁਣਵੱਤਾ 'ਤੇ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਪ੍ਰਭਾਵ ਪਾ ਸਕਦੀ ਹੈ (ਲੇ ਕੋਇੰਟੇ ਐਟ ਅਲ., 2016; ਸੇਰੇਸਿਨੀ ਐਟ ਅਲ., 2024)। ਇਸ ਲਈ, ਵਾਤਾਵਰਣ ਅਨੁਕੂਲ ਵਿਕਲਪ ਲੱਭਣਾ ਇੱਕ ਪ੍ਰਮੁੱਖ ਤਰਜੀਹ ਬਣ ਗਈ ਹੈ।
ਪੌਲੀਅਮਾਈਨ (ਪੀਏ), ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਪੁਟਰੇਸਾਈਨ, ਸਪਰਮਾਈਡਾਈਨ, ਸਪਰਮਾਈਨ, ਅਤੇ ਕੈਡਾਵਰਾਈਨ, ਮਿੱਟੀ ਤੋਂ ਪੈਦਾ ਹੋਣ ਵਾਲੇ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਰੋਗਾਣੂਆਂ ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ ਵਾਅਦਾ ਕਰਨ ਵਾਲੇ ਵਿਕਲਪਾਂ ਵਜੋਂ ਕੰਮ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਖਤਰਨਾਕ ਰਸਾਇਣਕ ਉੱਲੀਨਾਸ਼ਕਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਨੂੰ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਜਾਂ ਅੰਸ਼ਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਘਟਾਉਂਦੇ ਹਨ (ਨੇਹੇਲਾ ਐਟ ਅਲ., 2024; ਯੀ ਐਟ ਅਲ., 2024)। ਉੱਚ ਪੌਦਿਆਂ ਵਿੱਚ, ਪੀਏ ਬਹੁਤ ਸਾਰੀਆਂ ਸਰੀਰਕ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਸੈੱਲ ਡਿਵੀਜ਼ਨ, ਵਿਭਿੰਨਤਾ, ਅਤੇ ਅਬਾਇਓਟਿਕ ਅਤੇ ਬਾਇਓਟਿਕ ਤਣਾਅ ਪ੍ਰਤੀ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ, ਪਰ ਇਹਨਾਂ ਤੱਕ ਸੀਮਿਤ ਨਹੀਂ ਹੈ (ਕਿਲਿਨੀ ਅਤੇ ਨੇਹੇਲਾ, 2020)। ਇਹ ਐਂਟੀਆਕਸੀਡੈਂਟ ਵਜੋਂ ਕੰਮ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਆਕਸੀਜਨ ਪ੍ਰਜਾਤੀਆਂ (ROS) ਨੂੰ ਸਾਫ਼ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਰੈਡੌਕਸ ਹੋਮਿਓਸਟੈਸਿਸ ਨੂੰ ਬਣਾਈ ਰੱਖ ਸਕਦੇ ਹਨ (ਨੇਹੇਲਾ ਅਤੇ ਕਿਲੀਨੀ, 2023), ਰੱਖਿਆ-ਸਬੰਧਤ ਜੀਨਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ (ਰੋਮੇਰੋ ਐਟ ਅਲ., 2018), ਵੱਖ-ਵੱਖ ਪਾਚਕ ਮਾਰਗਾਂ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ (ਨੇਹੇਲਾ ਅਤੇ ਕਿਲੀਨੀ, 2023), ਐਂਡੋਜੇਨਸ ਫਾਈਟੋਹਾਰਮੋਨਸ (ਨੇਹੇਲਾ ਅਤੇ ਕਿਲੀਨੀ, 2019), ਪ੍ਰਣਾਲੀਗਤ ਪ੍ਰਾਪਤ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ (SAR) ਸਥਾਪਤ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਪੌਦੇ-ਰੋਗਾਣੂ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤ੍ਰਿਤ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ (ਨੇਹੇਲਾ ਅਤੇ ਕਿਲੀਨੀ, 2020; ਅਸੀਜਾ ਐਟ ਅਲ., 2022; ਜ਼ੇਰਵੋਨੀਕ, 2022)। ਇਹ ਧਿਆਨ ਦੇਣ ਯੋਗ ਹੈ ਕਿ ਪੌਦਿਆਂ ਦੀ ਰੱਖਿਆ ਵਿੱਚ PAs ਦੇ ਖਾਸ ਵਿਧੀ ਅਤੇ ਭੂਮਿਕਾਵਾਂ ਪੌਦਿਆਂ ਦੀਆਂ ਕਿਸਮਾਂ, ਰੋਗਾਣੂਆਂ ਅਤੇ ਵਾਤਾਵਰਣ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੇ ਅਧਾਰ ਤੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਹੁੰਦੀਆਂ ਹਨ। ਪੌਦਿਆਂ ਵਿੱਚ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਭਰਪੂਰ PA ਜ਼ਰੂਰੀ ਪੋਲੀਅਮਾਈਨ L-ornithine (ਕਿਲੀਨੀ ਅਤੇ ਨੇਹੇਲਾ, 2020) ਤੋਂ ਬਾਇਓਸਿੰਥੇਸਾਈਜ਼ਡ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।
ਐਲ-ਓਰਨੀਥਾਈਨ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਅਤੇ ਵਿਕਾਸ ਵਿੱਚ ਕਈ ਭੂਮਿਕਾਵਾਂ ਨਿਭਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਉਦਾਹਰਣ ਵਜੋਂ, ਪਿਛਲੇ ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ ਚੌਲਾਂ (ਓਰੀਜ਼ਾ ਸੈਟੀਵਾ) ਵਿੱਚ, ਓਰਨੀਥਾਈਨ ਨਾਈਟ੍ਰੋਜਨ ਰੀਸਾਈਕਲਿੰਗ (ਲਿਊ ਐਟ ਅਲ., 2018), ਚੌਲਾਂ ਦੀ ਉਪਜ, ਗੁਣਵੱਤਾ ਅਤੇ ਖੁਸ਼ਬੂ (ਲੂ ਐਟ ਅਲ., 2020), ਅਤੇ ਪਾਣੀ ਦੇ ਤਣਾਅ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ (ਯਾਂਗ ਐਟ ਅਲ., 2000) ਨਾਲ ਜੁੜਿਆ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਐਲ-ਓਰਨੀਥਾਈਨ ਦੇ ਬਾਹਰੀ ਉਪਯੋਗ ਨੇ ਸ਼ੂਗਰ ਬੀਟ (ਬੀਟਾ ਵਲਗਾਰਿਸ) (ਹੁਸੈਨ ਐਟ ਅਲ., 2019) ਵਿੱਚ ਸੋਕੇ ਸਹਿਣਸ਼ੀਲਤਾ ਨੂੰ ਕਾਫ਼ੀ ਵਧਾਇਆ ਅਤੇ ਪਿਆਜ਼ (ਐਲੀਅਮ ਸੇਪਾ) (ਕਾਵੁਸੋǧਲੂ ਅਤੇ ਕਾਵੁਸੋǧਲੂ, 2021) ਅਤੇ ਕਾਜੂ (ਐਨਾਕਾਰਡੀਅਮ ਓਕਸੀਡੈਂਟੇਲ) ਪੌਦਿਆਂ (ਦਾ ਰੋਚਾ ਐਟ ਅਲ., 2012) ਵਿੱਚ ਨਮਕ ਦੇ ਤਣਾਅ ਨੂੰ ਘਟਾਇਆ। ਐਬਾਇਓਟਿਕ ਤਣਾਅ ਬਚਾਅ ਵਿੱਚ ਐਲ-ਓਰਨੀਥਾਈਨ ਦੀ ਸੰਭਾਵੀ ਭੂਮਿਕਾ ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਪੌਦਿਆਂ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰੋਲਾਈਨ ਇਕੱਠਾ ਹੋਣ ਵਿੱਚ ਇਸਦੀ ਸ਼ਮੂਲੀਅਤ ਦੇ ਕਾਰਨ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ। ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ, ਪ੍ਰੋਲਾਈਨ ਮੈਟਾਬੋਲਿਜ਼ਮ ਨਾਲ ਸਬੰਧਤ ਜੀਨ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਔਰਨੀਥਾਈਨ ਡੈਲਟਾ ਐਮੀਨੋਟ੍ਰਾਂਸਫੇਰੇਜ਼ (ਡੈਲਟਾ-ਓਏਟੀ) ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਲਾਈਨ ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੋਜਨੇਸ (ਪ੍ਰੋਡੀਐਚ1 ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਡੀਐਚ2) ਜੀਨ, ਪਹਿਲਾਂ ਗੈਰ-ਹੋਸਟ ਸੂਡੋਮੋਨਾਸ ਸਿਰਿੰਗੇ ਸਟ੍ਰੇਨ (ਸੈਂਟਿਲ-ਕੁਮਾਰ ਅਤੇ ਮੈਸੂਰ, 2012) ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ ਨਿਕੋਟੀਆਨਾ ਬੈਂਥਮੀਆਨਾ ਅਤੇ ਅਰਬੀਡੋਪਸਿਸ ਥਾਲੀਆਨਾ ਦੇ ਬਚਾਅ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹੋਣ ਦੀ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ। ਦੂਜੇ ਪਾਸੇ, ਜਰਾਸੀਮ ਦੇ ਵਾਧੇ ਲਈ ਫੰਗਲ ਔਰਨੀਥਾਈਨ ਡੀਕਾਰਬੋਕਸੀਲੇਜ਼ (ਓਡੀਸੀ) ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ (ਸਿੰਘ ਐਟ ਅਲ., 2020)। ਹੋਸਟ-ਪ੍ਰੇਰਿਤ ਜੀਨ ਸਾਈਲੈਂਸਿੰਗ (HIGS) ਦੁਆਰਾ ਫੁਸਾਰੀਅਮ ਆਕਸੀਸਪੋਰਮ ਐਫ. ਐਸਪੀ. ਲਾਈਕੋਪਰਸੀਸੀ ਦੇ ODC ਨੂੰ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਬਣਾਉਣ ਨਾਲ ਟਮਾਟਰ ਦੇ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਫੁਸਾਰੀਅਮ ਵਿਲਟ (ਸਿੰਘ ਐਟ ਅਲ., 2020) ਪ੍ਰਤੀ ਵਿਰੋਧ ਵਿੱਚ ਕਾਫ਼ੀ ਵਾਧਾ ਹੋਇਆ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਫਾਈਟੋਪੈਥੋਜਨ ਵਰਗੇ ਬਾਇਓਟਿਕ ਤਣਾਅ ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ ਬਾਹਰੀ ਔਰਨੀਥਾਈਨ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨ ਦੀ ਸੰਭਾਵੀ ਭੂਮਿਕਾ ਦਾ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਅਧਿਐਨ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਵੀ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਗੱਲ ਇਹ ਹੈ ਕਿ ਰੋਗ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ ਅਤੇ ਸੰਬੰਧਿਤ ਬਾਇਓਕੈਮੀਕਲ ਅਤੇ ਸਰੀਰਕ ਵਰਤਾਰੇ 'ਤੇ ਔਰਨੀਥਾਈਨ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਵੱਡੇ ਪੱਧਰ 'ਤੇ ਅਣਪਛਾਤੇ ਹਨ।
ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਨਿਯੰਤਰਣ ਰਣਨੀਤੀਆਂ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਲਈ ਫਲ਼ੀਦਾਰਾਂ ਦੇ ਐਸ. ਸਕਲੇਰੋਟੀਓਰਮ ਇਨਫੈਕਸ਼ਨ ਦੀ ਜਟਿਲਤਾ ਨੂੰ ਸਮਝਣਾ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ। ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ ਸਕਲੇਰੋਟੀਨੀਆ ਸਕਲੇਰੋਟੀਓਰਮ ਇਨਫੈਕਸ਼ਨ ਪ੍ਰਤੀ ਫਲ਼ੀਦਾਰਾਂ ਦੇ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਬਚਾਅ ਵਿਧੀਆਂ ਅਤੇ ਵਿਰੋਧ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਮੁੱਖ ਕਾਰਕ ਵਜੋਂ ਡਾਇਮਾਈਨ ਐਲ-ਓਰਨੀਥਾਈਨ ਦੀ ਸੰਭਾਵੀ ਭੂਮਿਕਾ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕਰਨ ਦਾ ਉਦੇਸ਼ ਰੱਖਿਆ ਕੀਤਾ ਹੈ। ਅਸੀਂ ਇਹ ਅਨੁਮਾਨ ਲਗਾਉਂਦੇ ਹਾਂ ਕਿ, ਸੰਕਰਮਿਤ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਬਚਾਅ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਐਲ-ਓਰਨੀਥਾਈਨ ਰੈਡੌਕਸ ਸਥਿਤੀ ਨੂੰ ਬਣਾਈ ਰੱਖਣ ਵਿੱਚ ਵੀ ਇੱਕ ਮੁੱਖ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਅਸੀਂ ਪ੍ਰਸਤਾਵਿਤ ਕਰਦੇ ਹਾਂ ਕਿ ਐਲ-ਓਰਨੀਥਾਈਨ ਦੇ ਸੰਭਾਵੀ ਪ੍ਰਭਾਵ ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਅਤੇ ਗੈਰ-ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਐਂਟੀਆਕਸੀਡੈਂਟ ਰੱਖਿਆ ਵਿਧੀਆਂ ਦੇ ਨਿਯਮਨ ਅਤੇ ਫੰਗਲ ਰੋਗਾਣੂ/ਵਾਇਰੂਲੈਂਸ ਕਾਰਕਾਂ ਅਤੇ ਸੰਬੰਧਿਤ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨਾਲ ਦਖਲਅੰਦਾਜ਼ੀ ਨਾਲ ਸਬੰਧਤ ਹਨ। ਐਲ-ਓਰਨੀਥਾਈਨ ਦੀ ਇਹ ਦੋਹਰੀ ਕਾਰਜਸ਼ੀਲਤਾ ਇਸਨੂੰ ਚਿੱਟੇ ਉੱਲੀ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨੂੰ ਘਟਾਉਣ ਅਤੇ ਇਸ ਸ਼ਕਤੀਸ਼ਾਲੀ ਫੰਗਲ ਰੋਗਾਣੂ ਪ੍ਰਤੀ ਆਮ ਫਲ਼ੀਦਾਰਾਂ ਦੀਆਂ ਫਸਲਾਂ ਦੇ ਵਿਰੋਧ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਇੱਕ ਟਿਕਾਊ ਰਣਨੀਤੀ ਲਈ ਇੱਕ ਵਾਅਦਾ ਕਰਨ ਵਾਲਾ ਉਮੀਦਵਾਰ ਬਣਾਉਂਦੀ ਹੈ। ਮੌਜੂਦਾ ਅਧਿਐਨ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਚਿੱਟੇ ਉੱਲੀ ਨੂੰ ਕੰਟਰੋਲ ਕਰਨ ਅਤੇ ਫਲ਼ੀਦਾਰਾਂ ਦੇ ਉਤਪਾਦਨ 'ਤੇ ਇਸਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨੂੰ ਘਟਾਉਣ ਲਈ ਨਵੀਨਤਾਕਾਰੀ, ਵਾਤਾਵਰਣ ਅਨੁਕੂਲ ਤਰੀਕਿਆਂ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਨ।
ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ, ਆਮ ਬੀਨ ਦੀ ਇੱਕ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਵਪਾਰਕ ਕਿਸਮ, ਗੀਜ਼ਾ 3 (ਫੇਜ਼ੋਲਸ ਵਲਗਾਰਿਸ ਐਲ. ਸੀਵੀ. ਗੀਜ਼ਾ 3), ਨੂੰ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਸਮੱਗਰੀ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਸਿਹਤਮੰਦ ਬੀਜ ਮਿਸਰ ਦੇ ਫੀਲਡ ਕਰੌਪਸ ਰਿਸਰਚ ਇੰਸਟੀਚਿਊਟ (ਐਫਸੀਆਰਆਈ), ਐਗਰੀਕਲਚਰਲ ਰਿਸਰਚ ਸੈਂਟਰ (ਏਆਰਸੀ), ਫਲੀ ਖੋਜ ਵਿਭਾਗ ਦੁਆਰਾ ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ। ਗ੍ਰੀਨਹਾਊਸ ਹਾਲਤਾਂ (25 ± 2 °C, ਸਾਪੇਖਿਕ ਨਮੀ 75 ± 1%, 8 ਘੰਟੇ ਹਲਕਾ/16 ਘੰਟੇ ਹਨੇਰਾ) ਦੇ ਅਧੀਨ ਐਸ. ਸਕਲੇਰੋਟੀਓਰਮ-ਸੰਕਰਮਿਤ ਮਿੱਟੀ ਨਾਲ ਭਰੇ ਪਲਾਸਟਿਕ ਦੇ ਗਮਲਿਆਂ (ਅੰਦਰੂਨੀ ਵਿਆਸ 35 ਸੈਂਟੀਮੀਟਰ, ਡੂੰਘਾਈ 50 ਸੈਂਟੀਮੀਟਰ) ਵਿੱਚ ਪੰਜ ਬੀਜ ਬੀਜੇ ਗਏ ਸਨ। ਬਿਜਾਈ ਤੋਂ 7-10 ਦਿਨਾਂ ਬਾਅਦ (ਡੀਪੀਐਸ), ਬੂਟਿਆਂ ਨੂੰ ਪਤਲਾ ਕਰ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਤਾਂ ਜੋ ਹਰੇਕ ਗਮਲੇ ਵਿੱਚ ਇੱਕਸਾਰ ਵਿਕਾਸ ਵਾਲੇ ਸਿਰਫ ਦੋ ਪੌਦੇ ਅਤੇ ਤਿੰਨ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਫੈਲੇ ਹੋਏ ਪੱਤੇ ਰਹਿ ਜਾਣ। ਸਾਰੇ ਗਮਲੇ ਵਾਲੇ ਪੌਦਿਆਂ ਨੂੰ ਹਰ ਦੋ ਹਫ਼ਤਿਆਂ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਵਾਰ ਪਾਣੀ ਦਿੱਤਾ ਜਾਂਦਾ ਸੀ ਅਤੇ ਦਿੱਤੀ ਗਈ ਕਿਸਮ ਲਈ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਦਰ 'ਤੇ ਮਹੀਨਾਵਾਰ ਖਾਦ ਦਿੱਤੀ ਜਾਂਦੀ ਸੀ।
L-ornithinediamine (ਜਿਸਨੂੰ (+)-(S)-2,5-diaminopentanoic acid; Sigma-Aldrich, Darmstadt, Germany ਵੀ ਕਿਹਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ) ਦੀ 500 mg/L ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਤਿਆਰ ਕਰਨ ਲਈ, 50 mg ਪਹਿਲਾਂ 100 mL ਨਿਰਜੀਵ ਡਿਸਟਿਲਡ ਪਾਣੀ ਵਿੱਚ ਘੋਲਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਫਿਰ ਸਟਾਕ ਘੋਲ ਨੂੰ ਪਤਲਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ ਬਾਅਦ ਦੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਵਿੱਚ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ। ਸੰਖੇਪ ਵਿੱਚ, L-ornithine ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦੀਆਂ ਛੇ ਲੜੀਵਾਰਾਂ (12.5, 25, 50, 75, 100, ਅਤੇ 125 mg/L) ਦੀ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਗਈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਨਿਰਜੀਵ ਡਿਸਟਿਲਡ ਪਾਣੀ ਨੂੰ ਇੱਕ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਣ (ਮੌਕ) ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਅਤੇ ਵਪਾਰਕ ਉੱਲੀਨਾਸ਼ਕ "Rizolex-T" 50% ਗਿੱਲਾ ਕਰਨ ਯੋਗ ਪਾਊਡਰ (toclofos-methyl 20% + thiram 30%; KZ-Kafr El Zayat Pesticides and Chemicals Company, Kafr El Zayat, Gharbia Governorate, Egypt) ਨੂੰ ਇੱਕ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ। ਵਪਾਰਕ ਉੱਲੀਨਾਸ਼ਕ "ਰਾਈਜ਼ੋਲੈਕਸ-ਟੀ" ਦੀ ਜਾਂਚ ਪੰਜ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ (2, 4, 6, 8 ਅਤੇ 10 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਲੀਟਰ) 'ਤੇ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਵਿੱਚ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।
ਵਪਾਰਕ ਫਾਰਮਾਂ ਤੋਂ ਆਮ ਬੀਨ ਦੇ ਤਣਿਆਂ ਅਤੇ ਫਲੀਆਂ ਦੇ ਨਮੂਨੇ ਇਕੱਠੇ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ ਜੋ ਚਿੱਟੇ ਉੱਲੀ ਦੇ ਖਾਸ ਲੱਛਣ ਦਿਖਾਉਂਦੇ ਹਨ (ਸੰਕਰਮਣ ਦਰ: 10-30%)। ਹਾਲਾਂਕਿ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਸੰਕਰਮਿਤ ਪੌਦਿਆਂ ਦੀਆਂ ਸਮੱਗਰੀਆਂ ਦੀ ਪਛਾਣ ਪ੍ਰਜਾਤੀਆਂ/ਕਿਸਮਾਂ (ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਵਪਾਰਕ ਕਿਸਮ ਗੀਜ਼ਾ 3) ਦੁਆਰਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ, ਹੋਰ, ਖਾਸ ਕਰਕੇ ਸਥਾਨਕ ਬਾਜ਼ਾਰਾਂ ਤੋਂ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੀਆਂ ਗਈਆਂ, ਅਣਜਾਣ ਪ੍ਰਜਾਤੀਆਂ ਦੀਆਂ ਸਨ। ਇਕੱਠੀਆਂ ਕੀਤੀਆਂ ਸੰਕਰਮਿਤ ਸਮੱਗਰੀਆਂ ਨੂੰ ਪਹਿਲਾਂ 0.5% ਸੋਡੀਅਮ ਹਾਈਪੋਕਲੋਰਾਈਟ ਘੋਲ ਨਾਲ 3 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਸਤ੍ਹਾ ਤੋਂ ਰੋਗਾਣੂ ਮੁਕਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਫਿਰ ਕਈ ਵਾਰ ਨਿਰਜੀਵ ਡਿਸਟਿਲਡ ਪਾਣੀ ਨਾਲ ਧੋਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ ਵਾਧੂ ਪਾਣੀ ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਲਈ ਨਿਰਜੀਵ ਫਿਲਟਰ ਪੇਪਰ ਨਾਲ ਸੁੱਕਾ ਪੂੰਝਿਆ ਗਿਆ। ਫਿਰ ਸੰਕਰਮਿਤ ਅੰਗਾਂ ਨੂੰ ਵਿਚਕਾਰਲੇ ਟਿਸ਼ੂ (ਤੰਦਰੁਸਤ ਅਤੇ ਸੰਕਰਮਿਤ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ) ਤੋਂ ਛੋਟੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਵਿੱਚ ਕੱਟਿਆ ਗਿਆ, ਆਲੂ ਡੈਕਸਟ੍ਰੋਜ਼ ਅਗਰ (PDA) ਮਾਧਿਅਮ 'ਤੇ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ ਸਕਲੇਰੋਟੀਆ ਗਠਨ ਨੂੰ ਉਤੇਜਿਤ ਕਰਨ ਲਈ 5 ਦਿਨਾਂ ਲਈ 12 ਘੰਟੇ ਦੀ ਰੌਸ਼ਨੀ/12 ਘੰਟੇ ਦੇ ਹਨੇਰੇ ਚੱਕਰ ਨਾਲ 25 ± 2 °C 'ਤੇ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। ਮਾਈਸੀਲੀਅਲ ਟਿਪ ਵਿਧੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਮਿਸ਼ਰਤ ਜਾਂ ਦੂਸ਼ਿਤ ਕਲਚਰ ਤੋਂ ਫੰਗਲ ਆਈਸੋਲੇਟਸ ਨੂੰ ਸ਼ੁੱਧ ਕਰਨ ਲਈ ਵੀ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਸ਼ੁੱਧ ਫੰਗਲ ਆਈਸੋਲੇਟ ਦੀ ਪਛਾਣ ਪਹਿਲਾਂ ਇਸਦੇ ਸੱਭਿਆਚਾਰਕ ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨਿਕ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਦੇ ਅਧਾਰ ਤੇ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ ਅਤੇ ਫਿਰ ਸੂਖਮ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਦੇ ਅਧਾਰ ਤੇ ਐਸ. ਸਕਲੇਰੋਟੀਓਰਮ ਹੋਣ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਅੰਤ ਵਿੱਚ, ਕੋਚ ਦੇ ਸਿਧਾਂਤਾਂ ਨੂੰ ਪੂਰਾ ਕਰਨ ਲਈ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਆਮ ਬੀਨ ਕਿਸਮ ਗੀਜ਼ਾ 3 'ਤੇ ਸਾਰੇ ਸ਼ੁੱਧ ਆਈਸੋਲੇਟਾਂ ਦੀ ਜਰਾਸੀਮਤਾ ਲਈ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਗਈ।
ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਹਮਲਾਵਰ ਐਸ. ਸਕਲੇਰੋਟੀਓਰਮ ਆਈਸੋਲੇਟ (ਆਈਸੋਲੇਟ #3) ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਵਾਈਟ ਐਟ ਅਲ., 1990; ਬਟੂਰੋ-ਸੀਸਨੀਵਸਕਾ ਐਟ ਅਲ., 2017 ਦੁਆਰਾ ਦੱਸੇ ਗਏ ਅੰਦਰੂਨੀ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਾਈਬਡ ਸਪੇਸਰ (ITS) ਸੀਕਵੈਂਸਿੰਗ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਸੰਖੇਪ ਵਿੱਚ, ਆਈਸੋਲੇਟਸ ਨੂੰ ਆਲੂ ਡੈਕਸਟ੍ਰੋਜ਼ ਬਰੋਥ (PDB) ਵਿੱਚ ਕਲਚਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ 5-7 ਦਿਨਾਂ ਲਈ 25 ± 2 °C 'ਤੇ ਇਨਕਿਊਬੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਫਿਰ ਫੰਗਲ ਮਾਈਸੀਲੀਅਮ ਇਕੱਠਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ, ਪਨੀਰ ਦੇ ਕੱਪੜੇ ਰਾਹੀਂ ਫਿਲਟਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ, ਦੋ ਵਾਰ ਨਿਰਜੀਵ ਪਾਣੀ ਨਾਲ ਧੋਤਾ ਗਿਆ, ਅਤੇ ਨਿਰਜੀਵ ਫਿਲਟਰ ਪੇਪਰ ਨਾਲ ਸੁਕਾਇਆ ਗਿਆ। ਜੀਨੋਮਿਕ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਕੁਇੱਕ-ਡੀਐਨਏ™ ਫੰਗਲ/ਬੈਕਟੀਰੀਅਲ ਮਿਨੀਪ੍ਰੈਪ ਕਿੱਟ (ਕੁਰਾਮੇ-ਇਜ਼ੀਓਕਾ, 1997; ਅਟਾੱਲਾ ਐਟ ਅਲ., 2022, 2024) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਅਲੱਗ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਫਿਰ ITS rDNA ਖੇਤਰ ਨੂੰ ਖਾਸ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਜੋੜਾ ITS1/ITS4 (TCCGTAGGTGAACCTGCGG TCCTCCGCTTATTGATATGC; ਅਨੁਮਾਨਿਤ ਆਕਾਰ: 540 bp) (ਬੈਟੂਰੋ-ਸਿਸਨੀਵਸਕਾ ਐਟ ਅਲ., 2017) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਵਧਾਇਆ ਗਿਆ। ਸ਼ੁੱਧ ਕੀਤੇ PCR ਉਤਪਾਦਾਂ ਨੂੰ ਸੀਕਵੈਂਸਿੰਗ ਲਈ ਜਮ੍ਹਾਂ ਕਰਵਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ (ਬੀਜਿੰਗ ਅਓਕੇ ਡਿੰਗਸ਼ੇਂਗ ਬਾਇਓਟੈਕਨਾਲੋਜੀ ਕੰਪਨੀ, ਲਿਮਟਿਡ)। ITS rDNA ਕ੍ਰਮਾਂ ਨੂੰ ਸੈਂਗਰ ਸੀਕਵੈਂਸਿੰਗ ਵਿਧੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਦੋ-ਦਿਸ਼ਾਵਾਂ ਵਿੱਚ ਸੀਕਵੈਂਸ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਫਿਰ ਇਕੱਠੇ ਕੀਤੇ ਪੁੱਛਗਿੱਛ ਕ੍ਰਮਾਂ ਦੀ ਤੁਲਨਾ BLASTn ਸੌਫਟਵੇਅਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ GenBank ਅਤੇ ਨੈਸ਼ਨਲ ਸੈਂਟਰ ਫਾਰ ਬਾਇਓਟੈਕਨਾਲੋਜੀ ਇਨਫਰਮੇਸ਼ਨ (NCBI, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/) ਵਿੱਚ ਨਵੀਨਤਮ ਡੇਟਾ ਨਾਲ ਕੀਤੀ ਗਈ। ਪੁੱਛਗਿੱਛ ਕ੍ਰਮ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਅਣੂ ਵਿਕਾਸਵਾਦੀ ਜੈਨੇਟਿਕਸ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਪੈਕੇਜ (MEGA-11; ਸੰਸਕਰਣ 11) (ਕੁਮਾਰ ਐਟ ਅਲ., 2024) ਵਿੱਚ ClustalW ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ NCBI GenBank (ਪੂਰਕ ਸਾਰਣੀ S1) ਵਿੱਚ ਨਵੀਨਤਮ ਡੇਟਾ ਤੋਂ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਗਏ 20 ਹੋਰ S. sclerotiorum strains/isolates ਨਾਲ ਕੀਤੀ ਗਈ। ਵਿਕਾਸਵਾਦੀ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਵੱਧ ਤੋਂ ਵੱਧ ਸੰਭਾਵਨਾ ਵਿਧੀ ਅਤੇ ਆਮ ਸਮਾਂ-ਉਲਟਣਯੋਗ ਨਿਊਕਲੀਓਟਾਈਡ ਬਦਲ ਮਾਡਲ (ਨੀ ਅਤੇ ਕੁਮਾਰ, 2000) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਲੌਗ-ਸੰਭਾਵਨਾ ਵਾਲਾ ਰੁੱਖ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ। ਹਿਉਰਿਸਟਿਕ ਖੋਜ ਲਈ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਰੁੱਖ ਗੁਆਂਢੀ-ਜੋੜਨ ਵਾਲੇ (NJ) ਰੁੱਖ (ਕੁਮਾਰ ਐਟ ਅਲ., 2024) ਅਤੇ ਵੱਧ ਤੋਂ ਵੱਧ ਪਾਰਸੀਮੋਨੀ (MP) ਰੁੱਖ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਉੱਚ ਲੌਗ-ਸੰਭਾਵਨਾ ਵਾਲੇ ਰੁੱਖ ਦੀ ਚੋਣ ਕਰਕੇ ਚੁਣਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। NJ ਰੁੱਖ ਨੂੰ ਆਮ ਸਮਾਂ-ਉਲਟਣਯੋਗ ਮਾਡਲ (ਨੀ ਅਤੇ ਕੁਮਾਰ, 2000) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਗਣਨਾ ਕੀਤੇ ਗਏ ਇੱਕ ਜੋੜਾ-ਵਾਰ ਦੂਰੀ ਮੈਟ੍ਰਿਕਸ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਬਣਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ।
ਐਲ-ਓਰਨੀਥਾਈਨ ਅਤੇ ਬੈਕਟੀਰੀਆਨਾਸ਼ਕ "ਰਾਈਜ਼ੋਲੈਕਸ-ਟੀ" ਦੀ ਐਂਟੀਬੈਕਟੀਰੀਅਲ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਅਗਰ ਫੈਲਾਅ ਵਿਧੀ ਦੁਆਰਾ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਵਿੱਚ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਵਿਧੀ: ਐਲ-ਓਰਨੀਥਾਈਨ (500 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਲੀਟਰ) ਦੇ ਸਟਾਕ ਘੋਲ ਦੀ ਢੁਕਵੀਂ ਮਾਤਰਾ ਲਓ ਅਤੇ ਇਸਨੂੰ 10 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਪੀਡੀਏ ਪੌਸ਼ਟਿਕ ਮਾਧਿਅਮ ਨਾਲ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਓ ਤਾਂ ਜੋ ਕ੍ਰਮਵਾਰ 12.5, 25, 50, 75, 100 ਅਤੇ 125 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਲੀਟਰ ਦੀ ਅੰਤਿਮ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਵਾਲਾ ਘੋਲ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕੇ। ਫੰਗਸਾਈਡ "ਰਾਈਜ਼ੋਲੈਕਸ-ਟੀ" (2, 4, 6, 8 ਅਤੇ 10 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਲੀਟਰ) ਦੀਆਂ ਪੰਜ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣਾਂ ਅਤੇ ਨਿਰਜੀਵ ਡਿਸਟਿਲਡ ਪਾਣੀ ਨੂੰ ਨਿਯੰਤਰਣ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਮਾਧਿਅਮ ਦੇ ਠੋਸ ਹੋਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਸਕਲੇਰੋਟੀਨੀਆ ਸਕਲੇਰੋਟੀਓਰਮ ਕਲਚਰ ਦੇ ਇੱਕ ਤਾਜ਼ੇ ਤਿਆਰ ਮਾਈਸੀਲੀਅਲ ਪਲੱਗ, 4 ਮਿਲੀਮੀਟਰ ਵਿਆਸ, ਨੂੰ ਪੈਟਰੀ ਡਿਸ਼ ਦੇ ਕੇਂਦਰ ਵਿੱਚ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ 25±2°C 'ਤੇ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਜਦੋਂ ਤੱਕ ਮਾਈਸੀਲੀਅਮ ਪੂਰੇ ਕੰਟਰੋਲ ਪੈਟਰੀ ਡਿਸ਼ ਨੂੰ ਢੱਕ ਨਹੀਂ ਲੈਂਦਾ, ਜਿਸ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਫੰਗਲ ਵਿਕਾਸ ਦਰਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। ਸਮੀਕਰਨ 1 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਐਸ. ਸਕਲੇਰੋਟੀਓਰਮ ਦੇ ਰੇਡੀਅਲ ਵਾਧੇ ਦੇ ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤ ਰੋਕ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ:
ਪ੍ਰਯੋਗ ਨੂੰ ਦੋ ਵਾਰ ਦੁਹਰਾਇਆ ਗਿਆ, ਹਰੇਕ ਨਿਯੰਤਰਣ/ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਸਮੂਹ ਲਈ ਛੇ ਜੈਵਿਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀਆਂ ਅਤੇ ਹਰੇਕ ਜੈਵਿਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਲਈ ਪੰਜ ਗਮਲੇ (ਪ੍ਰਤੀ ਘੜਾ ਦੋ ਪੌਦੇ) ਸਨ। ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਨਤੀਜਿਆਂ ਦੀ ਸ਼ੁੱਧਤਾ, ਭਰੋਸੇਯੋਗਤਾ ਅਤੇ ਪ੍ਰਜਨਨਯੋਗਤਾ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਹਰੇਕ ਜੈਵਿਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਦਾ ਦੋ ਵਾਰ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ (ਦੋ ਤਕਨੀਕੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀਆਂ)। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਪ੍ਰੋਬਿਟ ਰਿਗਰੈਸ਼ਨ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਅੱਧ-ਵੱਧ ਤੋਂ ਵੱਧ ਇਨਿਹਿਬਿਟਰੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ (IC50) ਅਤੇ IC99 (ਪ੍ਰੈਂਟਿਸ, 1976) ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।
ਗ੍ਰੀਨਹਾਊਸ ਹਾਲਤਾਂ ਵਿੱਚ ਐਲ-ਓਰਨੀਥਾਈਨ ਦੀ ਸੰਭਾਵਨਾ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨ ਲਈ, ਲਗਾਤਾਰ ਦੋ ਗਮਲਿਆਂ ਦੇ ਪ੍ਰਯੋਗ ਕੀਤੇ ਗਏ। ਸੰਖੇਪ ਵਿੱਚ, ਗਮਲਿਆਂ ਨੂੰ ਨਿਰਜੀਵ ਮਿੱਟੀ-ਰੇਤ ਵਾਲੀ ਮਿੱਟੀ (3:1) ਨਾਲ ਭਰਿਆ ਗਿਆ ਅਤੇ S. sclerotiorum ਦੇ ਤਾਜ਼ੇ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਕਲਚਰ ਨਾਲ ਟੀਕਾ ਲਗਾਇਆ ਗਿਆ। ਪਹਿਲਾਂ, S. sclerotiorum (ਆਈਸੋਲੇਟ #3) ਦੇ ਸਭ ਤੋਂ ਹਮਲਾਵਰ ਆਈਸੋਲੇਟ ਨੂੰ ਇੱਕ ਸਕਲੇਰੋਟੀਅਮ ਨੂੰ ਅੱਧੇ ਵਿੱਚ ਕੱਟ ਕੇ, ਇਸਨੂੰ PDA 'ਤੇ ਮੂੰਹ ਹੇਠਾਂ ਰੱਖ ਕੇ ਅਤੇ ਮਾਈਸੀਲੀਅਲ ਵਿਕਾਸ ਨੂੰ ਉਤੇਜਿਤ ਕਰਨ ਲਈ 25°C 'ਤੇ ਨਿਰੰਤਰ ਹਨੇਰੇ (24 ਘੰਟੇ) ਵਿੱਚ 4 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਇਨਕਿਊਬੇਟ ਕਰਕੇ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। ਫਿਰ ਚਾਰ 5 ਮਿਲੀਮੀਟਰ ਵਿਆਸ ਵਾਲੇ ਅਗਰ ਪਲੱਗਾਂ ਨੂੰ ਮੋਹਰੀ ਕਿਨਾਰੇ ਤੋਂ ਲਿਆ ਗਿਆ ਅਤੇ ਕਣਕ ਅਤੇ ਚੌਲਾਂ ਦੇ ਛਾਲੇ (1:1, v/v) ਦੇ 100 ਗ੍ਰਾਮ ਨਿਰਜੀਵ ਮਿਸ਼ਰਣ ਨਾਲ ਟੀਕਾ ਲਗਾਇਆ ਗਿਆ ਅਤੇ ਸਾਰੇ ਫਲਾਸਕਾਂ ਨੂੰ ਸਕਲੇਰੋਟੀਆ ਗਠਨ ਨੂੰ ਉਤੇਜਿਤ ਕਰਨ ਲਈ 25 ± 2 °C 'ਤੇ 5 ਦਿਨਾਂ ਲਈ 12 ਘੰਟੇ ਦੀ ਰੌਸ਼ਨੀ/12 ਘੰਟੇ ਦੇ ਹਨੇਰੇ ਚੱਕਰ ਦੇ ਅਧੀਨ ਇਨਕਿਊਬੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। ਮਿੱਟੀ ਜੋੜਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਇਕਸਾਰਤਾ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਸਾਰੇ ਫਲਾਸਕਾਂ ਦੀ ਸਮੱਗਰੀ ਨੂੰ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਇਆ ਗਿਆ। ਫਿਰ, ਰੋਗਾਣੂਆਂ ਦੀ ਨਿਰੰਤਰ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਹਰੇਕ ਘੜੇ ਵਿੱਚ 100 ਗ੍ਰਾਮ ਕੋਲੋਨਾਈਜ਼ਿੰਗ ਬਰੈਨ ਮਿਸ਼ਰਣ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ। ਟੀਕਾ ਲਗਾਏ ਗਏ ਗਮਲਿਆਂ ਨੂੰ ਫੰਗਲ ਵਾਧੇ ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰਨ ਲਈ ਪਾਣੀ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ 7 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਗ੍ਰੀਨਹਾਊਸ ਸਥਿਤੀਆਂ ਵਿੱਚ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ।
ਫਿਰ ਹਰੇਕ ਗਮਲੇ ਵਿੱਚ ਗੀਜ਼ਾ 3 ਕਿਸਮ ਦੇ ਪੰਜ ਬੀਜ ਬੀਜੇ ਗਏ। L-ornithine ਅਤੇ ਉੱਲੀਨਾਸ਼ਕ Rizolex-T ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਗਏ ਗਮਲਿਆਂ ਲਈ, ਨਿਰਜੀਵ ਬੀਜਾਂ ਨੂੰ ਪਹਿਲਾਂ ਦੋ ਮਿਸ਼ਰਣਾਂ ਦੇ ਜਲਮਈ ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਦੋ ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ ਭਿੱਜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਜਿਸਦੀ ਅੰਤਮ IC99 ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਕ੍ਰਮਵਾਰ ਲਗਭਗ 250 mg/L ਅਤੇ 50 mg/L ਸੀ, ਅਤੇ ਫਿਰ ਬਿਜਾਈ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਇੱਕ ਘੰਟੇ ਲਈ ਹਵਾ ਵਿੱਚ ਸੁੱਕਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਦੂਜੇ ਪਾਸੇ, ਬੀਜਾਂ ਨੂੰ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਵਜੋਂ ਨਿਰਜੀਵ ਡਿਸਟਿਲਡ ਪਾਣੀ ਵਿੱਚ ਭਿੱਜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। 10 ਦਿਨਾਂ ਬਾਅਦ, ਪਹਿਲੇ ਪਾਣੀ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ, ਬੂਟਿਆਂ ਨੂੰ ਪਤਲਾ ਕਰ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਹਰੇਕ ਗਮਲੇ ਵਿੱਚ ਸਿਰਫ ਦੋ ਸਾਫ਼ ਬੂਟੇ ਬਚੇ ਸਨ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, S. sclerotiorum ਨਾਲ ਸੰਕਰਮਣ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ, ਇੱਕੋ ਵਿਕਾਸ ਪੜਾਅ (10 ਦਿਨ) 'ਤੇ ਬੀਨ ਦੇ ਪੌਦੇ ਦੇ ਤਣਿਆਂ ਨੂੰ ਇੱਕ ਨਿਰਜੀਵ ਸਕੈਲਪਲ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਦੋ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਥਾਵਾਂ 'ਤੇ ਕੱਟਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਲਗਭਗ 0.5 ਗ੍ਰਾਮ ਕੋਲੋਨਾਈਜ਼ਿੰਗ ਬ੍ਰੈਨ ਮਿਸ਼ਰਣ ਹਰੇਕ ਜ਼ਖ਼ਮ ਵਿੱਚ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਜਿਸ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਸਾਰੇ ਟੀਕਾ ਲਗਾਏ ਗਏ ਪੌਦਿਆਂ ਵਿੱਚ ਲਾਗ ਅਤੇ ਬਿਮਾਰੀ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਨੂੰ ਉਤੇਜਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਉੱਚ ਨਮੀ ਦਿੱਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਕੰਟਰੋਲ ਪਲਾਂਟਾਂ ਨੂੰ ਵੀ ਇਸੇ ਤਰ੍ਹਾਂ ਜ਼ਖਮੀ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਜ਼ਖ਼ਮ ਵਿੱਚ ਬਰਾਬਰ ਮਾਤਰਾ (0.5 ਗ੍ਰਾਮ) ਨਿਰਜੀਵ, ਗੈਰ-ਬਸਤੀ ਵਾਲਾ ਛਾਣ ਮਿਸ਼ਰਣ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਬਿਮਾਰੀ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਲਈ ਵਾਤਾਵਰਣ ਦੀ ਨਕਲ ਕਰਨ ਅਤੇ ਇਲਾਜ ਸਮੂਹਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਇਕਸਾਰਤਾ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਉੱਚ ਨਮੀ ਹੇਠ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।
ਇਲਾਜ ਵਿਧੀ: ਬੀਨ ਦੇ ਬੂਟਿਆਂ ਨੂੰ ਮਿੱਟੀ ਦੀ ਸਿੰਚਾਈ ਕਰਕੇ 500 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਐਲ-ਓਰਨੀਥਾਈਨ (250 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਲੀ) ਜਾਂ ਉੱਲੀਨਾਸ਼ਕ ਰਿਜ਼ੋਲੇਕਸ-ਟੀ (50 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਲੀ) ਦੇ ਜਲਮਈ ਘੋਲ ਨਾਲ ਸਿੰਜਿਆ ਗਿਆ, ਫਿਰ ਇਲਾਜ ਨੂੰ 10 ਦਿਨਾਂ ਦੇ ਅੰਤਰਾਲ 'ਤੇ ਤਿੰਨ ਵਾਰ ਦੁਹਰਾਇਆ ਗਿਆ। ਪਲੇਸਬੋ-ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਨਿਯੰਤਰਣਾਂ ਨੂੰ 500 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਨਿਰਜੀਵ ਡਿਸਟਿਲਡ ਪਾਣੀ ਨਾਲ ਸਿੰਜਿਆ ਗਿਆ। ਸਾਰੇ ਇਲਾਜ ਗ੍ਰੀਨਹਾਊਸ ਹਾਲਤਾਂ (25 ± 2°C, 75 ± 1% ਸਾਪੇਖਿਕ ਨਮੀ, ਅਤੇ 8 ਘੰਟੇ ਰੌਸ਼ਨੀ/16 ਘੰਟੇ ਹਨੇਰੇ ਦਾ ਫੋਟੋਪੀਰੀਅਡ) ਅਧੀਨ ਕੀਤੇ ਗਏ। ਸਾਰੇ ਗਮਲਿਆਂ ਨੂੰ ਹਰ ਪੰਦਰਵਾੜੇ ਸਿੰਜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਸੀ ਅਤੇ ਹਰ ਮਹੀਨੇ ਸੰਤੁਲਿਤ NPK ਖਾਦ (20-20-20, 3.6% ਗੰਧਕ ਅਤੇ TE ਸੂਖਮ ਤੱਤਾਂ ਦੇ ਨਾਲ; ਜ਼ੈਨ ਸੀਡਜ਼, ਮਿਸਰ) ਨਾਲ 3-4 ਗ੍ਰਾਮ/ਲੀ ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 'ਤੇ ਪੱਤਿਆਂ ਦੇ ਛਿੜਕਾਅ ਦੁਆਰਾ ਖਾਸ ਕਿਸਮ ਅਤੇ ਨਿਰਮਾਤਾ ਦੀਆਂ ਹਦਾਇਤਾਂ ਅਨੁਸਾਰ ਇਲਾਜ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਸੀ। ਜਦੋਂ ਤੱਕ ਹੋਰ ਨਹੀਂ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ, ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਫੈਲੇ ਹੋਏ ਪਰਿਪੱਕ ਪੱਤੇ (ਉੱਪਰ ਤੋਂ ਦੂਜੇ ਅਤੇ ਤੀਜੇ ਪੱਤੇ) ਹਰੇਕ ਜੈਵਿਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਤੋਂ 72 ਘੰਟਿਆਂ ਬਾਅਦ ਇਲਾਜ (hpt) 'ਤੇ ਇਕੱਠੇ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ, ਸਮਰੂਪ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ, ਇਕੱਠੇ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ ਅਤੇ -80 °C 'ਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਆਕਸੀਡੇਟਿਵ ਤਣਾਅ ਸੂਚਕਾਂ ਦੇ ਇਨ ਸੀਟੂ ਹਿਸਟੋਕੈਮੀਕਲ ਸਥਾਨੀਕਰਨ, ਲਿਪਿਡ ਪੇਰੋਕਸੀਡੇਸ਼ਨ, ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਅਤੇ ਗੈਰ-ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਐਂਟੀਆਕਸੀਡੈਂਟ ਅਤੇ ਜੀਨ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ, ਪਰ ਇਹਨਾਂ ਤੱਕ ਸੀਮਿਤ ਨਹੀਂ ਹਨ।
ਟੈਰਨ ਐਟ ਅਲ (2006) ਦੁਆਰਾ ਸੋਧੇ ਗਏ ਪੇਟਜ਼ੋਲਟ ਅਤੇ ਡਿਕਸਨ ਸਕੇਲ (1996) ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ 1-9 (ਪੂਰਕ ਸਾਰਣੀ S2) ਦੇ ਪੈਮਾਨੇ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਹਫਤਾਵਾਰੀ 21 ਦਿਨਾਂ ਬਾਅਦ ਟੀਕਾਕਰਨ (dpi) ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। ਸੰਖੇਪ ਵਿੱਚ, ਬੀਨ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਤਣਿਆਂ ਅਤੇ ਸ਼ਾਖਾਵਾਂ ਦੀ ਜਾਂਚ ਇੰਟਰਨੋਡਾਂ ਅਤੇ ਨੋਡਾਂ ਦੇ ਨਾਲ ਜਖਮਾਂ ਦੀ ਪ੍ਰਗਤੀ ਦੀ ਪਾਲਣਾ ਕਰਨ ਲਈ ਟੀਕਾਕਰਨ ਦੇ ਬਿੰਦੂ ਤੋਂ ਸ਼ੁਰੂ ਕਰਕੇ ਕੀਤੀ ਗਈ। ਫਿਰ ਟੀਕਾਕਰਨ ਦੇ ਬਿੰਦੂ ਤੋਂ ਤਣੇ ਜਾਂ ਸ਼ਾਖਾ ਦੇ ਨਾਲ ਸਭ ਤੋਂ ਦੂਰ ਬਿੰਦੂ ਤੱਕ ਜਖਮ ਦੀ ਦੂਰੀ ਮਾਪੀ ਗਈ ਅਤੇ ਜਖਮ ਦੇ ਸਥਾਨ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ 1-9 ਦਾ ਸਕੋਰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ, ਜਿੱਥੇ (1) ਟੀਕਾਕਰਨ ਦੇ ਬਿੰਦੂ ਦੇ ਨੇੜੇ ਕੋਈ ਦਿਖਾਈ ਦੇਣ ਵਾਲੀ ਲਾਗ ਨਹੀਂ ਦਰਸਾਈ ਗਈ ਅਤੇ (2-9) ਨੇ ਨੋਡਾਂ/ਇੰਟਰਨਡੋਡਾਂ ਦੇ ਨਾਲ ਜਖਮ ਦੇ ਆਕਾਰ ਅਤੇ ਪ੍ਰਗਤੀ ਵਿੱਚ ਹੌਲੀ-ਹੌਲੀ ਵਾਧਾ ਦਰਸਾਇਆ (ਪੂਰਕ ਸਾਰਣੀ S2)। ਫਿਰ ਫਾਰਮੂਲਾ 2 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਚਿੱਟੇ ਉੱਲੀ ਦੀ ਲਾਗ ਦੀ ਤੀਬਰਤਾ ਨੂੰ ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤ ਵਿੱਚ ਬਦਲਿਆ ਗਿਆ:
ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਬਿਮਾਰੀ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਵਕਰ (AUDPC) ਦੇ ਅਧੀਨ ਖੇਤਰ ਦੀ ਗਣਨਾ ਫਾਰਮੂਲੇ (ਸ਼ੈਨਰ ਅਤੇ ਫਿੰਨੀ, 1977) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ, ਜਿਸ ਨੂੰ ਹਾਲ ਹੀ ਵਿੱਚ ਸਮੀਕਰਨ 3 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਆਮ ਬੀਨ ਦੇ ਚਿੱਟੇ ਸੜਨ (ਚੌਹਾਨ ਅਤੇ ਹੋਰ, 2020) ਲਈ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ:
ਜਿੱਥੇ Yi = ਬਿਮਾਰੀ ਦੀ ਤੀਬਰਤਾ ਸਮੇਂ ti 'ਤੇ, Yi+1 = ਅਗਲੀ ਵਾਰ ਬਿਮਾਰੀ ਦੀ ਤੀਬਰਤਾ ti+1, ti = ਪਹਿਲੇ ਮਾਪ ਦਾ ਸਮਾਂ (ਦਿਨਾਂ ਵਿੱਚ), ti+1 = ਅਗਲੇ ਮਾਪ ਦਾ ਸਮਾਂ (ਦਿਨਾਂ ਵਿੱਚ), n = ਸਮਾਂ ਬਿੰਦੂਆਂ ਜਾਂ ਨਿਰੀਖਣ ਬਿੰਦੂਆਂ ਦੀ ਕੁੱਲ ਗਿਣਤੀ। ਬੀਨ ਦੇ ਪੌਦੇ ਦੇ ਵਾਧੇ ਦੇ ਮਾਪਦੰਡ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਪੌਦੇ ਦੀ ਉਚਾਈ (ਸੈ.ਮੀ.), ਪ੍ਰਤੀ ਪੌਦਾ ਸ਼ਾਖਾਵਾਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ, ਅਤੇ ਪ੍ਰਤੀ ਪੌਦਾ ਪੱਤਿਆਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ, ਸਾਰੇ ਜੈਵਿਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀਆਂ ਵਿੱਚ 21 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਹਫ਼ਤਾਵਾਰੀ ਰਿਕਾਰਡ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।
ਹਰੇਕ ਜੈਵਿਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਵਿੱਚ, ਪੱਤਿਆਂ ਦੇ ਨਮੂਨੇ (ਉੱਪਰ ਤੋਂ ਦੂਜੇ ਅਤੇ ਤੀਜੇ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਵਿਕਸਤ ਪੱਤੇ) ਇਲਾਜ ਤੋਂ 45ਵੇਂ ਦਿਨ (ਆਖਰੀ ਇਲਾਜ ਤੋਂ 15 ਦਿਨ ਬਾਅਦ) ਇਕੱਠੇ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ। ਹਰੇਕ ਜੈਵਿਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਵਿੱਚ ਪੰਜ ਗਮਲੇ (ਪ੍ਰਤੀ ਘੜਾ ਦੋ ਪੌਦੇ) ਸ਼ਾਮਲ ਸਨ। ਲਗਭਗ 500 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ ਕੁਚਲੇ ਹੋਏ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਪ੍ਰਕਾਸ਼-ਸੰਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਰੰਗਾਂ (ਕਲੋਰੋਫਿਲ ਏ, ਕਲੋਰੋਫਿਲ ਬੀ ਅਤੇ ਕੈਰੋਟੀਨੋਇਡ) ਨੂੰ ਕੱਢਣ ਲਈ 80% ਐਸੀਟੋਨ ਦੀ ਵਰਤੋਂ 4 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ 'ਤੇ ਹਨੇਰੇ ਵਿੱਚ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। 24 ਘੰਟਿਆਂ ਬਾਅਦ, ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਨੂੰ ਕਲੋਰੋਫਿਲ ਏ, ਕਲੋਰੋਫਿਲ ਬੀ ਅਤੇ ਕੈਰੋਟੀਨੋਇਡ ਸਮੱਗਰੀ ਦੇ ਨਿਰਧਾਰਨ ਲਈ ਇੱਕ UV-160A ਸਪੈਕਟਰੋਫੋਟੋਮੀਟਰ (ਸ਼ਿਮਾਡਜ਼ੂ ਕਾਰਪੋਰੇਸ਼ਨ, ਜਾਪਾਨ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ (ਲਿਚਟੈਂਥਲਰ, 1987) ਵਿਧੀ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਤਿੰਨ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਤਰੰਗ-ਲੰਬਾਈ (A470, A646 ਅਤੇ A663 nm) 'ਤੇ ਸੋਖਣ ਨੂੰ ਮਾਪ ਕੇ ਇਕੱਠਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਅੰਤ ਵਿੱਚ, ਪ੍ਰਕਾਸ਼-ਸੰਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਰੰਗਾਂ ਦੀ ਸਮੱਗਰੀ ਦੀ ਗਣਨਾ ਲਿਚਟੈਂਥਲਰ (1987) ਦੁਆਰਾ ਵਰਣਿਤ ਹੇਠ ਦਿੱਤੇ ਫਾਰਮੂਲੇ 4-6 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।
72 ਘੰਟਿਆਂ ਬਾਅਦ ਇਲਾਜ (hpt) 'ਤੇ, ਹਾਈਡ੍ਰੋਜਨ ਪਰਆਕਸਾਈਡ (H2O2) ਅਤੇ ਸੁਪਰਆਕਸਾਈਡ ਐਨੀਅਨ (O2•−) ਦੇ ਇਨ ਸੀਟੂ ਹਿਸਟੋਕੈਮੀਕਲ ਸਥਾਨੀਕਰਨ ਲਈ ਹਰੇਕ ਜੈਵਿਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਤੋਂ ਪੱਤੇ (ਉੱਪਰ ਤੋਂ ਦੂਜੇ ਅਤੇ ਤੀਜੇ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਵਿਕਸਤ ਪੱਤੇ) ਇਕੱਠੇ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ। ਹਰੇਕ ਜੈਵਿਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਵਿੱਚ ਪੰਜ ਗਮਲੇ (ਪ੍ਰਤੀ ਘੜੇ ਦੋ ਪੌਦੇ) ਸ਼ਾਮਲ ਸਨ। ਵਿਧੀ ਦੀ ਸ਼ੁੱਧਤਾ, ਭਰੋਸੇਯੋਗਤਾ ਅਤੇ ਪ੍ਰਜਨਨਯੋਗਤਾ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਹਰੇਕ ਜੈਵਿਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਦਾ ਡੁਪਲੀਕੇਟ (ਦੋ ਤਕਨੀਕੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀਆਂ) ਵਿੱਚ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। H2O2 ਅਤੇ O2•− ਨੂੰ ਕ੍ਰਮਵਾਰ 0.1% 3,3′-ਡਾਇਮਿਨੋਬੈਂਜ਼ੀਡਾਈਨ (DAB; ਸਿਗਮਾ-ਐਲਡਰਿਕ, ਡਾਰਮਸਟੈਡ, ਜਰਮਨੀ) ਜਾਂ ਨਾਈਟ੍ਰੋਬਲੂ ਟੈਟਰਾਜ਼ੋਲੀਅਮ (NBT; ਸਿਗਮਾ-ਐਲਡਰਿਕ, ਡਾਰਮਸਟੈਡ, ਜਰਮਨੀ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਰੋਮੇਰੋ-ਪੋਰਟਸ ਐਟ ਅਲ (2004) ਅਤੇ ਐਡਮ ਐਟ ਅਲ (1989) ਦੁਆਰਾ ਦੱਸੇ ਗਏ ਤਰੀਕਿਆਂ ਦੀ ਪਾਲਣਾ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, ਮਾਮੂਲੀ ਸੋਧਾਂ ਨਾਲ। H2O2 ਦੇ ਹਿਸਟੋਕੈਮੀਕਲ ਸਥਾਨੀਕਰਨ ਲਈ, ਲੀਫਲੈਟਾਂ ਨੂੰ 10 mM ਟ੍ਰਿਸ ਬਫਰ (pH 7.8) ਵਿੱਚ 0.1% DAB ਨਾਲ ਵੈਕਿਊਮ ਵਿੱਚ ਘੁਸਪੈਠ ਕੀਤੀ ਗਈ ਅਤੇ ਫਿਰ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 60 ਮਿੰਟ ਲਈ ਰੋਸ਼ਨੀ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। ਲੀਫਲੈਟਾਂ ਨੂੰ 0.15% (v/v) TCA ਵਿੱਚ 4:1 (v/v) ਈਥਾਨੌਲ:ਕਲੋਰੋਫਾਰਮ (ਅਲ-ਗੋਮਹੋਰੀਆ ਫਾਰਮਾਸਿਊਟੀਕਲਜ਼ ਐਂਡ ਮੈਡੀਕਲ ਸਪਲਾਈਜ਼, ਕਾਇਰੋ, ਮਿਸਰ) ਵਿੱਚ ਬਲੀਚ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ ਫਿਰ ਹਨੇਰਾ ਹੋਣ ਤੱਕ ਰੌਸ਼ਨੀ ਦੇ ਸੰਪਰਕ ਵਿੱਚ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ। ਇਸੇ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਵਾਲਵ ਨੂੰ 10 mM ਪੋਟਾਸ਼ੀਅਮ ਫਾਸਫੇਟ ਬਫਰ (pH 7.8) ਨਾਲ ਵੈਕਿਊਮ ਵਿੱਚ ਘੁਸਪੈਠ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਜਿਸ ਵਿੱਚ 0.1 w/v % HBT ਸੀਟੂ ਵਿੱਚ O2•− ਦੇ ਹਿਸਟੋਕੈਮੀਕਲ ਸਥਾਨੀਕਰਨ ਲਈ ਸੀਟੂ ਵਿੱਚ। ਲੀਫਲੈਟਾਂ ਨੂੰ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 20 ਮਿੰਟ ਲਈ ਰੋਸ਼ਨੀ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ, ਫਿਰ ਉੱਪਰ ਦਿੱਤੇ ਅਨੁਸਾਰ ਬਲੀਚ ਕੀਤਾ ਗਿਆ, ਅਤੇ ਫਿਰ ਗੂੜ੍ਹੇ ਨੀਲੇ/ਵਾਇਲੇਟ ਧੱਬੇ ਦਿਖਾਈ ਦੇਣ ਤੱਕ ਪ੍ਰਕਾਸ਼ਮਾਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਭੂਰੇ (H2O2 ਸੂਚਕ ਵਜੋਂ) ਜਾਂ ਨੀਲੇ-ਜਾਮਨੀ (O2•− ਸੂਚਕ ਵਜੋਂ) ਰੰਗ ਦੀ ਤੀਬਰਤਾ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਚਿੱਤਰ ਪ੍ਰੋਸੈਸਿੰਗ ਪੈਕੇਜ ImageJ (http://fiji.sc; ਐਕਸੈਸ 7 ਮਾਰਚ 2024) ਦੇ ਫਿਜੀ ਸੰਸਕਰਣ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਮੈਲੋਂਡਿਆਲਡੀਹਾਈਡ (ਐਮਡੀਏ; ਲਿਪਿਡ ਪੇਰੋਕਸੀਡੇਸ਼ਨ ਦੇ ਮਾਰਕਰ ਵਜੋਂ) ਨੂੰ ਡੂ ਅਤੇ ਬ੍ਰਾਮਲੇਜ (1992) ਦੇ ਢੰਗ ਅਨੁਸਾਰ ਥੋੜ੍ਹੀਆਂ ਸੋਧਾਂ ਨਾਲ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਹਰੇਕ ਜੈਵਿਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ (ਉੱਪਰ ਤੋਂ ਦੂਜੀ ਅਤੇ ਤੀਜੀ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਵਿਕਸਤ ਪੱਤੀ) ਤੋਂ ਪੱਤੇ ਇਲਾਜ ਤੋਂ ਬਾਅਦ 72 ਘੰਟੇ (hpt) ਇਕੱਠੇ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ। ਹਰੇਕ ਜੈਵਿਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਵਿੱਚ ਪੰਜ ਗਮਲੇ (ਪ੍ਰਤੀ ਗਮਲੇ ਦੋ ਪੌਦੇ) ਸ਼ਾਮਲ ਸਨ। ਵਿਧੀ ਦੀ ਸ਼ੁੱਧਤਾ, ਭਰੋਸੇਯੋਗਤਾ ਅਤੇ ਪ੍ਰਜਨਨਯੋਗਤਾ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਹਰੇਕ ਜੈਵਿਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਦਾ ਡੁਪਲੀਕੇਟ (ਦੋ ਤਕਨੀਕੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀਆਂ) ਵਿੱਚ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਸੰਖੇਪ ਵਿੱਚ, 20% ਟ੍ਰਾਈਕਲੋਰੋਐਸੇਟਿਕ ਐਸਿਡ (ਟੀਸੀਏ; ਮਿਲੀਪੋਰਸਿਗਮਾ, ਬਰਲਿੰਗਟਨ, ਐਮਏ, ਯੂਐਸਏ) ਦੇ ਨਾਲ ਐਮਡੀਏ ਕੱਢਣ ਲਈ 0.5 ਗ੍ਰਾਮ ਜ਼ਮੀਨੀ ਪੱਤਾ ਟਿਸ਼ੂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ ਜਿਸ ਵਿੱਚ 0.01% ਬਿਊਟਾਇਲੇਟਿਡ ਹਾਈਡ੍ਰੋਕਸਾਈਟੋਲੂਇਨ (BHT; ਸਿਗਮਾ-ਐਲਡਰਿਕ, ਸੇਂਟ ਲੂਈਸ, ਐਮਓ, ਯੂਐਸਏ) ਸੀ। ਫਿਰ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਵਿੱਚ MDA ਸਮੱਗਰੀ ਨੂੰ UV-160A ਸਪੈਕਟਰੋਫੋਟੋਮੀਟਰ (ਸ਼ਿਮਾਡਜ਼ੂ ਕਾਰਪੋਰੇਸ਼ਨ, ਜਾਪਾਨ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ 532 ਅਤੇ 600 nm 'ਤੇ ਸੋਖਣ ਨੂੰ ਮਾਪ ਕੇ ਰੰਗ-ਮਿਤੀ ਅਨੁਸਾਰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ ਫਿਰ nmol g−1 FW ਵਜੋਂ ਦਰਸਾਇਆ ਗਿਆ।
ਗੈਰ-ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਅਤੇ ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਐਂਟੀਆਕਸੀਡੈਂਟਸ ਦੇ ਮੁਲਾਂਕਣ ਲਈ, ਹਰੇਕ ਜੈਵਿਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਤੋਂ ਪੱਤੇ (ਉੱਪਰ ਤੋਂ ਦੂਜੇ ਅਤੇ ਤੀਜੇ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਵਿਕਸਤ ਪੱਤੇ) 72 ਘੰਟਿਆਂ ਬਾਅਦ ਇਲਾਜ (hpt) 'ਤੇ ਇਕੱਠੇ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ। ਹਰੇਕ ਜੈਵਿਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀ ਵਿੱਚ ਪੰਜ ਗਮਲੇ (ਪ੍ਰਤੀ ਘੜਾ ਦੋ ਪੌਦੇ) ਸ਼ਾਮਲ ਸਨ। ਹਰੇਕ ਜੈਵਿਕ ਨਮੂਨੇ ਦਾ ਡੁਪਲੀਕੇਟ (ਦੋ ਤਕਨੀਕੀ ਨਮੂਨੇ) ਵਿੱਚ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਦੋ ਪੱਤਿਆਂ ਨੂੰ ਤਰਲ ਨਾਈਟ੍ਰੋਜਨ ਨਾਲ ਪੀਸਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਸਿੱਧੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਅਤੇ ਗੈਰ-ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਐਂਟੀਆਕਸੀਡੈਂਟਸ, ਕੁੱਲ ਅਮੀਨੋ ਐਸਿਡ, ਪ੍ਰੋਲਾਈਨ ਸਮੱਗਰੀ, ਜੀਨ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਅਤੇ ਆਕਸਲੇਟ ਮਾਤਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।
ਕਾਹਕੋਨੇਨ ਐਟ ਅਲ (1999) ਦੁਆਰਾ ਦੱਸੇ ਗਏ ਢੰਗ ਵਿੱਚ ਥੋੜ੍ਹੀਆਂ ਸੋਧਾਂ ਨਾਲ ਫੋਲਿਨ-ਸਿਓਕਾਲਟੇਯੂ ਰੀਐਜੈਂਟ (ਸਿਗਮਾ-ਐਲਡਰਿਕ, ਸੇਂਟ ਲੂਈਸ, MO, USA) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੁੱਲ ਘੁਲਣਸ਼ੀਲ ਫੀਨੋਲਿਕਸ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਇਆ ਗਿਆ। ਸੰਖੇਪ ਵਿੱਚ, ਲਗਭਗ 0.1 ਗ੍ਰਾਮ ਸਮਰੂਪ ਪੱਤਾ ਟਿਸ਼ੂ ਨੂੰ 20 ਮਿਲੀਲੀਟਰ 80% ਮੀਥੇਨੌਲ ਨਾਲ 24 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ ਹਨੇਰੇ ਵਿੱਚ ਕੱਢਿਆ ਗਿਆ ਅਤੇ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਇਕੱਠਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। ਨਮੂਨੇ ਦੇ ਐਬਸਟਰੈਕਟ ਦੇ 0.1 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਨੂੰ 0.5 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਫੋਲਿਨ-ਸਿਓਕਾਲਟੇਯੂ ਰੀਐਜੈਂਟ (10%) ਨਾਲ ਮਿਲਾਇਆ ਗਿਆ, 30 ਸਕਿੰਟਾਂ ਲਈ ਹਿਲਾਇਆ ਗਿਆ ਅਤੇ 5 ਮਿੰਟ ਲਈ ਹਨੇਰੇ ਵਿੱਚ ਛੱਡ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ। ਫਿਰ 0.5 ਮਿਲੀਲੀਟਰ 20% ਸੋਡੀਅਮ ਕਾਰਬੋਨੇਟ ਘੋਲ (Na2CO3; ਅਲ-ਗੋਮਹੋਰੀਆ ਫਾਰਮਾਸਿਊਟੀਕਲਜ਼ ਐਂਡ ਮੈਡੀਕਲ ਸਪਲਾਈਜ਼ ਕੰਪਨੀ, ਕਾਇਰੋ, ਮਿਸਰ) ਹਰੇਕ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ, ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਇਆ ਗਿਆ ਅਤੇ 1 ਘੰਟੇ ਲਈ ਹਨੇਰੇ ਵਿੱਚ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਇਨਕਿਊਬੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। ਇਨਕਿਊਬੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਮਿਸ਼ਰਣ ਦੀ ਸੋਖਣ ਸ਼ਕਤੀ ਨੂੰ UV-160A ਸਪੈਕਟਰੋਫੋਟੋਮੀਟਰ (ਸ਼ਿਮਾਡਜ਼ੂ ਕਾਰਪੋਰੇਸ਼ਨ, ਜਾਪਾਨ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ 765 nm 'ਤੇ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ। ਨਮੂਨੇ ਦੇ ਐਬਸਟਰੈਕਟਾਂ ਵਿੱਚ ਕੁੱਲ ਘੁਲਣਸ਼ੀਲ ਫਿਨੋਲ ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਇੱਕ ਗੈਲਿਕ ਐਸਿਡ ਕੈਲੀਬ੍ਰੇਸ਼ਨ ਕਰਵ (ਫਿਸ਼ਰ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ, ਹੈਂਪਟਨ, NH, USA) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਪ੍ਰਤੀ ਗ੍ਰਾਮ ਤਾਜ਼ੇ ਭਾਰ (mg GAE g-1 ਤਾਜ਼ੇ ਭਾਰ) ਦੇ ਗੈਲਿਕ ਐਸਿਡ ਦੇ ਬਰਾਬਰ ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਦਰਸਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ।
ਕੁੱਲ ਘੁਲਣਸ਼ੀਲ ਫਲੇਵੋਨੋਇਡ ਸਮੱਗਰੀ ਨੂੰ ਡੀਜੇਰੀਡੇਨ ਐਟ ਅਲ. (2006) ਦੇ ਢੰਗ ਅਨੁਸਾਰ ਥੋੜ੍ਹੀਆਂ ਸੋਧਾਂ ਨਾਲ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਸੰਖੇਪ ਵਿੱਚ, ਉਪਰੋਕਤ ਮੀਥੇਨੌਲ ਐਬਸਟਰੈਕਟ ਦੇ 0.3 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਨੂੰ 0.3 ਮਿਲੀਲੀਟਰ 5% ਐਲੂਮੀਨੀਅਮ ਕਲੋਰਾਈਡ ਘੋਲ (AlCl3; ਫਿਸ਼ਰ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ, ਹੈਂਪਟਨ, NH, USA) ਨਾਲ ਮਿਲਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਜ਼ੋਰਦਾਰ ਢੰਗ ਨਾਲ ਹਿਲਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਫਿਰ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 5 ਮਿੰਟ ਲਈ ਇਨਕਿਊਬੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਇਸ ਤੋਂ ਬਾਅਦ 0.3 ਮਿਲੀਲੀਟਰ 10% ਪੋਟਾਸ਼ੀਅਮ ਐਸੀਟੇਟ ਘੋਲ (ਅਲ-ਗੋਮਹੋਰੀਆ ਫਾਰਮਾਸਿਊਟੀਕਲਜ਼ ਐਂਡ ਮੈਡੀਕਲ ਸਪਲਾਈਜ਼, ਕਾਇਰੋ, ਮਿਸਰ) ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਹਨੇਰੇ ਵਿੱਚ 30 ਮਿੰਟ ਲਈ ਇਨਕਿਊਬੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਇਨਕਿਊਬੇਟੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਮਿਸ਼ਰਣ ਦੀ ਸੋਖਣਸ਼ੀਲਤਾ ਨੂੰ UV-160A ਸਪੈਕਟਰੋਫੋਟੋਮੀਟਰ (ਸ਼ਿਮਾਡਜ਼ੂ ਕਾਰਪੋਰੇਸ਼ਨ, ਜਾਪਾਨ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ 430 nm 'ਤੇ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਨਮੂਨੇ ਦੇ ਐਬਸਟਰੈਕਟ ਵਿੱਚ ਕੁੱਲ ਘੁਲਣਸ਼ੀਲ ਫਲੇਵੋਨੋਇਡਜ਼ ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਨੂੰ ਰੂਟਿਨ ਕੈਲੀਬ੍ਰੇਸ਼ਨ ਕਰਵ (TCI ਅਮਰੀਕਾ, ਪੋਰਟਲੈਂਡ, OR, USA) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਫਿਰ ਪ੍ਰਤੀ ਗ੍ਰਾਮ ਤਾਜ਼ੇ ਭਾਰ (mg RE g-1 ਤਾਜ਼ਾ ਭਾਰ) ਦੇ ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ ਰੁਟਿਨ ਦੇ ਬਰਾਬਰ ਵਜੋਂ ਦਰਸਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ।
ਬੀਨ ਦੇ ਪੱਤਿਆਂ ਦੀ ਕੁੱਲ ਮੁਫ਼ਤ ਅਮੀਨੋ ਐਸਿਡ ਸਮੱਗਰੀ ਨੂੰ ਯੋਕੋਯਾਮਾ ਅਤੇ ਹੀਰਾਮਾਤਸੂ (2003) ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਸਤਾਵਿਤ ਅਤੇ ਸਨ ਐਟ ਅਲ. (2006) ਦੁਆਰਾ ਸੋਧੇ ਗਏ ਢੰਗ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ ਇੱਕ ਸੋਧੇ ਹੋਏ ਨਿਨਹਾਈਡ੍ਰਿਨ ਰੀਐਜੈਂਟ (ਥਰਮੋ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ ਕੈਮੀਕਲਜ਼, ਵਾਲਥਮ, ਐਮਏ, ਯੂਐਸਏ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਸੰਖੇਪ ਵਿੱਚ, 0.1 ਗ੍ਰਾਮ ਜ਼ਮੀਨੀ ਟਿਸ਼ੂ ਨੂੰ pH 5.4 ਬਫਰ ਨਾਲ ਕੱਢਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਦੇ 200 μL ਨੂੰ 200 μL ਨਿਨਹਾਈਡ੍ਰਿਨ (2%) ਅਤੇ 200 μL ਪਾਈਰੀਡੀਨ (10%; ਸਪੈਕਟ੍ਰਮ ਕੈਮੀਕਲ, ਨਿਊ ਬਰੰਸਵਿਕ, ਐਨਜੇ, ਯੂਐਸਏ) ਨਾਲ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ, 30 ਮਿੰਟ ਲਈ ਉਬਲਦੇ ਪਾਣੀ ਦੇ ਇਸ਼ਨਾਨ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਫਿਰ ਠੰਡਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ UV-160A ਸਪੈਕਟਰੋਫੋਟੋਮੀਟਰ (ਸ਼ਿਮਾਡਜ਼ੂ ਕਾਰਪੋਰੇਸ਼ਨ, ਜਾਪਾਨ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ 580 nm 'ਤੇ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਦੂਜੇ ਪਾਸੇ, ਪ੍ਰੋਲਾਈਨ ਨੂੰ ਬੇਟਸ ਵਿਧੀ (ਬੇਟਸ ਐਟ ਅਲ., 1973) ਦੁਆਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਪ੍ਰੋਲਾਈਨ ਨੂੰ 3% ਸਲਫੋਸਾਲਿਸਿਲਿਕ ਐਸਿਡ (ਥਰਮੋ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ ਕੈਮੀਕਲਜ਼, ਵਾਲਥਮ, ਐਮਏ, ਯੂਐਸਏ) ਨਾਲ ਕੱਢਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, 0.5 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਨੂੰ 1 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਗਲੇਸ਼ੀਅਲ ਐਸੀਟਿਕ ਐਸਿਡ (ਫਿਸ਼ਰ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ, ਹੈਂਪਟਨ, ਐਨਐਚ, ਯੂਐਸਏ) ਅਤੇ ਨਿਨਹਾਈਡ੍ਰਿਨ ਰੀਐਜੈਂਟ ਨਾਲ ਮਿਲਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ, 90°C 'ਤੇ 45 ਮਿੰਟ ਲਈ ਇਨਕਿਊਬੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਉੱਪਰ ਦਿੱਤੇ ਗਏ ਸਪੈਕਟਰੋਫੋਟੋਮੀਟਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ 520 nm 'ਤੇ ਠੰਢਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਪੱਤਿਆਂ ਦੇ ਐਬਸਟਰੈਕਟ ਵਿੱਚ ਕੁੱਲ ਮੁਫ਼ਤ ਅਮੀਨੋ ਐਸਿਡ ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਲਾਈਨ ਕ੍ਰਮਵਾਰ ਗਲਾਈਸੀਨ ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਲਾਈਨ ਕੈਲੀਬ੍ਰੇਸ਼ਨ ਕਰਵ (ਸਿਗਮਾ-ਐਲਡਰਿਕ, ਸੇਂਟ ਲੂਈਸ, ਐਮਏ, ਯੂਐਸਏ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ, ਅਤੇ mg/g ਤਾਜ਼ੇ ਭਾਰ ਵਜੋਂ ਦਰਸਾਏ ਗਏ ਸਨ।
ਐਂਟੀਆਕਸੀਡੈਂਟ ਐਨਜ਼ਾਈਮਾਂ ਦੀ ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ, ਲਗਭਗ 500 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ ਸਮਰੂਪ ਟਿਸ਼ੂ ਨੂੰ 3 ਮਿਲੀਲੀਟਰ 50 ਮਿਲੀਮੀਟਰ ਟ੍ਰਿਸ ਬਫਰ (pH 7.8) ਨਾਲ ਕੱਢਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਜਿਸ ਵਿੱਚ 1 ਮਿਲੀਮੀਟਰ EDTA-Na2 (ਸਿਗਮਾ-ਐਲਡਰਿਚ, ਸੇਂਟ ਲੂਈਸ, MO, USA) ਅਤੇ 7.5% ਪੌਲੀਵਿਨਾਇਲਪਾਈਰੋਲੀਡੋਨ (PVP; ਸਿਗਮਾ-ਐਲਡਰਿਚ, ਸੇਂਟ ਲੂਈਸ, MO, USA) ਸੀ, ਰੈਫ੍ਰਿਜਰੇਸ਼ਨ (4 °C) ਦੇ ਅਧੀਨ 20 ਮਿੰਟ ਲਈ 10,000 × g 'ਤੇ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ (ਕੱਚਾ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਐਬਸਟਰੈਕਟ) ਇਕੱਠਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ (ਐਲ-ਨਾਗਰ ਐਟ ਅਲ., 2023; ਓਸਮਾਨ ਐਟ ਅਲ., 2023)। ਫਿਰ ਕੈਟਾਲੇਸ (CAT) ਨੂੰ 0.1 M ਸੋਡੀਅਮ ਫਾਸਫੇਟ ਬਫਰ (pH 6.5; ਸਿਗਮਾ-ਐਲਡਰਿਕ, ਸੇਂਟ ਲੂਈਸ, MO, USA) ਦੇ 2 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਅਤੇ 269 mM H2O2 ਘੋਲ ਦੇ 100 μl ਨਾਲ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਕੀਤੀ ਗਈ ਤਾਂ ਜੋ ਇਸਦੀ ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ Aebi (1984) ਦੇ ਢੰਗ ਅਨੁਸਾਰ ਮਾਮੂਲੀ ਸੋਧਾਂ ਨਾਲ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕੇ (El-Nagar et al., 2023; Osman et al., 2023)। Guaiacol-ਨਿਰਭਰ ਪੇਰੋਕਸੀਡੇਜ਼ (POX) ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ Harrach et al. (2009) ਦੀ ਵਿਧੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। (2008) ਮਾਮੂਲੀ ਸੋਧਾਂ (ਐਲ-ਨਾਗਰ ਐਟ ਅਲ., 2023; ਓਸਮਾਨ ਐਟ ਅਲ., 2023) ਦੇ ਨਾਲ ਅਤੇ ਪੌਲੀਫੇਨੋਲ ਆਕਸੀਡੇਸ (ਪੀਪੀਓ) ਦੀ ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਗਤੀਵਿਧੀ 100 ਐਮਐਮ ਸੋਡੀਅਮ ਫਾਸਫੇਟ ਬਫਰ (ਪੀਐਚ 6.0) ਦੇ 2.2 ਮਿਲੀਲੀਟਰ, ਗੁਆਇਕੋਲ ਦੇ 100 μl (ਟੀਸੀਆਈ ਕੈਮੀਕਲ, ਪੋਰਟਲੈਂਡ, ਓਰੇਗਨ, ਯੂਐਸਏ) ਅਤੇ 12 ਐਮਐਮ H2O2 ਦੇ 100 μl ਨਾਲ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਵਿਧੀ ਨੂੰ (ਐਲ-ਨਾਗਰ ਐਟ ਅਲ., 2023; ਓਸਮਾਨ ਐਟ ਅਲ., 2023) ਤੋਂ ਥੋੜ੍ਹਾ ਸੋਧਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਇਹ ਪਰਖ 0.1 ਐਮ ਫਾਸਫੇਟ ਬਫਰ (ਪੀਐਚ 6.0) ਵਿੱਚ ਤਾਜ਼ੇ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਗਏ 3 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਕੈਟੇਚੋਲ ਘੋਲ (ਥਰਮੋ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ ਕੈਮੀਕਲਜ਼, ਵਾਲਥਮ, ਐਮਏ, ਯੂਐਸਏ) (0.01 ਐਮ) ਨਾਲ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। CAT ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ 240 nm (A240) 'ਤੇ H2O2 ਦੇ ਸੜਨ ਦੀ ਨਿਗਰਾਨੀ ਕਰਕੇ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ, POX ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ 436 nm (A436) 'ਤੇ ਸੋਖਣ ਵਿੱਚ ਵਾਧੇ ਦੀ ਨਿਗਰਾਨੀ ਕਰਕੇ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ, ਅਤੇ PPO ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ UV-160A ਸਪੈਕਟਰੋਫੋਟੋਮੀਟਰ (ਸ਼ਿਮਾਡਜ਼ੂ, ਜਾਪਾਨ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ 3 ਮਿੰਟ ਲਈ ਹਰ 30 ਸਕਿੰਟ 'ਤੇ 495 nm (A495) 'ਤੇ ਸੋਖਣ ਦੇ ਉਤਰਾਅ-ਚੜ੍ਹਾਅ ਨੂੰ ਰਿਕਾਰਡ ਕਰਕੇ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ।
ਰੀਅਲ-ਟਾਈਮ RT-PCR ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਤਿੰਨ ਐਂਟੀਆਕਸੀਡੈਂਟ-ਸਬੰਧਤ ਜੀਨਾਂ ਦੇ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਟ ਪੱਧਰਾਂ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਪੇਰੋਕਸੀਸੋਮਲ ਕੈਟਾਲੇਸ (PvCAT1; GenBank Accession No. KF033307.1), ਸੁਪਰਆਕਸਾਈਡ ਡਿਸਮਿਊਟੇਜ਼ (PvSOD; GenBank Accession No. XM_068639556.1), ਅਤੇ ਗਲੂਟੈਥੀਓਨ ਰੀਡਕਟੇਸ (PvGR; GenBank Accession No. KY195009.1), ਆਖਰੀ ਇਲਾਜ ਤੋਂ 72 ਘੰਟੇ ਬਾਅਦ ਬੀਨ ਦੇ ਪੱਤਿਆਂ (ਉੱਪਰ ਤੋਂ ਦੂਜੇ ਅਤੇ ਤੀਜੇ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਵਿਕਸਤ ਪੱਤੇ) ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ। ਸੰਖੇਪ ਵਿੱਚ, ਨਿਰਮਾਤਾ ਦੇ ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ Simply P Total RNA Extraction Kit (Cat. No. BSC52S1; BioFlux, Biori Technology, China) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ RNA ਨੂੰ ਅਲੱਗ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਫਿਰ, ਨਿਰਮਾਤਾ ਦੇ ਨਿਰਦੇਸ਼ਾਂ ਅਨੁਸਾਰ TOP script™ cDNA ਸਿੰਥੇਸਿਸ ਕਿੱਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ cDNA ਨੂੰ ਸੰਸ਼ਲੇਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਉਪਰੋਕਤ ਤਿੰਨ ਜੀਨਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਕ੍ਰਮ ਪੂਰਕ ਸਾਰਣੀ S3 ਵਿੱਚ ਸੂਚੀਬੱਧ ਹਨ। PvActin-3 (GenBank ਐਕਸੈਸ਼ਨ ਨੰਬਰ: XM_068616709.1) ਨੂੰ ਹਾਊਸਕੀਪਿੰਗ ਜੀਨ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ 2-ΔΔCT ਵਿਧੀ (Livak and Schmittgen, 2001) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਸੰਬੰਧਿਤ ਜੀਨ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਬਾਇਓਟਿਕ ਤਣਾਅ (ਆਮ ਫਲ਼ੀਦਾਰਾਂ ਅਤੇ ਐਂਥ੍ਰੈਕਨੋਜ਼ ਫੰਗਸ ਕੋਲੇਟੋਟ੍ਰੀਚਮ ਲਿੰਡੇਮੁਥੀਅਨਮ ਵਿਚਕਾਰ ਅਸੰਗਤ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ) ਅਤੇ ਅਬਾਇਓਟਿਕ ਤਣਾਅ (ਸੋਕਾ, ਖਾਰਾਪਣ, ਘੱਟ ਤਾਪਮਾਨ) ਦੇ ਅਧੀਨ ਐਕਟਿਨ ਸਥਿਰਤਾ ਦਾ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ (Borges et al., 2012)।
ਅਸੀਂ ਸ਼ੁਰੂ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰੋਟੀਨ-ਪ੍ਰੋਟੀਨ BLAST ਟੂਲ (BLASTp 2.15.0+) (Altschul et al., 1997, 2005) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ S. sclerotiorum ਵਿੱਚ oxaloacetate acetylhydrolase (OAH) ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦਾ ਇੱਕ ਜੀਨੋਮ-ਵਿਆਪੀ ਸਿਲੀਕੋ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ। ਸੰਖੇਪ ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ S. sclerotiorum (ਟੈਕਸੀਡ: 5180) ਵਿੱਚ ਸਮਰੂਪ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨੂੰ ਮੈਪ ਕਰਨ ਲਈ ਪੁੱਛਗਿੱਛ ਕ੍ਰਮ ਵਜੋਂ Aspergillus fijiensis CBS 313.89 (AfOAH; ਟੈਕਸਾਈਡ: 1191702; GenBank ਐਕਸੈਸੀਅਨ ਨੰਬਰ XP_040799428.1; 342 ਅਮੀਨੋ ਐਸਿਡ) ਅਤੇ Penicillium lagena (PlOAH; ਟੈਕਸਾਈਡ: 94218; GenBank ਐਕਸੈਸੀਅਨ ਨੰਬਰ XP_056833920.1; 316 ਅਮੀਨੋ ਐਸਿਡ) ਤੋਂ OAH ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ। BLASTp ਨੂੰ ਨੈਸ਼ਨਲ ਸੈਂਟਰ ਫਾਰ ਬਾਇਓਟੈਕਨਾਲੋਜੀ ਇਨਫਰਮੇਸ਼ਨ (NCBI) ਦੀ ਵੈੱਬਸਾਈਟ, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/ 'ਤੇ GenBank ਵਿੱਚ ਸਭ ਤੋਂ ਹਾਲ ਹੀ ਵਿੱਚ ਉਪਲਬਧ S. sclerotiorum ਜੀਨੋਮ ਡੇਟਾ ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, S. sclerotiorum (SsOAH) ਤੋਂ ਅਨੁਮਾਨਿਤ OAH ਜੀਨ ਅਤੇ A. fijiensis CBS 313.89 ਤੋਂ AfOAH ਦੇ ਵਿਕਾਸਵਾਦੀ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਅਤੇ ਫਾਈਲੋਜੈਨੇਟਿਕ ਟ੍ਰੀ ਅਤੇ P. lagena ਤੋਂ PlOAH ਦਾ ਅਨੁਮਾਨ MEGA11 (Tamura et al., 2021) ਅਤੇ JTT ਮੈਟ੍ਰਿਕਸ-ਅਧਾਰਿਤ ਮਾਡਲ (Jones et al., 1992) ਵਿੱਚ ਵੱਧ ਤੋਂ ਵੱਧ ਸੰਭਾਵਨਾ ਵਿਧੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਲਗਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਫਾਈਲੋਜੈਨੇਟਿਕ ਟ੍ਰੀ ਨੂੰ S. sclerotiorum ਤੋਂ ਸਾਰੇ ਅਨੁਮਾਨਿਤ OAH ਜੀਨਾਂ (SsOAH) ਦੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਕ੍ਰਮਾਂ ਦੇ ਮਲਟੀਪਲ ਅਲਾਈਨਮੈਂਟ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਅਤੇ ਕੰਸਟ੍ਰੈਂਟ-ਅਧਾਰਿਤ ਅਲਾਈਨਮੈਂਟ ਟੂਲ (COBALT; https://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/cobalt/re_cobalt.cgi) (Papadopoulos and Agarwala, 2007) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਪੁੱਛਗਿੱਛ ਕ੍ਰਮ ਨਾਲ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, S. sclerotiorum ਤੋਂ SsOAH ਦੇ ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਮੇਲ ਖਾਂਦੇ ਅਮੀਨੋ ਐਸਿਡ ਕ੍ਰਮਾਂ ਨੂੰ ClustalW (http://www.genome.jp/tools-bin/clustalw) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਪੁੱਛਗਿੱਛ ਕ੍ਰਮਾਂ (AfOAH ਅਤੇ PlOAH) (Larkin et al., 2007) ਨਾਲ ਇਕਸਾਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ ਅਲਾਈਨਮੈਂਟ ਵਿੱਚ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਖੇਤਰਾਂ ਨੂੰ ESPript ਟੂਲ (ਵਰਜਨ 3.0; https://espript.ibcp.fr/ESPript/ESPript/index.php) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਵਿਜ਼ੁਅਲਾਈਜ਼ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, S. sclerotiorum SsOAH ਦੇ ਅਨੁਮਾਨਿਤ ਕਾਰਜਸ਼ੀਲ ਪ੍ਰਤੀਨਿਧੀ ਡੋਮੇਨਾਂ ਅਤੇ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਸਾਈਟਾਂ ਨੂੰ ਇੰਟਰਪ੍ਰੋ ਟੂਲ (https://www.ebi.ac.uk/interpro/) (Blum et al., 2021) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਪਰਿਵਾਰਾਂ ਵਿੱਚ ਇੰਟਰਐਕਟਿਵ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸ਼੍ਰੇਣੀਬੱਧ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਅੰਤ ਵਿੱਚ, ਅਨੁਮਾਨਿਤ S. sclerotiorum SsOAH ਦਾ ਤਿੰਨ-ਅਯਾਮੀ (3D) ਢਾਂਚਾ ਮਾਡਲਿੰਗ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਹੋਮੋਲੋਜੀ/ਐਨਾਲੋਜੀ ਪਛਾਣ ਇੰਜਣ (Phyre2 ਸਰਵਰ ਸੰਸਕਰਣ 2.0; http://www.sbg.bio.ic.ac.uk/~phyre2/html/page.cgi?id=index) (Kelley et al., 2015) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ SWISS-MODEL ਸਰਵਰ (https://swissmodel.expasy.org/) (Biasini et al., 2014) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਪ੍ਰਮਾਣਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। ਅਨੁਮਾਨਿਤ ਤਿੰਨ-ਅਯਾਮੀ ਢਾਂਚੇ (PDB ਫਾਰਮੈਟ) ਨੂੰ UCSF-Chimera ਪੈਕੇਜ (ਵਰਜਨ 1.15; https://www.cgl.ucsf.edu/chimera/) (Pettersen et al., 2004) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਇੰਟਰਐਕਟਿਵ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਿਜ਼ੂਅਲਾਈਜ਼ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਸਕਲੇਰੋਟੀਨੀਆ ਸਕਲੇਰੋਟੀਓਰਮ ਦੇ ਮਾਈਸੀਲੀਆ ਵਿੱਚ ਆਕਸਾਲਾਐਸੀਟੇਟ ਐਸੀਟਾਈਲਹਾਈਡ੍ਰੋਲੇਸ (SsOAH; GenBank ਐਕਸੈਸ਼ਨ ਨੰਬਰ: XM_001590428.1) ਦੇ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਿਪਸ਼ਨਲ ਪੱਧਰ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਰੀਅਲ-ਟਾਈਮ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ PCR ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਸੰਖੇਪ ਵਿੱਚ, S. ਸਕਲੇਰੋਟੀਓਰਮ ਨੂੰ PDB ਵਾਲੇ ਇੱਕ ਫਲਾਸਕ ਵਿੱਚ ਟੀਕਾ ਲਗਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਇੱਕ ਹਿੱਲਣ ਵਾਲੇ ਇਨਕਿਊਬੇਟਰ (ਮਾਡਲ: I2400, ਨਿਊ ਬਰੰਸਵਿਕ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ ਕੰਪਨੀ, ਐਡੀਸਨ, NJ, USA) ਵਿੱਚ 25 ± 2 °C 'ਤੇ 150 rpm 'ਤੇ 24 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ ਅਤੇ ਮਾਈਸੀਲੀਆ ਦੇ ਵਾਧੇ ਨੂੰ ਉਤੇਜਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਨਿਰੰਤਰ ਹਨੇਰੇ (24 ਘੰਟੇ) ਵਿੱਚ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਇਸ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ L-ornithine ਅਤੇ ਉੱਲੀਨਾਸ਼ਕ Rizolex-T ਨਾਲ ਅੰਤਿਮ IC50 ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ (ਕ੍ਰਮਵਾਰ ਲਗਭਗ 40 ਅਤੇ 3.2 mg/L) 'ਤੇ ਇਲਾਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਫਿਰ ਉਸੇ ਸਥਿਤੀਆਂ ਵਿੱਚ ਹੋਰ 24 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ ਸੰਸਕ੍ਰਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਇਨਕਿਊਬੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਕਲਚਰ ਨੂੰ 5 ਮਿੰਟ ਲਈ 2500 rpm 'ਤੇ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ ਜੀਨ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਦੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ (ਫੰਗਲ ਮਾਈਸੀਲੀਅਮ) ਇਕੱਠਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। ਇਸੇ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਸੰਕਰਮਿਤ ਪੌਦਿਆਂ ਤੋਂ 0, 24, 48, 72, 96, ਅਤੇ 120 ਘੰਟੇ ਬਾਅਦ ਫੰਗਲ ਮਾਈਸੀਲੀਅਮ ਇਕੱਠਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਨੇ ਸੰਕਰਮਿਤ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਦੀ ਸਤ੍ਹਾ 'ਤੇ ਚਿੱਟਾ ਉੱਲੀ ਅਤੇ ਸੂਤੀ ਮਾਈਸੀਲੀਅਮ ਬਣਾਇਆ ਸੀ। RNA ਨੂੰ ਫੰਗਲ ਮਾਈਸੀਲੀਅਮ ਤੋਂ ਕੱਢਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਫਿਰ ਉੱਪਰ ਦੱਸੇ ਅਨੁਸਾਰ cDNA ਦਾ ਸੰਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। SsOAH ਲਈ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਕ੍ਰਮ ਪੂਰਕ ਸਾਰਣੀ S3 ਵਿੱਚ ਸੂਚੀਬੱਧ ਹਨ। SsActin (GenBank ਐਕਸੈਸ਼ਨ ਨੰਬਰ: XM_001589919.1) ਨੂੰ ਹਾਊਸਕੀਪਿੰਗ ਜੀਨ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ ਰਿਸ਼ਤੇਦਾਰ ਜੀਨ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਦੀ ਗਣਨਾ 2-ΔΔCT ਵਿਧੀ (Livak ਅਤੇ Schmittgen, 2001) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।
ਆਕਸਾਲਿਕ ਐਸਿਡ ਨੂੰ ਆਲੂ ਡੈਕਸਟ੍ਰੋਜ਼ ਬਰੋਥ (PDB) ਅਤੇ ਫੰਗਲ ਰੋਗਾਣੂ ਸਕਲੇਰੋਟੀਨੀਆ ਸਕਲੇਰੋਟੀਓਰਮ ਵਾਲੇ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਵਿੱਚ ਜ਼ੂ ਅਤੇ ਝਾਂਗ (2000) ਦੇ ਢੰਗ ਅਨੁਸਾਰ ਥੋੜ੍ਹੀਆਂ ਸੋਧਾਂ ਨਾਲ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਸੰਖੇਪ ਵਿੱਚ, S. ਸਕਲੇਰੋਟੀਓਰਮ ਆਈਸੋਲੇਟਸ ਨੂੰ PDB ਵਾਲੇ ਫਲਾਸਕਾਂ ਵਿੱਚ ਟੀਕਾ ਲਗਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਫਿਰ ਇੱਕ ਹਿੱਲਣ ਵਾਲੇ ਇਨਕਿਊਬੇਟਰ (ਮਾਡਲ I2400, ਨਿਊ ਬਰੰਜ਼ਵਿਕ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ ਕੰਪਨੀ, ਐਡੀਸਨ, NJ, USA) ਵਿੱਚ 150 rpm 'ਤੇ 25 ± 2 °C 'ਤੇ 3-5 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਲਗਾਤਾਰ ਹਨੇਰੇ (24 ਘੰਟੇ) ਵਿੱਚ ਕਲਚਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਤਾਂ ਜੋ ਮਾਈਸੀਲੀਅਲ ਵਿਕਾਸ ਨੂੰ ਉਤੇਜਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕੇ। ਇਨਕਿਊਬੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਫੰਗਲ ਕਲਚਰ ਨੂੰ ਪਹਿਲਾਂ ਵੌਟਮੈਨ #1 ਫਿਲਟਰ ਪੇਪਰ ਰਾਹੀਂ ਫਿਲਟਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਫਿਰ ਬਚੇ ਹੋਏ ਮਾਈਸੀਲੀਅਮ ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਲਈ 5 ਮਿੰਟ ਲਈ 2500 rpm 'ਤੇ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਆਕਸਲੇਟ ਦੇ ਹੋਰ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਨਿਰਧਾਰਨ ਲਈ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਨੂੰ 4°C 'ਤੇ ਇਕੱਠਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੀ ਤਿਆਰੀ ਲਈ, ਲਗਭਗ 0.1 ਗ੍ਰਾਮ ਪੌਦੇ ਦੇ ਟਿਸ਼ੂ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਡਿਸਟਿਲਡ ਪਾਣੀ (ਹਰ ਵਾਰ 2 ਮਿ.ਲੀ.) ਨਾਲ ਤਿੰਨ ਵਾਰ ਕੱਢਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਫਿਰ ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ 5 ਮਿੰਟ ਲਈ 2500 rpm 'ਤੇ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ, ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਨੂੰ ਵੌਟਮੈਨ ਨੰਬਰ 1 ਫਿਲਟਰ ਪੇਪਰ ਰਾਹੀਂ ਸੁੱਕਾ ਫਿਲਟਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ ਹੋਰ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ ਇਕੱਠਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ।
ਆਕਸਾਲਿਕ ਐਸਿਡ ਦੇ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ, ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਮਿਸ਼ਰਣ ਨੂੰ ਇੱਕ ਗਲਾਸ ਸਟੌਪਰਡ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ ਹੇਠ ਲਿਖੇ ਕ੍ਰਮ ਵਿੱਚ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ: 0.2 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਨਮੂਨਾ (ਜਾਂ PDB ਕਲਚਰ ਫਿਲਟਰੇਟ ਜਾਂ ਆਕਸਾਲਿਕ ਐਸਿਡ ਸਟੈਂਡਰਡ ਘੋਲ), 0.11 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਬ੍ਰੋਮੋਫੇਨੋਲ ਬਲੂ (BPB, 1 mM; ਫਿਸ਼ਰ ਕੈਮੀਕਲ, ਪਿਟਸਬਰਗ, PA, USA), 0.198 ਮਿਲੀਲੀਟਰ 1 M ਸਲਫਿਊਰਿਕ ਐਸਿਡ (H2SO4; ਅਲ-ਗੋਮਹੋਰੀਆ ਫਾਰਮਾਸਿਊਟੀਕਲਜ਼ ਐਂਡ ਮੈਡੀਕਲ ਸਪਲਾਈਜ਼, ਕਾਇਰੋ, ਮਿਸਰ) ਅਤੇ 0.176 ਮਿਲੀਲੀਟਰ 100 mM ਪੋਟਾਸ਼ੀਅਮ ਡਾਈਕ੍ਰੋਮੇਟ (K2Cr2O7; TCI ਕੈਮੀਕਲਜ਼, ਪੋਰਟਲੈਂਡ, OR, USA), ਅਤੇ ਫਿਰ ਘੋਲ ਨੂੰ ਡਿਸਟਿਲਡ ਪਾਣੀ ਨਾਲ 4.8 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਤੱਕ ਪਤਲਾ ਕਰ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ, ਜ਼ੋਰਦਾਰ ਢੰਗ ਨਾਲ ਮਿਲਾਇਆ ਗਿਆ ਅਤੇ ਤੁਰੰਤ 60 °C ਪਾਣੀ ਦੇ ਇਸ਼ਨਾਨ ਵਿੱਚ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ। 10 ਮਿੰਟ ਬਾਅਦ, ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਨੂੰ 0.5 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਸੋਡੀਅਮ ਹਾਈਡ੍ਰੋਕਸਾਈਡ ਘੋਲ (NaOH; 0.75 M) ਜੋੜ ਕੇ ਰੋਕ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ। ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਮਿਸ਼ਰਣ ਦੀ ਸੋਖਣ ਸ਼ਕਤੀ (A600) ਨੂੰ UV-160 ਸਪੈਕਟਰੋਫੋਟੋਮੀਟਰ (ਸ਼ਿਮਾਡਜ਼ੂ ਕਾਰਪੋਰੇਸ਼ਨ, ਜਾਪਾਨ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ 600 nm 'ਤੇ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ। ਕਲਚਰ ਫਿਲਟ੍ਰੇਟਾਂ ਅਤੇ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ ਕ੍ਰਮਵਾਰ PDB ਅਤੇ ਡਿਸਟਿਲਡ ਪਾਣੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ। ਕਲਚਰ ਫਿਲਟ੍ਰੇਟਾਂ ਵਿੱਚ ਆਕਸਾਲਿਕ ਐਸਿਡ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ, PDB ਮਾਧਿਅਮ (μg.mL−1) ਦੇ ਪ੍ਰਤੀ ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਆਕਸਾਲਿਕ ਐਸਿਡ ਦੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਗ੍ਰਾਮ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਦਰਸਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ, ਅਤੇ ਪੱਤਿਆਂ ਦੇ ਅਰਕ ਵਿੱਚ, ਤਾਜ਼ੇ ਭਾਰ (μg.g−1 FW) ਦੇ ਪ੍ਰਤੀ ਗ੍ਰਾਮ ਆਕਸਾਲਿਕ ਐਸਿਡ ਦੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਗ੍ਰਾਮ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਦਰਸਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ, ਇੱਕ ਆਕਸਾਲਿਕ ਐਸਿਡ ਕੈਲੀਬ੍ਰੇਸ਼ਨ ਕਰਵ (ਥਰਮੋ ਫਿਸ਼ਰ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ ਕੈਮੀਕਲਜ਼, ਵਾਲਥਮ, MA, USA) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਅਧਿਐਨ ਦੌਰਾਨ, ਸਾਰੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਨੂੰ ਇੱਕ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਬੇਤਰਤੀਬ ਡਿਜ਼ਾਈਨ (CRD) ਵਿੱਚ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਤੀ ਇਲਾਜ ਛੇ ਜੈਵਿਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀਆਂ ਅਤੇ ਪ੍ਰਤੀ ਜੈਵਿਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀਆਂ ਪੰਜ ਗਮਲੇ (ਪ੍ਰਤੀ ਘੜਾ ਦੋ ਪੌਦੇ) ਸਨ ਜਦੋਂ ਤੱਕ ਕਿ ਹੋਰ ਨਾ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਹੋਵੇ। ਜੈਵਿਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀਆਂ ਦਾ ਡੁਪਲੀਕੇਟ (ਦੋ ਤਕਨੀਕੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀਆਂ) ਵਿੱਚ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਤਕਨੀਕੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਉਸੇ ਪ੍ਰਯੋਗ ਦੀ ਪ੍ਰਜਨਨਯੋਗਤਾ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ ਪਰ ਨਕਲੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀਆਂ ਤੋਂ ਬਚਣ ਲਈ ਅੰਕੜਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਵਿੱਚ ਨਹੀਂ ਵਰਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਡੇਟਾ ਦਾ ਅੰਕੜਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਿਭਿੰਨਤਾ ਦੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ (ANOVA) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜਿਸ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਟੁਕੀ-ਕ੍ਰੈਮਰ ਇਮਾਨਦਾਰੀ ਨਾਲ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅੰਤਰ (HSD) ਟੈਸਟ (p ≤ 0.05) ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਲਈ, IC50 ਅਤੇ IC99 ਮੁੱਲਾਂ ਦੀ ਗਣਨਾ ਪ੍ਰੋਬਿਟ ਮਾਡਲ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ ਅਤੇ 95% ਵਿਸ਼ਵਾਸ ਅੰਤਰਾਲਾਂ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।
ਮਿਸਰ ਦੇ ਅਲ ਗਾਬੀਆ ਗਵਰਨੋਰੇਟ ਵਿੱਚ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੋਇਆਬੀਨ ਖੇਤਾਂ ਤੋਂ ਕੁੱਲ ਚਾਰ ਆਈਸੋਲੇਟ ਇਕੱਠੇ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ। ਪੀਡੀਏ ਮਾਧਿਅਮ 'ਤੇ, ਸਾਰੇ ਆਈਸੋਲੇਟਾਂ ਨੇ ਕਰੀਮੀ ਚਿੱਟੇ ਮਾਈਸੀਲੀਅਮ ਪੈਦਾ ਕੀਤੇ ਜੋ ਜਲਦੀ ਹੀ ਸੂਤੀ ਚਿੱਟੇ (ਚਿੱਤਰ 1A) ਅਤੇ ਫਿਰ ਸਕਲੇਰੋਟੀਅਮ ਪੜਾਅ 'ਤੇ ਬੇਜ ਜਾਂ ਭੂਰੇ ਹੋ ਗਏ। ਸਕਲੇਰੋਟੀਆ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੰਘਣੇ, ਕਾਲੇ, ਗੋਲਾਕਾਰ ਜਾਂ ਅਨਿਯਮਿਤ ਆਕਾਰ ਦੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, 5.2 ਤੋਂ 7.7 ਮਿਲੀਮੀਟਰ ਲੰਬੇ ਅਤੇ 3.4 ਤੋਂ 5.3 ਮਿਲੀਮੀਟਰ ਵਿਆਸ ਵਿੱਚ (ਚਿੱਤਰ 1B)। ਹਾਲਾਂਕਿ ਚਾਰ ਆਈਸੋਲੇਟਾਂ ਨੇ 25 ± 2 °C (ਚਿੱਤਰ 1A) 'ਤੇ 10-12 ਦਿਨਾਂ ਦੇ ਇਨਕਿਊਬੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਕਲਚਰ ਮਾਧਿਅਮ ਦੇ ਕਿਨਾਰੇ 'ਤੇ ਸਕਲੇਰੋਟੀਆ ਦਾ ਇੱਕ ਹਾਸ਼ੀਏ ਦਾ ਪੈਟਰਨ ਵਿਕਸਤ ਕੀਤਾ, ਪ੍ਰਤੀ ਪਲੇਟ ਸਕਲੇਰੋਟੀਆ ਦੀ ਗਿਣਤੀ ਉਨ੍ਹਾਂ ਵਿੱਚ ਕਾਫ਼ੀ ਵੱਖਰੀ ਸੀ (P < 0.001), ਆਈਸੋਲੇਟ 3 ਵਿੱਚ ਸਕਲੇਰੋਟੀਆ ਦੀ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਗਿਣਤੀ ਸੀ (32.33 ± 1.53 ਸਕਲੇਰੋਟੀਆ ਪ੍ਰਤੀ ਪਲੇਟ; ਚਿੱਤਰ 1C)। ਇਸੇ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਆਈਸੋਲੇਟ #3 ਨੇ PDB ਵਿੱਚ ਹੋਰ ਆਈਸੋਲੇਟਾਂ ਨਾਲੋਂ ਜ਼ਿਆਦਾ ਆਕਸਾਲਿਕ ਐਸਿਡ ਪੈਦਾ ਕੀਤਾ (3.33 ± 0.49 μg.mL−1; ਚਿੱਤਰ 1D)। ਆਈਸੋਲੇਟ #3 ਨੇ ਫਾਈਟੋਪੈਥੋਜੇਨਿਕ ਫੰਗਸ ਸਕਲੇਰੋਟੀਨੀਆ ਸਕਲੇਰੋਟੀਓਰਮ ਦੀਆਂ ਖਾਸ ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨਿਕ ਅਤੇ ਸੂਖਮ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਦਿਖਾਈਆਂ। ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ, PDA 'ਤੇ, ਆਈਸੋਲੇਟ #3 ਦੀਆਂ ਕਲੋਨੀਆਂ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਵਧੀਆਂ, ਕਰੀਮੀ ਚਿੱਟੀਆਂ ਸਨ (ਚਿੱਤਰ 1A), ਉਲਟਾ ਬੇਜ ਜਾਂ ਹਲਕਾ ਸੈਲਮਨ ਪੀਲਾ-ਭੂਰਾ, ਅਤੇ 9 ਸੈਂਟੀਮੀਟਰ ਵਿਆਸ ਵਾਲੀ ਪਲੇਟ ਦੀ ਸਤ੍ਹਾ ਨੂੰ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਢੱਕਣ ਲਈ 25 ± 2°C 'ਤੇ 6-7 ਦਿਨਾਂ ਦੀ ਲੋੜ ਸੀ। ਉਪਰੋਕਤ ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨਿਕ ਅਤੇ ਸੂਖਮ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ, ਆਈਸੋਲੇਟ #3 ਦੀ ਪਛਾਣ ਸਕਲੇਰੋਟੀਨੀਆ ਸਕਲੇਰੋਟੀਓਰਮ ਵਜੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।
ਚਿੱਤਰ 1. ਆਮ ਫਲ਼ੀਦਾਰ ਫਸਲਾਂ ਤੋਂ S. sclerotiorum ਆਈਸੋਲੇਟਸ ਦੀਆਂ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਅਤੇ ਜਰਾਸੀਮਤਾ। (A) PDA ਮਾਧਿਅਮ 'ਤੇ ਚਾਰ S. sclerotiorum ਆਈਸੋਲੇਟਸ ਦਾ ਮਾਈਸੀਲੀਅਲ ਵਾਧਾ, (B) ਚਾਰ S. sclerotiorum ਆਈਸੋਲੇਟਸ ਦਾ ਸਕਲੇਰੋਟੀਆ, (C) ਸਕਲੇਰੋਟੀਆ ਦੀ ਗਿਣਤੀ (ਪ੍ਰਤੀ ਪਲੇਟ), (D) PDB ਮਾਧਿਅਮ 'ਤੇ ਆਕਸਾਲਿਕ ਐਸਿਡ સ્ત્રાવ (μg.mL−1), ਅਤੇ (E) ਗ੍ਰੀਨਹਾਊਸ ਹਾਲਤਾਂ ਵਿੱਚ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਵਪਾਰਕ ਫਲ਼ੀਦਾਰ ਕਿਸਮ Giza 3 'ਤੇ ਚਾਰ S. sclerotiorum ਆਈਸੋਲੇਟਸ ਦੀ ਬਿਮਾਰੀ ਦੀ ਤੀਬਰਤਾ (%)। ਮੁੱਲ ਪੰਜ ਜੈਵਿਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀਆਂ (n = 5) ਦੇ ਔਸਤ ± SD ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ। ਵੱਖ-ਵੱਖ ਅੱਖਰ ਇਲਾਜਾਂ (p < 0.05) ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਅੰਕੜਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅੰਤਰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ। (F–H) ਆਈਸੋਲੇਟ #3 (dpi) ਦੇ ਨਾਲ ਟੀਕਾਕਰਨ ਤੋਂ 10 ਦਿਨ ਬਾਅਦ, ਜ਼ਮੀਨ ਦੇ ਉੱਪਰਲੇ ਤਣਿਆਂ ਅਤੇ ਸਿਲੀਕ 'ਤੇ ਆਮ ਚਿੱਟੇ ਉੱਲੀ ਦੇ ਲੱਛਣ ਕ੍ਰਮਵਾਰ ਪ੍ਰਗਟ ਹੋਏ। (I) ਐਸ. ਸਕਲੇਰੋਟੀਓਰਮ ਆਈਸੋਲੇਟ #3 ਦੇ ਅੰਦਰੂਨੀ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਾਈਬਡ ਸਪੇਸਰ (ITS) ਖੇਤਰ ਦਾ ਵਿਕਾਸਵਾਦੀ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਵੱਧ ਤੋਂ ਵੱਧ ਸੰਭਾਵਨਾ ਵਿਧੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਨੈਸ਼ਨਲ ਸੈਂਟਰ ਫਾਰ ਬਾਇਓਟੈਕਨਾਲੋਜੀ ਇਨਫਰਮੇਸ਼ਨ (NCBI) ਡੇਟਾਬੇਸ (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/) ਤੋਂ ਪ੍ਰਾਪਤ 20 ਸੰਦਰਭ ਆਈਸੋਲੇਟਸ/ਸਟ੍ਰੇਨ ਨਾਲ ਤੁਲਨਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਕਲੱਸਟਰਿੰਗ ਲਾਈਨਾਂ ਦੇ ਉੱਪਰਲੇ ਨੰਬਰ ਖੇਤਰ ਕਵਰੇਜ (%) ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਕਲੱਸਟਰਿੰਗ ਲਾਈਨਾਂ ਦੇ ਹੇਠਾਂ ਨੰਬਰ ਸ਼ਾਖਾ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ।
ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਰੋਗਾਣੂ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕਰਨ ਲਈ, ਗ੍ਰੀਨਹਾਊਸ ਹਾਲਤਾਂ ਵਿੱਚ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਵਪਾਰਕ ਬੀਨ ਕਿਸਮ ਗੀਜ਼ਾ 3 ਨੂੰ ਟੀਕਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਚਾਰ ਐਸ. ਸਕਲੇਰੋਟੀਓਰਮ ਆਈਸੋਲੇਟਸ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ, ਜੋ ਕਿ ਕੋਚ ਦੇ ਸਿਧਾਂਤਾਂ (ਚਿੱਤਰ 1E) ਦੇ ਅਨੁਕੂਲ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ ਸਾਰੇ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਫੰਗਲ ਆਈਸੋਲੇਟ ਜਰਾਸੀਮ ਸਨ ਅਤੇ ਹਰੀ ਬੀਨ (cv. Giza 3) ਨੂੰ ਸੰਕਰਮਿਤ ਕਰ ਸਕਦੇ ਸਨ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਜ਼ਮੀਨ ਦੇ ਉੱਪਰਲੇ ਸਾਰੇ ਹਿੱਸਿਆਂ (ਚਿੱਤਰ 1F) 'ਤੇ ਖਾਸ ਚਿੱਟੇ ਉੱਲੀ ਦੇ ਲੱਛਣ ਪੈਦਾ ਹੋ ਸਕਦੇ ਸਨ, ਖਾਸ ਕਰਕੇ ਟੀਕਾਕਰਨ (dpi) ਤੋਂ 10 ਦਿਨਾਂ ਬਾਅਦ ਤਣੀਆਂ (ਚਿੱਤਰ 1G) ਅਤੇ ਫਲੀਆਂ (ਚਿੱਤਰ 1H) 'ਤੇ, ਆਈਸੋਲੇਟ 3 ਦੋ ਸੁਤੰਤਰ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਵਿੱਚ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਹਮਲਾਵਰ ਆਈਸੋਲੇਟ ਸੀ। ਆਈਸੋਲੇਟ 3 ਵਿੱਚ ਬੀਨ ਪੌਦਿਆਂ 'ਤੇ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਬਿਮਾਰੀ ਦੀ ਤੀਬਰਤਾ (%) ਸੀ (24.0 ± 4.0, 58.0 ± 2.0, ਅਤੇ 76.7 ± 3.1 ਕ੍ਰਮਵਾਰ 7, 14, ਅਤੇ 21 ਦਿਨਾਂ ਬਾਅਦ ਲਾਗ; ਚਿੱਤਰ 1F)।
ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਹਮਲਾਵਰ S. sclerotiorum isolate #3 ਦੀ ਪਛਾਣ ਅੰਦਰੂਨੀ ਟ੍ਰਾਂਸਕ੍ਰਾਈਬਡ ਸਪੇਸਰ (ITS) ਸੀਕੁਐਂਸਿੰਗ (ਚਿੱਤਰ 1I) ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ ਹੋਰ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕੀਤੀ ਗਈ। ਆਈਸੋਲੇਟ #3 ਅਤੇ 20 ਰੈਫਰੈਂਸ ਆਈਸੋਲੇਟਸ/ਸਟ੍ਰੇਨ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਫਾਈਲੋਜੈਨੇਟਿਕ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਨੇ ਉਹਨਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਉੱਚ ਸਮਾਨਤਾ (>99%) ਦਿਖਾਈ। ਇਹ ਧਿਆਨ ਦੇਣ ਯੋਗ ਹੈ ਕਿ S. sclerotiorum isolate #3 (533 bp) ਵਿੱਚ ਸੁੱਕੇ ਮਟਰ ਦੇ ਬੀਜਾਂ ਤੋਂ ਅਲੱਗ ਕੀਤੇ ਗਏ ਅਮਰੀਕੀ S. sclerotiorum isolate LPM36 (GenBank accession ਨੰਬਰ MK896659.1; 540 bp) ਅਤੇ ਚੀਨੀ S. sclerotiorum isolate YKY211 (GenBank accession ਨੰਬਰ OR206374.1; 548 bp) ਨਾਲ ਉੱਚ ਸਮਾਨਤਾ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਵਾਇਲੇਟ (ਮੈਥੀਓਲਾ ਇਨਕਾਨਾ) ਸਟੈਮ ਰੋਟ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਦਾ ਹੈ, ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਸਾਰਿਆਂ ਨੂੰ ਡੈਂਡਰੋਗ੍ਰਾਮ (ਚਿੱਤਰ 1I) ਦੇ ਸਿਖਰ 'ਤੇ ਵੱਖਰੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸਮੂਹਬੱਧ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ। ਨਵਾਂ ਕ੍ਰਮ NCBI ਡੇਟਾਬੇਸ ਵਿੱਚ ਜਮ੍ਹਾ ਕਰ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸਨੂੰ "Sclerotinia sclerotiorum – isolate YN-25" (GenBank ਐਕਸੈਸ਼ਨ ਨੰਬਰ PV202792) ਨਾਮ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਹੈ। ਇਹ ਦੇਖਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਕਿ ਆਈਸੋਲੇਟ 3 ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਹਮਲਾਵਰ ਆਈਸੋਲੇਟ ਹੈ; ਇਸ ਲਈ, ਇਸ ਆਈਸੋਲੇਟ ਨੂੰ ਬਾਅਦ ਦੇ ਸਾਰੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਵਿੱਚ ਅਧਿਐਨ ਲਈ ਚੁਣਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।
ਵੱਖ-ਵੱਖ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣਾਂ (12.5, 25, 50, 75, 100 ਅਤੇ 125 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਲੀ) 'ਤੇ ਐਸ. ਸਕਲੇਰੋਟੀਓਰਮ ਆਈਸੋਲੇਟ 3 ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ ਡਾਇਮਾਈਨ ਐਲ-ਓਰਨੀਥਾਈਨ (ਸਿਗਮਾ-ਐਲਡਰਿਕ, ਡਾਰਮਸਟੈਡ, ਜਰਮਨੀ) ਦੀ ਐਂਟੀਬੈਕਟੀਰੀਅਲ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੀ ਜਾਂਚ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਵਿੱਚ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਇਹ ਧਿਆਨ ਦੇਣ ਯੋਗ ਹੈ ਕਿ ਐਲ-ਓਰਨੀਥਾਈਨ ਨੇ ਇੱਕ ਐਂਟੀਬੈਕਟੀਰੀਅਲ ਪ੍ਰਭਾਵ ਪਾਇਆ ਅਤੇ ਹੌਲੀ-ਹੌਲੀ ਖੁਰਾਕ-ਨਿਰਭਰ ਤਰੀਕੇ ਨਾਲ ਐਸ. ਸਕਲੇਰੋਟੀਓਰਮ ਹਾਈਫਾਈ ਦੇ ਰੇਡੀਅਲ ਵਾਧੇ ਨੂੰ ਰੋਕਿਆ (ਚਿੱਤਰ 2A, B)। ਟੈਸਟ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ (125 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਲੀਟਰ) 'ਤੇ, ਐਲ-ਓਰਨੀਥਾਈਨ ਨੇ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਮਾਈਸੀਲੀਅਲ ਵਿਕਾਸ ਰੋਕ ਦਰ (99.62 ± 0.27%; ਚਿੱਤਰ 2B) ਦਾ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਨ ਕੀਤਾ, ਜੋ ਕਿ ਵਪਾਰਕ ਉੱਲੀਨਾਸ਼ਕ ਰਿਜ਼ੋਲੇਕਸ-ਟੀ (ਰੋਕਥਾਮ ਦਰ 99.45 ± 0.39%; ਚਿੱਤਰ 2C) ਦੇ ਬਰਾਬਰ ਸੀ, ਜੋ ਕਿ ਟੈਸਟ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ (10 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਲੀਟਰ) 'ਤੇ ਸਮਾਨ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ੀਲਤਾ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ।
ਚਿੱਤਰ 2. ਸਕਲੇਰੋਟੀਨੀਆ ਸਕਲੇਰੋਟੀਓਰਮ ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ ਐਲ-ਓਰਨੀਥਾਈਨ ਦੀ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਐਂਟੀਬੈਕਟੀਰੀਅਲ ਗਤੀਵਿਧੀ। (ਏ) ਵਪਾਰਕ ਉੱਲੀਨਾਸ਼ਕ ਰਿਜ਼ੋਲੇਕਸ-ਟੀ (10 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਲੀਟਰ) ਨਾਲ ਐਸ. ਸਕਲੇਰੋਟੀਓਰਮ ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ ਐਲ-ਓਰਨੀਥਾਈਨ ਦੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦੀ ਐਂਟੀਬੈਕਟੀਰੀਅਲ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੀ ਤੁਲਨਾ। (ਬੀ, ਸੀ) ਕ੍ਰਮਵਾਰ ਐਲ-ਓਰਨੀਥਾਈਨ (12.5, 25, 50, 75, 100 ਅਤੇ 125 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਲੀਟਰ) ਜਾਂ ਰਿਜ਼ੋਲੇਕਸ-ਟੀ (2, 4, 6, 8 ਅਤੇ 10 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਲੀਟਰ) ਦੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਐਸ. ਸਕਲੇਰੋਟੀਓਰਮ ਮਾਈਸੀਲੀਅਲ ਵਿਕਾਸ ਦੀ ਰੋਕਥਾਮ ਦਰ (%)। ਮੁੱਲ ਪੰਜ ਜੈਵਿਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀਆਂ (n = 5) ਦੇ ਔਸਤ ± SD ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ। ਵੱਖ-ਵੱਖ ਅੱਖਰ ਇਲਾਜਾਂ (p < 0.05) ਵਿਚਕਾਰ ਅੰਕੜਾਤਮਕ ਅੰਤਰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ। (ਡੀ, ਈ) ਕ੍ਰਮਵਾਰ ਐਲ-ਓਰਨੀਥਾਈਨ ਅਤੇ ਵਪਾਰਕ ਉੱਲੀਨਾਸ਼ਕ ਰਿਜ਼ੋਲੇਕਸ-ਟੀ ਦਾ ਪ੍ਰੋਬਿਟ ਮਾਡਲ ਰਿਗਰੈਸ਼ਨ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ। ਪ੍ਰੋਬਿਟ ਮਾਡਲ ਰਿਗਰੈਸ਼ਨ ਲਾਈਨ ਨੂੰ ਇੱਕ ਠੋਸ ਨੀਲੀ ਲਾਈਨ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ, ਅਤੇ ਵਿਸ਼ਵਾਸ ਅੰਤਰਾਲ (95%) ਨੂੰ ਇੱਕ ਡੈਸ਼ਡ ਲਾਲ ਲਾਈਨ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ।
ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਪ੍ਰੋਬਿਟ ਰਿਗਰੈਸ਼ਨ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਸੰਬੰਧਿਤ ਪਲਾਟ ਸਾਰਣੀ 1 ਅਤੇ ਚਿੱਤਰ 2D,E ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਏ ਗਏ ਹਨ। ਸੰਖੇਪ ਵਿੱਚ, L-ornithine ਦੇ ਸਵੀਕਾਰਯੋਗ ਢਲਾਣ ਮੁੱਲ (y = 2.92x − 4.67) ਅਤੇ ਸੰਬੰਧਿਤ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅੰਕੜੇ (Cox & Snell R2 = 0.3709, Nagelkerke R2 = 0.4998 ਅਤੇ p < 0.0001; ਚਿੱਤਰ 2D) ਨੇ ਵਪਾਰਕ ਉੱਲੀਨਾਸ਼ਕ Rizolex-T (y = 1.96x − 0.99, Cox & Snell R2 = 0.1242, Nagelkerke R2 = 0.1708 ਅਤੇ p < 0.0001) (ਸਾਰਣੀ 1) ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ S. sclerotiorum ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ ਇੱਕ ਵਧੀ ਹੋਈ ਐਂਟੀਫੰਗਲ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਦਰਸਾਇਆ।
ਸਾਰਣੀ 1. ਐਸ. ਸਕਲੇਰੋਟੀਓਰਮ ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ ਐਲ-ਓਰਨੀਥਾਈਨ ਅਤੇ ਵਪਾਰਕ ਉੱਲੀਨਾਸ਼ਕ "ਰਾਈਜ਼ੋਲੈਕਸ-ਟੀ" ਦੇ ਅੱਧੇ-ਵੱਧ ਤੋਂ ਵੱਧ ਇਨਿਹਿਬਿਟਰੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ (IC50) ਅਤੇ IC99 (mg/l) ਦੇ ਮੁੱਲ।
ਕੁੱਲ ਮਿਲਾ ਕੇ, L-ornithine (250 mg/L) ਨੇ ਇਲਾਜ ਨਾ ਕੀਤੇ S. sclerotiorum-ਸੰਕਰਮਿਤ ਪੌਦਿਆਂ (ਨਿਯੰਤਰਣ; ਚਿੱਤਰ 3A) ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਆਮ ਬੀਨ ਪੌਦਿਆਂ 'ਤੇ ਚਿੱਟੇ ਉੱਲੀ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਅਤੇ ਗੰਭੀਰਤਾ ਨੂੰ ਕਾਫ਼ੀ ਘਟਾ ਦਿੱਤਾ। ਸੰਖੇਪ ਵਿੱਚ, ਹਾਲਾਂਕਿ ਇਲਾਜ ਨਾ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸੰਕਰਮਿਤ ਨਿਯੰਤਰਣ ਪੌਦਿਆਂ ਦੀ ਬਿਮਾਰੀ ਦੀ ਤੀਬਰਤਾ ਹੌਲੀ-ਹੌਲੀ ਵਧ ਗਈ (52.67 ± 1.53, 83.21 ± 2.61, ਅਤੇ 92.33 ± 3.06%), L-ornithine ਨੇ ਪੂਰੇ ਪ੍ਰਯੋਗ ਦੌਰਾਨ ਬਿਮਾਰੀ ਦੀ ਤੀਬਰਤਾ (%) ਨੂੰ ਕਾਫ਼ੀ ਘਟਾ ਦਿੱਤਾ (8.97 ± 0.15, 18.00 ± 1.00, ਅਤੇ 26.36 ± 3.07) ਕ੍ਰਮਵਾਰ 7, 14, ਅਤੇ 21 ਦਿਨਾਂ ਬਾਅਦ ਇਲਾਜ (dpt) 'ਤੇ (ਚਿੱਤਰ 3A)। ਇਸੇ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਜਦੋਂ ਐਸ. ਸਕਲੇਰੋਟੀਓਰਮ-ਸੰਕਰਮਿਤ ਬੀਨ ਪੌਦਿਆਂ ਦਾ 250 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਲੀਟਰ ਐਲ-ਓਰਨੀਥਾਈਨ ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ, ਤਾਂ ਬਿਮਾਰੀ ਪ੍ਰਗਤੀ ਵਕਰ (AUDPC) ਦੇ ਅਧੀਨ ਖੇਤਰ ਇਲਾਜ ਨਾ ਕੀਤੇ ਗਏ ਨਿਯੰਤਰਣ ਵਿੱਚ 1274.33 ± 33.13 ਤੋਂ ਘੱਟ ਕੇ 281.03 ± 7.95 ਹੋ ਗਿਆ, ਜੋ ਕਿ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਣ 50 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਲੀਟਰ ਰਿਜ਼ੋਲੇਕਸ-ਟੀ ਉੱਲੀਨਾਸ਼ਕ (183.61 ± 7.71; ਚਿੱਤਰ 3B) ਨਾਲੋਂ ਥੋੜ੍ਹਾ ਘੱਟ ਸੀ। ਦੂਜੇ ਪ੍ਰਯੋਗ ਵਿੱਚ ਵੀ ਇਹੀ ਰੁਝਾਨ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ।
ਚਿੱਤਰ 3. ਗ੍ਰੀਨਹਾਊਸ ਹਾਲਤਾਂ ਵਿੱਚ ਸਕਲੇਰੋਟੀਨੀਆ ਸਕਲੇਰੋਟੀਓਰਮ ਕਾਰਨ ਆਮ ਬੀਨ ਦੇ ਚਿੱਟੇ ਸੜਨ ਦੇ ਵਿਕਾਸ 'ਤੇ ਐਲ-ਓਰਨੀਥਾਈਨ ਦੇ ਬਾਹਰੀ ਉਪਯੋਗ ਦਾ ਪ੍ਰਭਾਵ। (ਏ) 250 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਲੀਟਰ ਐਲ-ਓਰਨੀਥਾਈਨ ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਆਮ ਬੀਨ ਦੇ ਚਿੱਟੇ ਉੱਲੀ ਦਾ ਰੋਗ ਪ੍ਰਗਤੀ ਵਕਰ। (ਬੀ) ਐਲ-ਓਰਨੀਥਾਈਨ ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਆਮ ਬੀਨ ਦੇ ਚਿੱਟੇ ਉੱਲੀ ਦੇ ਰੋਗ ਪ੍ਰਗਤੀ ਵਕਰ (AUDPC) ਦੇ ਅਧੀਨ ਖੇਤਰ। ਮੁੱਲ ਪੰਜ ਜੈਵਿਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀਆਂ (n = 5) ਦੇ ਔਸਤ ± SD ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ। ਵੱਖ-ਵੱਖ ਅੱਖਰ ਇਲਾਜਾਂ (p < 0.05) ਵਿਚਕਾਰ ਅੰਕੜਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅੰਤਰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ।
250 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਲੀਟਰ ਐਲ-ਓਰਨੀਥਾਈਨ ਦੇ ਬਾਹਰੀ ਵਰਤੋਂ ਨੇ 42 ਦਿਨਾਂ ਬਾਅਦ ਪੌਦੇ ਦੀ ਉਚਾਈ (ਚਿੱਤਰ 4A), ਪ੍ਰਤੀ ਪੌਦੇ ਦੀਆਂ ਸ਼ਾਖਾਵਾਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ (ਚਿੱਤਰ 4B), ਅਤੇ ਪ੍ਰਤੀ ਪੌਦੇ ਦੇ ਪੱਤਿਆਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ (ਚਿੱਤਰ 4C) ਨੂੰ ਹੌਲੀ-ਹੌਲੀ ਵਧਾਇਆ। ਜਦੋਂ ਕਿ ਵਪਾਰਕ ਉੱਲੀਨਾਸ਼ਕ ਰਿਜ਼ੋਲੇਕਸ-ਟੀ (50 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਲੀਟਰ) ਦਾ ਅਧਿਐਨ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਾਰੇ ਪੋਸ਼ਣ ਮਾਪਦੰਡਾਂ 'ਤੇ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਪ੍ਰਭਾਵ ਪਿਆ, 250 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਲੀਟਰ ਐਲ-ਓਰਨੀਥਾਈਨ ਦੇ ਬਾਹਰੀ ਵਰਤੋਂ ਨੇ ਇਲਾਜ ਨਾ ਕੀਤੇ ਗਏ ਨਿਯੰਤਰਣਾਂ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਦੂਜਾ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਡਾ ਪ੍ਰਭਾਵ ਪਾਇਆ (ਚਿੱਤਰ 4A-C)। ਦੂਜੇ ਪਾਸੇ, ਐਲ-ਓਰਨੀਥਾਈਨ ਦੇ ਇਲਾਜ ਦਾ ਪ੍ਰਕਾਸ਼ ਸੰਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਵਾਲੇ ਰੰਗਾਂ ਕਲੋਰੋਫਿਲ ਏ (ਚਿੱਤਰ 4D) ਅਤੇ ਕਲੋਰੋਫਿਲ ਬੀ (ਚਿੱਤਰ 4E) ਦੀ ਸਮੱਗਰੀ 'ਤੇ ਕੋਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨਹੀਂ ਪਿਆ, ਪਰ ਨੈਗੇਟਿਵ ਕੰਟਰੋਲ (0.44 ± 0.02 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਜੀ ਫਰ wt) ਅਤੇ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਕੰਟਰੋਲ (0.46 ± 0.02 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਜੀ ਫਰ wt; ਚਿੱਤਰ 4F) ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਕੁੱਲ ਕੈਰੋਟੀਨੋਇਡ ਸਮੱਗਰੀ (0.56 ± 0.03 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਜੀ ਫਰ wt) ਵਿੱਚ ਥੋੜ੍ਹਾ ਵਾਧਾ ਹੋਇਆ। ਕੁੱਲ ਮਿਲਾ ਕੇ, ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ ਐਲ-ਓਰਨੀਥਾਈਨ ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਫਲ਼ੀਦਾਰਾਂ ਲਈ ਫਾਈਟੋਟੌਕਸਿਕ ਨਹੀਂ ਹੈ ਅਤੇ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਵਾਧੇ ਨੂੰ ਵੀ ਉਤੇਜਿਤ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਚਿੱਤਰ 4. ਗ੍ਰੀਨਹਾਊਸ ਹਾਲਤਾਂ ਵਿੱਚ ਸਕਲੇਰੋਟੀਨੀਆ ਸਕਲੇਰੋਟੀਓਰਮ ਨਾਲ ਸੰਕਰਮਿਤ ਬੀਨ ਪੱਤਿਆਂ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਅਤੇ ਪ੍ਰਕਾਸ਼ ਸੰਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਵਾਲੇ ਰੰਗਾਂ 'ਤੇ ਬਾਹਰੀ ਐਲ-ਓਰਨੀਥਾਈਨ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਦਾ ਪ੍ਰਭਾਵ। (ਏ) ਪੌਦੇ ਦੀ ਉਚਾਈ (ਸੈ.ਮੀ.), (ਬੀ) ਪ੍ਰਤੀ ਪੌਦੇ ਦੀਆਂ ਸ਼ਾਖਾਵਾਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ, (ਸੀ) ਪ੍ਰਤੀ ਪੌਦੇ ਦੀਆਂ ਪੱਤਿਆਂ ਦੀ ਗਿਣਤੀ, (ਡੀ) ਕਲੋਰੋਫਿਲ ਏ ਸਮੱਗਰੀ (ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ ਜੀ-1 ਫਰ ਡਬਲਯੂਟੀ), (ਈ) ਕਲੋਰੋਫਿਲ ਬੀ ਸਮੱਗਰੀ (ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ ਜੀ-1 ਫਰ ਡਬਲਯੂਟੀ), (ਐਫ) ਕੁੱਲ ਕੈਰੋਟੀਨੋਇਡ ਸਮੱਗਰੀ (ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ ਜੀ-1 ਫਰ ਡਬਲਯੂਟੀ)। ਮੁੱਲ ਪੰਜ ਜੈਵਿਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀਆਂ ਦੇ ਔਸਤ ± SD ਹਨ (n = 5)। ਵੱਖ-ਵੱਖ ਅੱਖਰ ਇਲਾਜਾਂ (ਪੀ < 0.05) ਵਿਚਕਾਰ ਅੰਕੜਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅੰਤਰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ।
ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਆਕਸੀਜਨ ਪ੍ਰਜਾਤੀਆਂ (ROS; ਹਾਈਡ੍ਰੋਜਨ ਪਰਆਕਸਾਈਡ [H2O2] ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਗਟ) ਅਤੇ ਫ੍ਰੀ ਰੈਡੀਕਲਸ (ਸੁਪਰਆਕਸਾਈਡ ਐਨੀਅਨਾਂ [O2•−] ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਗਟ) ਦੇ ਇਨ ਸੀਟੂ ਹਿਸਟੋਕੈਮੀਕਲ ਸਥਾਨੀਕਰਨ ਤੋਂ ਪਤਾ ਚੱਲਿਆ ਕਿ L-ornithine (250 mg/L) ਦੇ ਬਾਹਰੀ ਉਪਯੋਗ ਨੇ H2O2 (96.05 ± 5.33 nmol.g−1 FW; ਚਿੱਤਰ 5A) ਅਤੇ O2•− (32.69 ± 8.56 nmol.g−1 FW; ਚਿੱਤਰ 5B) ਦੇ ਇਕੱਠਾ ਹੋਣ ਨੂੰ ਕਾਫ਼ੀ ਘਟਾ ਦਿੱਤਾ ਹੈ, ਦੋਵਾਂ ਇਲਾਜ ਨਾ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸੰਕਰਮਿਤ ਪੌਦਿਆਂ (ਕ੍ਰਮਵਾਰ 173.31 ± 12.06 ਅਤੇ 149.35 ± 7.94 nmol.g−1 FW) ਅਤੇ ਵਪਾਰਕ ਉੱਲੀਨਾਸ਼ਕ Rizolex-T (170.12 ± 9.50 ਅਤੇ 157.00 ± 7.81 nmol.g−1 fr wt) ਦੇ 50 mg/L ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਗਏ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਇਕੱਠੇ ਹੋਣ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ, ਕ੍ਰਮਵਾਰ) 72 ਘੰਟਿਆਂ 'ਤੇ। hpt (ਚਿੱਤਰ 5A, B) ਦੇ ਅਧੀਨ H2O2 ਅਤੇ O2•− ਦੇ ਉੱਚ ਪੱਧਰ ਇਕੱਠੇ ਹੋਏ। ਇਸੇ ਤਰ੍ਹਾਂ, TCA-ਅਧਾਰਤ ਮੈਲੋਂਡਿਆਲਡੀਹਾਈਡ (MDA) ਪਰਖ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ S. sclerotiorum-ਸੰਕਰਮਿਤ ਬੀਨ ਪੌਦਿਆਂ ਨੇ ਆਪਣੇ ਪੱਤਿਆਂ ਵਿੱਚ MDA (113.48 ± 10.02 nmol.g fr wt) ਦੇ ਉੱਚ ਪੱਧਰ ਇਕੱਠੇ ਕੀਤੇ (ਚਿੱਤਰ 5C)। ਹਾਲਾਂਕਿ, L-ornithine ਦੇ ਬਾਹਰੀ ਉਪਯੋਗ ਨੇ ਲਿਪਿਡ ਪੇਰੋਆਕਸੀਡੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਕਾਫ਼ੀ ਘਟਾ ਦਿੱਤਾ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਪੌਦਿਆਂ ਵਿੱਚ MDA ਸਮੱਗਰੀ ਵਿੱਚ ਕਮੀ (33.08 ± 4.00 nmol.g fr wt) ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਮਾਣਿਤ ਹੈ।
ਚਿੱਤਰ 5. ਗ੍ਰੀਨਹਾਊਸ ਹਾਲਤਾਂ ਵਿੱਚ 72 ਘੰਟਿਆਂ ਬਾਅਦ ਇਨਫੈਕਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ S. sclerotiorum ਨਾਲ ਸੰਕਰਮਿਤ ਬੀਨ ਪੱਤਿਆਂ ਵਿੱਚ ਆਕਸੀਡੇਟਿਵ ਤਣਾਅ ਅਤੇ ਗੈਰ-ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਐਂਟੀਆਕਸੀਡੈਂਟ ਰੱਖਿਆ ਵਿਧੀਆਂ ਦੇ ਮੁੱਖ ਮਾਰਕਰਾਂ 'ਤੇ ਬਾਹਰੀ L-ornithine ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨ ਦਾ ਪ੍ਰਭਾਵ। (A) 72 hpt 'ਤੇ ਹਾਈਡ੍ਰੋਜਨ ਪਰਆਕਸਾਈਡ (H2O2; nmol g−1 FW), (B) 72 hpt 'ਤੇ ਸੁਪਰਆਕਸਾਈਡ ਐਨੀਅਨ (O2•−; nmol g−1 FW), (C) 72 hpt 'ਤੇ ਮੈਲੋਂਡਿਆਲਡੀਹਾਈਡ (MDA; nmol g−1 FW), (D) ਕੁੱਲ ਘੁਲਣਸ਼ੀਲ ਫਿਨੋਲ (mg GAE g−1 FW) 72 hpt 'ਤੇ, (E) ਕੁੱਲ ਘੁਲਣਸ਼ੀਲ ਫਲੇਵੋਨੋਇਡ (mg RE g−1 FW) 72 hpt 'ਤੇ, (F) ਕੁੱਲ ਮੁਫ਼ਤ ਅਮੀਨੋ ਐਸਿਡ (mg g−1 FW) 72 hpt 'ਤੇ, ਅਤੇ (G) 72 hpt 'ਤੇ ਪ੍ਰੋਲਾਈਨ ਸਮੱਗਰੀ (mg g−1 FW)। ਮੁੱਲ 5 ਜੈਵਿਕ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਤੀਆਂ (n = 5) ਦੇ ਔਸਤ ± ਮਿਆਰੀ ਭਟਕਣ (ਔਸਤ ± SD) ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ। ਵੱਖ-ਵੱਖ ਅੱਖਰ ਇਲਾਜਾਂ (p < 0.05) ਵਿਚਕਾਰ ਅੰਕੜਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅੰਤਰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ।