Nature.com 'ਤੇ ਜਾਣ ਲਈ ਧੰਨਵਾਦ। ਤੁਹਾਡੇ ਦੁਆਰਾ ਵਰਤੇ ਜਾ ਰਹੇ ਬ੍ਰਾਊਜ਼ਰ ਸੰਸਕਰਣ ਵਿੱਚ CSS ਲਈ ਸੀਮਤ ਸਮਰਥਨ ਹੈ। ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਅਨੁਭਵ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਸਿਫ਼ਾਰਿਸ਼ ਕਰਦੇ ਹਾਂ ਕਿ ਤੁਸੀਂ ਇੱਕ ਅੱਪਡੇਟ ਕੀਤੇ ਬ੍ਰਾਊਜ਼ਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ (ਜਾਂ ਇੰਟਰਨੈੱਟ ਐਕਸਪਲੋਰਰ ਵਿੱਚ ਅਨੁਕੂਲਤਾ ਮੋਡ ਬੰਦ ਕਰੋ)। ਇਸ ਦੌਰਾਨ, ਨਿਰੰਤਰ ਸਹਾਇਤਾ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਸਾਈਟ ਨੂੰ ਸਟਾਈਲ ਅਤੇ ਜਾਵਾ ਸਕ੍ਰਿਪਟ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਿਤ ਕਰਾਂਗੇ।
ਉੱਚ ਲੋਡਿੰਗ ਸਮੱਗਰੀ ਵਾਲੇ ਇਨਸੁਲਿਨ ਨੈਨੋਪਾਰਟੀਕਲ (NPs) ਨੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਖੁਰਾਕ ਰੂਪਾਂ ਵਿੱਚ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਉਪਯੋਗ ਪਾਏ ਹਨ। ਇਸ ਕੰਮ ਦਾ ਉਦੇਸ਼ ਇਨਸੁਲਿਨ-ਲੋਡ ਕੀਤੇ ਚਾਈਟੋਸੈਨ ਨੈਨੋਪਾਰਟੀਕਲਜ਼ ਦੀ ਬਣਤਰ 'ਤੇ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਡ੍ਰਾਈਂਗ ਅਤੇ ਸਪਰੇਅ-ਡ੍ਰਾਈਂਗ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨਾ ਹੈ, ਮੈਨੀਟੋਲ ਦੇ ਨਾਲ ਜਾਂ ਬਿਨਾਂ ਇੱਕ ਕ੍ਰਾਇਓਪ੍ਰੋਟੈਕਟੈਂਟ ਵਜੋਂ। ਅਸੀਂ ਇਹਨਾਂ ਨੈਨੋਪਾਰਟੀਕਲਜ਼ ਦੀ ਗੁਣਵੱਤਾ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ ਦੁਬਾਰਾ ਘੋਲ ਕੇ ਵੀ ਕੀਤਾ। ਡੀਹਾਈਡਰੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ, ਚਾਈਟੋਸੈਨ/ਸੋਡੀਅਮ ਟ੍ਰਾਈਪੋਲੀਫਾਸਫੇਟ/ਇਨਸੁਲਿਨ ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਡ ਨੈਨੋਪਾਰਟੀਕਲਜ਼ ਦੇ ਕਣ ਦਾ ਆਕਾਰ 318 nm ਹੋਣ ਲਈ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ, PDI 0.18 ਸੀ, ਐਨਕੈਪਸੂਲੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ 99.4% ਸੀ, ਅਤੇ ਲੋਡਿੰਗ 25.01% ਸੀ। ਪੁਨਰਗਠਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਸਾਰੇ ਨੈਨੋਪਾਰਟੀਕਲ, ਮੈਨੀਟੋਲ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੇ ਬਿਨਾਂ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਡ੍ਰਾਈਂਗ ਵਿਧੀ ਦੁਆਰਾ ਪੈਦਾ ਕੀਤੇ ਗਏ ਲੋਕਾਂ ਨੂੰ ਛੱਡ ਕੇ, ਆਪਣੀ ਗੋਲਾਕਾਰ ਕਣ ਬਣਤਰ ਨੂੰ ਬਣਾਈ ਰੱਖਿਆ। ਕਿਸੇ ਵੀ ਸਪਰੇਅ ਦੁਆਰਾ ਡੀਹਾਈਡਰੇਟ ਕੀਤੇ ਗਏ ਮੈਨੀਟੋਲ-ਯੁਕਤ ਨੈਨੋਪਾਰਟੀਕਲਜ਼ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ, ਮੈਨੀਟੋਲ-ਮੁਕਤ ਸਪਰੇਅ-ਸੁੱਕੇ ਨੈਨੋਪਾਰਟੀਕਲਜ਼ ਨੇ ਵੀ ਸਭ ਤੋਂ ਛੋਟਾ ਔਸਤ ਕਣ ਆਕਾਰ (376 nm) ਅਤੇ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਲੋਡਿੰਗ ਸਮੱਗਰੀ (25.02%) ਸਮਾਨ ਐਨਕੈਪਸੂਲੇਸ਼ਨ ਦਰ ਦੇ ਨਾਲ ਦਿਖਾਇਆ। (98.7%) ਅਤੇ PDI (0.20) ਸੁਕਾਉਣ ਜਾਂ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਸੁਕਾਉਣ ਦੀਆਂ ਤਕਨੀਕਾਂ ਦੁਆਰਾ। ਮੈਨੀਟੋਲ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਸਪਰੇਅ ਸੁਕਾਉਣ ਦੁਆਰਾ ਸੁੱਕੇ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਇਨਸੁਲਿਨ ਦੀ ਸਭ ਤੋਂ ਤੇਜ਼ ਰਿਹਾਈ ਅਤੇ ਸੈਲੂਲਰ ਗ੍ਰਹਿਣ ਦੀ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਵੀ ਹੋਈ। ਇਹ ਕੰਮ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਸਪਰੇਅ ਸੁਕਾਉਣ ਨਾਲ ਰਵਾਇਤੀ ਫ੍ਰੀਜ਼ ਸੁਕਾਉਣ ਦੇ ਤਰੀਕਿਆਂ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਕ੍ਰਾਇਓਪ੍ਰੋਟੈਕਟੈਂਟਸ ਦੀ ਲੋੜ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਇਨਸੁਲਿਨ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੇਟ ਹੋ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਵਧੇਰੇ ਲੋਡਿੰਗ ਸਮਰੱਥਾ, ਘੱਟ ਐਡਿਟਿਵ ਜ਼ਰੂਰਤਾਂ ਅਤੇ ਸੰਚਾਲਨ ਲਾਗਤਾਂ ਵਿੱਚ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਫਾਇਦਾ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।
19221,2,3 ਵਿੱਚ ਇਸਦੀ ਖੋਜ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਇਨਸੁਲਿਨ ਅਤੇ ਇਸ ਦੀਆਂ ਦਵਾਈਆਂ ਦੀਆਂ ਤਿਆਰੀਆਂ ਨੇ ਟਾਈਪ 1 ਡਾਇਬਟੀਜ਼ (T1DM) ਅਤੇ ਟਾਈਪ 2 ਡਾਇਬਟੀਜ਼ (T1DM) ਵਾਲੇ ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਦੀਆਂ ਜਾਨਾਂ ਬਚਾਈਆਂ ਹਨ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਉੱਚ ਅਣੂ ਭਾਰ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਇਸਦੇ ਗੁਣਾਂ ਦੇ ਕਾਰਨ, ਇਨਸੁਲਿਨ ਆਸਾਨੀ ਨਾਲ ਇਕੱਠਾ ਹੋ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਪ੍ਰੋਟੀਓਲਾਈਟਿਕ ਐਨਜ਼ਾਈਮਾਂ ਦੁਆਰਾ ਤੋੜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਪਹਿਲੇ-ਪਾਸ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦੁਆਰਾ ਖਤਮ ਹੋ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਟਾਈਪ 1 ਡਾਇਬਟੀਜ਼ ਦਾ ਪਤਾ ਲੱਗਣ ਵਾਲੇ ਲੋਕਾਂ ਨੂੰ ਆਪਣੀ ਬਾਕੀ ਦੀ ਜ਼ਿੰਦਗੀ ਲਈ ਇਨਸੁਲਿਨ ਟੀਕਿਆਂ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। ਟਾਈਪ 2 ਡਾਇਬਟੀਜ਼ ਦਾ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਪਤਾ ਲੱਗਣ ਵਾਲੇ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਨੂੰ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਇਨਸੁਲਿਨ ਟੀਕਿਆਂ ਦੀ ਵੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। ਰੋਜ਼ਾਨਾ ਇਨਸੁਲਿਨ ਟੀਕੇ ਇਹਨਾਂ ਵਿਅਕਤੀਆਂ ਲਈ ਰੋਜ਼ਾਨਾ ਦਰਦ ਅਤੇ ਬੇਅਰਾਮੀ ਦਾ ਇੱਕ ਗੰਭੀਰ ਸਰੋਤ ਹਨ, ਜਿਸਦਾ ਮਾਨਸਿਕ ਸਿਹਤ 'ਤੇ ਮਾੜਾ ਪ੍ਰਭਾਵ ਪੈਂਦਾ ਹੈ। ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ, ਇਨਸੁਲਿਨ ਪ੍ਰਸ਼ਾਸਨ ਦੇ ਹੋਰ ਰੂਪ ਜੋ ਘੱਟ ਬੇਅਰਾਮੀ ਦਾ ਕਾਰਨ ਬਣਦੇ ਹਨ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਮੌਖਿਕ ਇਨਸੁਲਿਨ ਪ੍ਰਸ਼ਾਸਨ, ਦਾ ਵਿਆਪਕ ਅਧਿਐਨ ਕੀਤਾ ਜਾ ਰਿਹਾ ਹੈ5 ਕਿਉਂਕਿ ਉਹਨਾਂ ਵਿੱਚ ਦੁਨੀਆ ਭਰ ਵਿੱਚ ਸ਼ੂਗਰ ਵਾਲੇ ਲਗਭਗ 5 ਅਰਬ ਲੋਕਾਂ ਦੇ ਜੀਵਨ ਦੀ ਗੁਣਵੱਤਾ ਨੂੰ ਬਹਾਲ ਕਰਨ ਦੀ ਸਮਰੱਥਾ ਹੈ।
ਨੈਨੋਪਾਰਟੀਕਲ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਨੇ ਮੌਖਿਕ ਇਨਸੁਲਿਨ 4,6,7 ਲੈਣ ਦੀਆਂ ਕੋਸ਼ਿਸ਼ਾਂ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਤਰੱਕੀ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕੀਤੀ ਹੈ। ਇੱਕ ਜੋ ਖਾਸ ਸਰੀਰ ਸਥਾਨਾਂ ਨੂੰ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਡਿਲੀਵਰੀ ਲਈ ਇਨਸੁਲਿਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਕੈਪਸੂਲੇਟ ਕਰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਡਿਗਰੇਡੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਚਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਨੈਨੋਪਾਰਟੀਕਲ ਫਾਰਮੂਲੇਸ਼ਨਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਦੀਆਂ ਕਈ ਸੀਮਾਵਾਂ ਹਨ, ਮੁੱਖ ਤੌਰ 'ਤੇ ਕਣ ਸਸਪੈਂਸ਼ਨਾਂ ਦੇ ਸਥਿਰਤਾ ਮੁੱਦਿਆਂ ਦੇ ਕਾਰਨ। ਸਟੋਰੇਜ ਦੌਰਾਨ ਕੁਝ ਇਕੱਠਾ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਇਨਸੁਲਿਨ-ਲੋਡਡ ਨੈਨੋਪਾਰਟੀਕਲਜ਼ ਦੀ ਜੈਵ-ਉਪਲਬਧਤਾ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦਾ ਹੈ8। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਇਨਸੁਲਿਨ ਨੈਨੋਪਾਰਟੀਕਲਜ਼ (NPs) ਦੀ ਸਥਿਰਤਾ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਨੈਨੋਪਾਰਟੀਕਲਜ਼ ਅਤੇ ਇਨਸੁਲਿਨ ਦੇ ਪੋਲੀਮਰ ਮੈਟ੍ਰਿਕਸ ਦੀ ਰਸਾਇਣਕ ਸਥਿਰਤਾ 'ਤੇ ਵੀ ਵਿਚਾਰ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ। ਵਰਤਮਾਨ ਵਿੱਚ, ਸਟੋਰੇਜ ਦੌਰਾਨ ਅਣਚਾਹੇ ਬਦਲਾਅ ਨੂੰ ਰੋਕਦੇ ਹੋਏ ਸਥਿਰ NPs ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਡ੍ਰਾਈਇੰਗ ਤਕਨਾਲੋਜੀ ਸੋਨੇ ਦਾ ਮਿਆਰ ਹੈ9।
ਹਾਲਾਂਕਿ, ਫ੍ਰੀਜ਼-ਡ੍ਰਾਈ ਕਰਨ ਲਈ ਕ੍ਰਾਇਓਪ੍ਰੋਟੈਕਟੈਂਟਸ ਨੂੰ ਜੋੜਨ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ NPs ਦੀ ਗੋਲਾਕਾਰ ਬਣਤਰ ਨੂੰ ਬਰਫ਼ ਦੇ ਕ੍ਰਿਸਟਲ ਦੇ ਮਕੈਨੀਕਲ ਤਣਾਅ ਤੋਂ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਹੋਣ ਤੋਂ ਰੋਕਿਆ ਜਾ ਸਕੇ। ਇਹ ਲਾਇਓਫਿਲਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਇਨਸੁਲਿਨ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ ਦੇ ਲੋਡਿੰਗ ਨੂੰ ਕਾਫ਼ੀ ਘਟਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਕਿਉਂਕਿ ਕ੍ਰਾਇਓਪ੍ਰੋਟੈਕਟੈਂਟ ਭਾਰ ਅਨੁਪਾਤ ਦਾ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਹਿੱਸਾ ਆਪਣੇ ਕਬਜ਼ੇ ਵਿੱਚ ਲੈਂਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਲਈ, ਪੈਦਾ ਕੀਤੇ ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਅਕਸਰ ਸੁੱਕੇ ਪਾਊਡਰ ਫਾਰਮੂਲੇਸ਼ਨਾਂ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਓਰਲ ਟੈਬਲੇਟ ਅਤੇ ਓਰਲ ਫਿਲਮਾਂ ਦੇ ਨਿਰਮਾਣ ਲਈ ਅਣਉਚਿਤ ਪਾਏ ਜਾਂਦੇ ਹਨ, ਕਿਉਂਕਿ ਇਨਸੁਲਿਨ ਦੀ ਥੈਰੇਪੀਟਿਕ ਵਿੰਡੋ ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ ਵੱਡੀ ਮਾਤਰਾ ਵਿੱਚ ਸੁੱਕੇ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ ਦੀ ਜ਼ਰੂਰਤ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।
ਸਪਰੇਅ ਸੁਕਾਉਣਾ ਫਾਰਮਾਸਿਊਟੀਕਲ ਉਦਯੋਗ ਵਿੱਚ ਤਰਲ ਪੜਾਵਾਂ ਤੋਂ ਸੁੱਕੇ ਪਾਊਡਰ ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਜਾਣੀ-ਪਛਾਣੀ ਅਤੇ ਸਸਤੀ ਉਦਯੋਗਿਕ-ਪੈਮਾਨੇ ਦੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਹੈ10,11। ਕਣ ਬਣਾਉਣ ਦੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ 'ਤੇ ਨਿਯੰਤਰਣ ਕਈ ਬਾਇਓਐਕਟਿਵ ਮਿਸ਼ਰਣਾਂ ਦੇ ਸਹੀ ਇਨਕੈਪਸੂਲੇਸ਼ਨ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦਾ ਹੈ 12, 13। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਇਹ ਮੌਖਿਕ ਪ੍ਰਸ਼ਾਸਨ ਲਈ ਇਨਕੈਪਸੂਲੇਟਡ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਤਿਆਰ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਤਕਨੀਕ ਬਣ ਗਈ ਹੈ। ਸਪਰੇਅ ਸੁਕਾਉਣ ਦੌਰਾਨ, ਪਾਣੀ ਬਹੁਤ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਵਾਸ਼ਪੀਕਰਨ ਹੋ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਕਣ ਕੋਰ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ ਘੱਟ ਰੱਖਣ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਕਰਦਾ ਹੈ11,14, ਇਸਦੇ ਉਪਯੋਗ ਨੂੰ ਗਰਮੀ-ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਹਿੱਸਿਆਂ ਨੂੰ ਇਨਕੈਪਸੂਲੇਟ ਕਰਨ ਦੇ ਯੋਗ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਸਪਰੇਅ ਸੁਕਾਉਣ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ, ਕੋਟਿੰਗ ਸਮੱਗਰੀ ਨੂੰ ਇਨਕੈਪਸੂਲੇਟਡ ਸਮੱਗਰੀ ਵਾਲੇ ਘੋਲ ਨਾਲ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਸਮਰੂਪ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ11,14। ਫ੍ਰੀਜ਼-ਡ੍ਰਾਈਿੰਗ ਦੇ ਉਲਟ, ਸਪਰੇਅ-ਡ੍ਰਾਈਿੰਗ ਵਿੱਚ ਇਨਕੈਪਸੂਲੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਸਮਰੂਪੀਕਰਨ ਡੀਹਾਈਡਰੇਸ਼ਨ ਦੌਰਾਨ ਇਨਕੈਪਸੂਲੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਵਿੱਚ ਸੁਧਾਰ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਕਿਉਂਕਿ ਸਪਰੇਅ-ਡ੍ਰਾਈਿੰਗ ਇਨਕੈਪਸੂਲੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਕ੍ਰਾਇਓਪ੍ਰੋਟੈਕਟੈਂਟਸ ਦੀ ਲੋੜ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਇਸ ਲਈ ਸਪਰੇਅ-ਡ੍ਰਾਈਿੰਗ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਉੱਚ ਲੋਡਿੰਗ ਸਮੱਗਰੀ ਵਾਲੇ ਸੁੱਕੇ NPs ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।
ਇਹ ਅਧਿਐਨ ਆਇਨ ਜੈੱਲ ਵਿਧੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਚਾਈਟੋਸੈਨ ਅਤੇ ਸੋਡੀਅਮ ਟ੍ਰਾਈਪੋਲੀਫਾਸਫੇਟ ਦੇ ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਿੰਗ ਦੁਆਰਾ ਇਨਸੁਲਿਨ-ਲੋਡਡ NPs ਦੇ ਉਤਪਾਦਨ ਦੀ ਰਿਪੋਰਟ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਆਇਨ ਜੈਲੇਸ਼ਨ ਇੱਕ ਤਿਆਰੀ ਵਿਧੀ ਹੈ ਜੋ ਕੁਝ ਖਾਸ ਸਥਿਤੀਆਂ ਵਿੱਚ ਦੋ ਜਾਂ ਦੋ ਤੋਂ ਵੱਧ ਆਇਓਨਿਕ ਪ੍ਰਜਾਤੀਆਂ ਵਿਚਕਾਰ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਸਟੈਟਿਕ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦੁਆਰਾ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ ਦੇ ਉਤਪਾਦਨ ਦੀ ਆਗਿਆ ਦਿੰਦੀ ਹੈ। ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਚਾਈਟੋਸੈਨ/ਸੋਡੀਅਮ ਟ੍ਰਾਈਪੋਲੀਫਾਸਫੇਟ/ਇਨਸੁਲਿਨ ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਡ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ ਨੂੰ ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੇਟ ਕਰਨ ਲਈ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਡ੍ਰਾਈਇੰਗ ਅਤੇ ਸਪਰੇਅ-ਡ੍ਰਾਈਇੰਗ ਦੋਵੇਂ ਤਕਨੀਕਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਡੀਹਾਈਡਰੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨ ਦਾ SEM ਦੁਆਰਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਉਹਨਾਂ ਦੀ ਪੁਨਰ-ਸੰਯੋਜਨ ਯੋਗਤਾ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਆਕਾਰ ਵੰਡ, ਸਤਹ ਚਾਰਜ, PDI, ਐਨਕੈਪਸੂਲੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ, ਅਤੇ ਲੋਡਿੰਗ ਸਮੱਗਰੀ ਨੂੰ ਮਾਪ ਕੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਵੱਖ-ਵੱਖ ਡੀਹਾਈਡਰੇਸ਼ਨ ਤਰੀਕਿਆਂ ਦੁਆਰਾ ਪੈਦਾ ਕੀਤੇ ਗਏ ਰੈਜ਼ੋਲਿਊਬਲਾਈਜ਼ਡ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ ਦੀ ਗੁਣਵੱਤਾ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਇਨਸੁਲਿਨ ਸੁਰੱਖਿਆ, ਰੀਲੀਜ਼ ਵਿਵਹਾਰ, ਅਤੇ ਸੈਲੂਲਰ ਅਪਟੇਕ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ੀਲਤਾ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਕਰਕੇ ਵੀ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਮਿਸ਼ਰਤ ਘੋਲ ਦਾ pH ਅਤੇ chitosan ਅਤੇ ਇਨਸੁਲਿਨ ਦਾ ਅਨੁਪਾਤ ਦੋ ਮੁੱਖ ਕਾਰਕ ਹਨ ਜੋ ਅੰਤਿਮ NPs ਦੇ ਕਣ ਆਕਾਰ ਅਤੇ ਐਨਕੈਪਸੂਲੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ (EE) ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਕਿਉਂਕਿ ਉਹ ਸਿੱਧੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਆਇਓਨੋਟ੍ਰੋਪਿਕ ਜੈਲੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਿਤ ਕਰਦੇ ਹਨ। ਮਿਸ਼ਰਤ ਘੋਲ ਦਾ pH ਕਣ ਆਕਾਰ ਅਤੇ ਐਨਕੈਪਸੂਲੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ (ਚਿੱਤਰ 1a) ਨਾਲ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਸੰਬੰਧਿਤ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਚਿੱਤਰ 1a ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ pH 4.0 ਤੋਂ 6.0 ਤੱਕ ਵਧਿਆ, ਔਸਤ ਕਣ ਆਕਾਰ (nm) ਘਟਿਆ ਅਤੇ EE ਵਿੱਚ ਕਾਫ਼ੀ ਵਾਧਾ ਹੋਇਆ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਜਦੋਂ pH 6.5 ਤੱਕ ਵਧਿਆ, ਔਸਤ ਕਣ ਆਕਾਰ ਵਧਣਾ ਸ਼ੁਰੂ ਹੋ ਗਿਆ ਅਤੇ EE ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਬਦਲਾਅ ਨਹੀਂ ਆਇਆ। ਜਿਵੇਂ ਕਿ chitosan ਅਤੇ ਇਨਸੁਲਿਨ ਦਾ ਅਨੁਪਾਤ ਵਧਦਾ ਹੈ, ਔਸਤ ਕਣ ਆਕਾਰ ਵੀ ਵਧਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਜਦੋਂ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ 2.5:1 (w/w) (ਚਿੱਤਰ 1b) ਤੋਂ ਵੱਧ chitosan/insulin ਦੇ ਪੁੰਜ ਅਨੁਪਾਤ 'ਤੇ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ ਤਾਂ EE ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਬਦਲਾਅ ਨਹੀਂ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ। ਇਸ ਲਈ, ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ ਅਨੁਕੂਲ ਤਿਆਰੀ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ (pH 6.0, chitosan/insulin ਪੁੰਜ ਅਨੁਪਾਤ 2.5:1) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਅਗਲੇ ਅਧਿਐਨ ਲਈ ਇਨਸੁਲਿਨ-ਲੋਡਡ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ ਤਿਆਰ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਇਸ ਤਿਆਰੀ ਦੀ ਸਥਿਤੀ ਦੇ ਤਹਿਤ, ਇਨਸੁਲਿਨ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ ਦੇ ਔਸਤ ਕਣ ਆਕਾਰ ਨੂੰ 318 nm (ਚਿੱਤਰ 1c) ਕਰਨ ਲਈ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ, PDI 0.18 ਸੀ, ਏਮਬੈਡਿੰਗ ਕੁਸ਼ਲਤਾ 99.4% ਸੀ, ਜ਼ੀਟਾ ਸੰਭਾਵੀ 9.8 mv ਸੀ, ਅਤੇ ਇਨਸੁਲਿਨ ਲੋਡਿੰਗ 25.01% (m/m) ਸੀ। ਟ੍ਰਾਂਸਮਿਸ਼ਨ ਇਲੈਕਟ੍ਰੌਨ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪੀ (TEM) ਦੇ ਨਤੀਜਿਆਂ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ, ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ ਲਗਭਗ ਗੋਲਾਕਾਰ ਅਤੇ ਮੁਕਾਬਲਤਨ ਇਕਸਾਰ ਆਕਾਰ (ਚਿੱਤਰ 1d) ਦੇ ਨਾਲ ਵੱਖਰੇ ਸਨ।
ਇਨਸੁਲਿਨ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲਜ਼ ਦਾ ਪੈਰਾਮੀਟਰ ਅਨੁਕੂਲਨ: (a) ਇਨਸੁਲਿਨ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲਜ਼ ਦੇ ਔਸਤ ਵਿਆਸ ਅਤੇ ਐਨਕੈਪਸੂਲੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ (EE) 'ਤੇ pH ਦਾ ਪ੍ਰਭਾਵ (ਚੀਟੋਸਨ ਅਤੇ ਇਨਸੁਲਿਨ ਦੇ 5:1 ਪੁੰਜ ਅਨੁਪਾਤ 'ਤੇ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ); (b) ਚਾਈਟੋਸਾਨ ਅਤੇ ਇਨਸੁਲਿਨ NPs (ਪੀਐਚ 6 'ਤੇ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ) ਦੇ ਔਸਤ ਵਿਆਸ ਅਤੇ ਐਨਕੈਪਸੂਲੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ (EE) 'ਤੇ ਇਨਸੁਲਿਨ ਦੇ ਪੁੰਜ ਅਨੁਪਾਤ ਦਾ ਪ੍ਰਭਾਵ; (c) ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਇਨਸੁਲਿਨ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲਜ਼ ਦਾ ਕਣ ਆਕਾਰ ਵੰਡ; (d) ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਦਾ TEM ਮਾਈਕ੍ਰੋਗ੍ਰਾਫ।
ਇਹ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਜਾਣਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਚਾਈਟੋਸਨ ਇੱਕ ਕਮਜ਼ੋਰ ਪੌਲੀਇਲੈਕਟ੍ਰੋਲਾਈਟ ਹੈ ਜਿਸਦਾ pKa 6.5 ਹੈ। ਇਹ ਤੇਜ਼ਾਬੀ ਮੀਡੀਆ ਵਿੱਚ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਚਾਰਜ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਕਿਉਂਕਿ ਇਸਦਾ ਮੁੱਖ ਅਮੀਨੋ ਸਮੂਹ ਹਾਈਡ੍ਰੋਜਨ ਆਇਨਾਂ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰੋਟੋਨੇਟ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ15।ਇਸ ਲਈ, ਇਸਨੂੰ ਅਕਸਰ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਚਾਰਜ ਕੀਤੇ ਮੈਕਰੋਮੋਲੀਕਿਊਲਸ ਨੂੰ ਘੇਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਕੈਰੀਅਰ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ, ਚਾਈਟੋਸਨ ਦੀ ਵਰਤੋਂ 5.3 ਦੇ ਆਈਸੋਇਲੈਕਟ੍ਰਿਕ ਬਿੰਦੂ ਨਾਲ ਇਨਸੁਲਿਨ ਨੂੰ ਘੇਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਕਿਉਂਕਿ ਚਾਈਟੋਸਨ ਨੂੰ ਇੱਕ ਕੋਟਿੰਗ ਸਮੱਗਰੀ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਇਸਦੇ ਅਨੁਪਾਤ ਦੇ ਵਾਧੇ ਦੇ ਨਾਲ, ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ ਦੀ ਬਾਹਰੀ ਪਰਤ ਦੀ ਮੋਟਾਈ ਅਨੁਸਾਰੀ ਵਧਦੀ ਹੈ, ਜਿਸਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਇੱਕ ਵੱਡਾ ਔਸਤ ਕਣ ਆਕਾਰ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਚਾਈਟੋਸਨ ਦੇ ਉੱਚ ਪੱਧਰ ਵਧੇਰੇ ਇਨਸੁਲਿਨ ਨੂੰ ਘੇਰ ਸਕਦੇ ਹਨ।ਸਾਡੇ ਮਾਮਲੇ ਵਿੱਚ, EE ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਸੀ ਜਦੋਂ ਚਾਈਟੋਸਨ ਅਤੇ ਇਨਸੁਲਿਨ ਦਾ ਅਨੁਪਾਤ 2.5:1 ਤੱਕ ਪਹੁੰਚ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ ਜਦੋਂ ਅਨੁਪਾਤ ਵਧਦਾ ਰਿਹਾ ਤਾਂ EE ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਬਦਲਾਅ ਨਹੀਂ ਆਇਆ।
ਚਾਈਟੋਸੈਨ ਅਤੇ ਇਨਸੁਲਿਨ ਦੇ ਅਨੁਪਾਤ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਪੀਐਚ ਨੇ ਐਨਪੀਜ਼ ਦੀ ਤਿਆਰੀ ਵਿੱਚ ਵੀ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਈ। ਗੈਨ ਐਟ ਅਲ. 17 ਨੇ ਚਾਈਟੋਸੈਨ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲਜ਼ ਦੇ ਕਣ ਆਕਾਰ 'ਤੇ ਪੀਐਚ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦਾ ਅਧਿਐਨ ਕੀਤਾ। ਉਨ੍ਹਾਂ ਨੇ ਪੀਐਚ 6.0 ਤੱਕ ਪਹੁੰਚਣ ਤੱਕ ਕਣ ਦੇ ਆਕਾਰ ਵਿੱਚ ਨਿਰੰਤਰ ਕਮੀ ਪਾਈ, ਅਤੇ ਪੀਐਚ > 6.0 'ਤੇ ਕਣ ਦੇ ਆਕਾਰ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਵਾਧਾ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ, ਜੋ ਕਿ ਸਾਡੇ ਨਿਰੀਖਣਾਂ ਦੇ ਅਨੁਕੂਲ ਹੈ। ਇਹ ਵਰਤਾਰਾ ਇਸ ਤੱਥ ਦੇ ਕਾਰਨ ਹੈ ਕਿ ਵਧਦੇ ਪੀਐਚ ਦੇ ਨਾਲ, ਇਨਸੁਲਿਨ ਅਣੂ ਇੱਕ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਸਤਹ ਚਾਰਜ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਚਾਈਟੋਸੈਨ/ਸੋਡੀਅਮ ਟ੍ਰਾਈਪੋਲੀਫਾਸਫੇਟ (ਟੀਪੀਪੀ) ਕੰਪਲੈਕਸ ਨਾਲ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਸਟੈਟਿਕ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦਾ ਸਮਰਥਨ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਜਿਸਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਛੋਟਾ ਕਣ ਆਕਾਰ ਅਤੇ ਉੱਚ ਈਈ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਜਦੋਂ ਪੀਐਚ ਨੂੰ 6.5 ਤੱਕ ਐਡਜਸਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਤਾਂ ਚਾਈਟੋਸੈਨ 'ਤੇ ਅਮੀਨੋ ਸਮੂਹ ਡੀਪ੍ਰੋਟੋਨੇਟ ਹੋ ਗਏ ਸਨ, ਜਿਸਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਚਾਈਟੋਸੈਨ ਫੋਲਡਿੰਗ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਉੱਚ ਪੀਐਚ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਟੀਪੀਪੀ ਅਤੇ ਇਨਸੁਲਿਨ ਦੇ ਨਾਲ ਅਮੀਨੋ ਆਇਨਾਂ ਦਾ ਘੱਟ ਸੰਪਰਕ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਜਿਸਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਘੱਟ ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਿੰਗ, ਵੱਡਾ ਅੰਤਮ ਔਸਤ ਕਣ ਆਕਾਰ ਅਤੇ ਘੱਟ ਈਈ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।
ਫ੍ਰੀਜ਼-ਡ੍ਰਾਈਡ ਅਤੇ ਸਪਰੇਅ-ਡ੍ਰਾਈਡ NPs ਦੇ ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨਿਕ ਗੁਣਾਂ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਬਿਹਤਰ ਡੀਹਾਈਡਰੇਸ਼ਨ ਅਤੇ ਪਾਊਡਰ ਬਣਾਉਣ ਦੀਆਂ ਤਕਨੀਕਾਂ ਦੀ ਚੋਣ ਨੂੰ ਮਾਰਗਦਰਸ਼ਨ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਪਸੰਦੀਦਾ ਢੰਗ ਨੂੰ ਡਰੱਗ ਸਥਿਰਤਾ, ਇਕਸਾਰ ਕਣ ਆਕਾਰ, ਉੱਚ ਡਰੱਗ ਲੋਡਿੰਗ ਅਤੇ ਅਸਲ ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਚੰਗੀ ਘੁਲਣਸ਼ੀਲਤਾ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਨੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ। ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ, ਦੋ ਤਕਨੀਕਾਂ ਦੀ ਬਿਹਤਰ ਤੁਲਨਾ ਕਰਨ ਲਈ, ਡੀਹਾਈਡਰੇਸ਼ਨ ਦੌਰਾਨ 1% ਮੈਨੀਟੋਲ ਦੇ ਨਾਲ ਜਾਂ ਬਿਨਾਂ ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਫ੍ਰੀਜ਼ ਡ੍ਰਾਈਵਿੰਗ ਅਤੇ ਸਪਰੇਅ ਡ੍ਰਾਈਵਿੰਗ ਲਈ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੁੱਕੇ ਪਾਊਡਰ ਫਾਰਮੂਲੇਸ਼ਨਾਂ ਵਿੱਚ ਮੈਨੀਟੋਲ ਨੂੰ ਬਲਕਿੰਗ ਏਜੰਟ ਜਾਂ ਕ੍ਰਾਇਓਪ੍ਰੋਟੈਕਟੈਂਟ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਮੈਨੀਟੋਲ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਲਾਇਓਫਿਲਾਈਜ਼ਡ ਇਨਸੁਲਿਨ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ ਲਈ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਚਿੱਤਰ 2a ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ, ਸਕੈਨਿੰਗ ਇਲੈਕਟ੍ਰੌਨ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪੀ (SEM) ਦੇ ਅਧੀਨ ਵੱਡੀਆਂ, ਅਨਿਯਮਿਤ ਅਤੇ ਖੁਰਦਰੀ ਸਤਹਾਂ ਵਾਲਾ ਇੱਕ ਬਹੁਤ ਹੀ ਪੋਰਸ ਪਾਊਡਰ ਬਣਤਰ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ। ਡੀਹਾਈਡਰੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਪਾਊਡਰ ਵਿੱਚ ਕੁਝ ਵੱਖਰੇ ਕਣਾਂ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਇਆ ਗਿਆ (ਚਿੱਤਰ 2e)। ਇਹਨਾਂ ਨਤੀਜਿਆਂ ਨੇ ਸੰਕੇਤ ਦਿੱਤਾ ਕਿ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ NPs ਬਿਨਾਂ ਕਿਸੇ ਕ੍ਰਾਇਓਪ੍ਰੋਟੈਕਟੈਂਟ ਦੇ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਡ੍ਰਾਈਵਿੰਗ ਦੌਰਾਨ ਸੜ ਗਏ ਸਨ। ਫ੍ਰੀਜ਼-ਡ੍ਰਾਈਡ ਅਤੇ ਸਪਰੇਅ-ਡ੍ਰਾਈਡ ਇਨਸੁਲਿਨ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ ਲਈ ਜਿਸ ਵਿੱਚ 1% ਮੈਨੀਟੋਲ ਹੈ, ਨਿਰਵਿਘਨ ਸਤਹਾਂ ਵਾਲੇ ਗੋਲਾਕਾਰ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ ਦੇਖੇ ਗਏ (ਚਿੱਤਰ)। 2b,d,f,h)।ਮੈਨੀਟੋਲ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਸਪਰੇਅ-ਡ੍ਰਾਈ ਕੀਤੇ ਇਨਸੁਲਿਨ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ ਗੋਲਾਕਾਰ ਰਹੇ ਪਰ ਸਤ੍ਹਾ 'ਤੇ ਝੁਰੜੀਆਂ ਹੋਈਆਂ (ਚਿੱਤਰ 2c)। ਗੋਲਾਕਾਰ ਅਤੇ ਝੁਰੜੀਆਂ ਵਾਲੀਆਂ ਸਤਹਾਂ ਬਾਰੇ ਹੇਠਾਂ ਰਿਲੀਜ਼ ਵਿਵਹਾਰ ਅਤੇ ਸੈਲੂਲਰ ਅਪਟੇਕ ਟੈਸਟਾਂ ਵਿੱਚ ਹੋਰ ਚਰਚਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ। ਸੁੱਕੇ NPs ਦੀ ਦਿਖਾਈ ਦੇਣ ਵਾਲੀ ਦਿੱਖ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ, ਮੈਨੀਟੋਲ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਸਪਰੇਅ-ਡ੍ਰਾਈ ਕੀਤੇ NPs ਅਤੇ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਡ੍ਰਾਈ ਕੀਤੇ NPs ਅਤੇ ਮੈਨੀਟੋਲ ਨਾਲ ਸਪਰੇਅ-ਡ੍ਰਾਈ ਕੀਤੇ NPs ਦੋਵਾਂ ਨੇ ਬਰੀਕ NPs ਪਾਊਡਰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ (ਚਿੱਤਰ 2f,g,h)। ਕਣਾਂ ਦੀਆਂ ਸਤਹਾਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਸਤਹ ਖੇਤਰਫਲ ਜਿੰਨਾ ਵੱਡਾ ਹੋਵੇਗਾ, ਘੁਲਣਸ਼ੀਲਤਾ ਓਨੀ ਹੀ ਜ਼ਿਆਦਾ ਹੋਵੇਗੀ ਅਤੇ ਇਸ ਲਈ ਰਿਲੀਜ਼ ਦਰ ਓਨੀ ਹੀ ਜ਼ਿਆਦਾ ਹੋਵੇਗੀ।
ਵੱਖ-ਵੱਖ ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੇਟਿਡ ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਦੀ ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨ: (a) ਮੈਨੀਟੋਲ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਲਾਇਓਫਿਲਾਈਜ਼ਡ ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਦੀ SEM ਤਸਵੀਰ; (b) ਮੈਨੀਟੋਲ ਨਾਲ ਲਾਇਓਫਿਲਾਈਜ਼ਡ ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਦੀ SEM ਤਸਵੀਰ; (c) ਮੈਨੀਟੋਲ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਸਪਰੇਅ-ਸੁੱਕੇ ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਦੀ SEM ਤਸਵੀਰ; (d) ਮੈਨੀਟੋਲ ਨਾਲ ਸਪਰੇਅ-ਸੁੱਕੇ ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਦੀ SEM ਤਸਵੀਰ; (e) ਮੈਨੀਟੋਲ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਲਾਇਓਫਿਲਾਈਜ਼ਡ ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਪਾਊਡਰ ਦੀ ਤਸਵੀਰ; (f) ਮੈਨੀਟੋਲ ਨਾਲ ਲਾਇਓਫਿਲਾਈਜ਼ਡ ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਦੀ ਤਸਵੀਰ; (g) ਮੈਨੀਟੋਲ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਸਪਰੇਅ-ਸੁੱਕੇ ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਪਾਊਡਰ ਦੀ ਤਸਵੀਰ; (h) ਮੈਨੀਟੋਲ ਨਾਲ ਸਪਰੇਅ-ਸੁੱਕੇ ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਪਾਊਡਰ ਦੀ ਤਸਵੀਰ।
ਫ੍ਰੀਜ਼-ਡ੍ਰਾਈਇੰਗ ਦੌਰਾਨ, ਮੈਨੀਟੋਲ ਇੱਕ ਕ੍ਰਾਇਓਪ੍ਰੋਟੈਕਟੈਂਟ ਵਜੋਂ ਕੰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ, NPs ਨੂੰ ਇੱਕ ਅਮੋਰਫਸ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਰੱਖਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਬਰਫ਼ ਦੇ ਕ੍ਰਿਸਟਲ ਦੁਆਰਾ ਨੁਕਸਾਨ ਨੂੰ ਰੋਕਦਾ ਹੈ19। ਇਸਦੇ ਉਲਟ, ਸਪਰੇਅ ਸੁਕਾਉਣ ਦੌਰਾਨ ਕੋਈ ਫ੍ਰੀਜ਼ਿੰਗ ਕਦਮ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦਾ। ਇਸ ਲਈ ਇਸ ਵਿਧੀ ਵਿੱਚ ਮੈਨੀਟੋਲ ਦੀ ਲੋੜ ਨਹੀਂ ਹੈ। ਦਰਅਸਲ, ਮੈਨੀਟੋਲ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਸਪਰੇਅ-ਸੁੱਕੇ NPs ਨੇ ਪਹਿਲਾਂ ਦੱਸੇ ਅਨੁਸਾਰ ਬਾਰੀਕ NPs ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਮੈਨੀਟੋਲ ਅਜੇ ਵੀ NPs ਨੂੰ ਇੱਕ ਹੋਰ ਗੋਲਾਕਾਰ ਬਣਤਰ20 (ਚਿੱਤਰ 2d) ਦੇਣ ਲਈ ਸਪਰੇਅ-ਸੁੱਕਣ ਦੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਫਿਲਰ ਵਜੋਂ ਕੰਮ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਅਜਿਹੇ ਐਨਕੈਪਸੂਲੇਟਡ NPs ਦੇ ਇੱਕਸਾਰ ਰੀਲੀਜ਼ ਵਿਵਹਾਰ ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਕਰਦਾ ਹੈ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਇਹ ਸਪੱਸ਼ਟ ਹੈ ਕਿ ਕੁਝ ਵੱਡੇ ਕਣਾਂ ਨੂੰ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਸੁੱਕੇ ਅਤੇ ਸਪਰੇਅ-ਸੁੱਕੇ ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਦੋਵਾਂ ਵਿੱਚ ਖੋਜਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਮੈਨੀਟੋਲ (ਚਿੱਤਰ 2b,d) ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਇਨਕੈਪਸੂਲੇਟਡ ਇਨਸੁਲਿਨ ਦੇ ਨਾਲ ਕਣ ਕੋਰ ਵਿੱਚ ਮੈਨੀਟੋਲ ਦੇ ਇਕੱਠੇ ਹੋਣ ਕਾਰਨ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਇਹ ਧਿਆਨ ਦੇਣ ਯੋਗ ਹੈ ਕਿ ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ, ਇਹ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਕਿ ਡੀਹਾਈਡਰੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਗੋਲਾਕਾਰ ਬਣਤਰ ਬਰਕਰਾਰ ਰਹੇ, ਮੈਨੀਟੋਲ ਅਤੇ ਚਾਈਟੋਸਨ ਦਾ ਅਨੁਪਾਤ 5:1 ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਹੈ, ਤਾਂ ਜੋ ਵੱਡੀ ਮਾਤਰਾ ਵਿੱਚ ਫਿਲਰ ਸੁੱਕੇ NPs ਦੇ ਕਣਾਂ ਦੇ ਆਕਾਰ ਨੂੰ ਵੀ ਵਧਾ ਸਕੇ।
ਫੂਰੀਅਰ ਟ੍ਰਾਂਸਫਾਰਮ ਇਨਫਰਾਰੈੱਡ ਐਟੇਨੂਏਟਿਡ ਟੋਟਲ ਰਿਫਲੈਕਸ਼ਨ (FTIR-ATR) ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਸਕੋਪੀ ਨੇ ਮੁਫ਼ਤ ਇਨਸੁਲਿਨ, ਚਾਈਟੋਸਨ, ਚਾਈਟੋਸਨ, TPP ਅਤੇ ਇਨਸੁਲਿਨ ਦੇ ਭੌਤਿਕ ਮਿਸ਼ਰਣ ਨੂੰ ਦਰਸਾਇਆ। ਸਾਰੇ ਡੀਹਾਈਡਰੇਟਿਡ NPs ਨੂੰ FTIR-ATR ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਸਕੋਪੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਦਰਸਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਖਾਸ ਤੌਰ 'ਤੇ, 1641, 1543 ਅਤੇ 1412 cm-1 ਦੀ ਬੈਂਡ ਤੀਬਰਤਾ ਮੈਨੀਟੋਲ ਨਾਲ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਡ੍ਰਾਈ ਕੀਤੇ ਐਨਕੈਪਸੂਲੇਟਡ NPs ਅਤੇ ਮੈਨੀਟੋਲ ਨਾਲ ਅਤੇ ਬਿਨਾਂ ਸਪਰੇਅ-ਡ੍ਰਾਈ ਕੀਤੇ NPs ਵਿੱਚ ਦੇਖੀ ਗਈ (ਚਿੱਤਰ 3)। ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਪਹਿਲਾਂ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਤਾਕਤ ਵਿੱਚ ਇਹ ਵਾਧਾ ਚਾਈਟੋਸਨ, TPP ਅਤੇ ਇਨਸੁਲਿਨ ਵਿਚਕਾਰ ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਿੰਗ ਨਾਲ ਜੁੜਿਆ ਹੋਇਆ ਸੀ। ਚਾਈਟੋਸਨ ਅਤੇ ਇਨਸੁਲਿਨ ਵਿਚਕਾਰ ਪਰਸਪਰ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦੀ ਜਾਂਚ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ ਇਨਸੁਲਿਨ-ਲੋਡ ਕੀਤੇ ਚਾਈਟੋਸਨ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ ਦੇ FTIR ਸਪੈਕਟ੍ਰਾ ਵਿੱਚ, ਚਾਈਟੋਸਨ ਬੈਂਡ ਇਨਸੁਲਿਨ ਦੇ ਨਾਲ ਓਵਰਲੈਪ ਹੋਇਆ, ਕਾਰਬੋਨੀਲ ਤੀਬਰਤਾ (1641 cm-1) ਅਤੇ ਅਮੀਨ (1543 cm-1) ਬੈਲਟ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦਾ ਹੈ। TPP ਦੇ ਟ੍ਰਾਈਪੋਲੀਫਾਸਫੇਟ ਸਮੂਹ ਅਮੋਨੀਅਮ ਨਾਲ ਜੁੜੇ ਹੋਏ ਹਨ। ਚੀਟੋਸਨ ਵਿੱਚ ਸਮੂਹ, 1412 ਸੈਂਟੀਮੀਟਰ-1 'ਤੇ ਇੱਕ ਬੈਂਡ ਬਣਾਉਂਦੇ ਹਨ।
ਵੱਖ-ਵੱਖ ਤਰੀਕਿਆਂ ਨਾਲ ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੇਟ ਕੀਤੇ ਗਏ ਮੁਫ਼ਤ ਇਨਸੁਲਿਨ, ਚਾਈਟੋਸੈਨ, ਚਾਈਟੋਸੈਨ/ਟੀਪੀਪੀ/ਇਨਸੁਲਿਨ ਦੇ ਭੌਤਿਕ ਮਿਸ਼ਰਣ ਅਤੇ ਐਨਪੀ ਦਾ FTIR-ATR ਸਪੈਕਟਰਾ।
ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਇਹ ਨਤੀਜੇ SEM ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਏ ਗਏ ਨਤੀਜਿਆਂ ਨਾਲ ਮੇਲ ਖਾਂਦੇ ਹਨ, ਜਿਸ ਤੋਂ ਪਤਾ ਚੱਲਦਾ ਹੈ ਕਿ ਇਨਕੈਪਸੂਲੇਟਡ NPs, ਮੈਨੀਟੋਲ ਨਾਲ ਸਪਰੇਅ ਅਤੇ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਡ੍ਰਾਈ ਕਰਨ 'ਤੇ ਵੀ ਬਰਕਰਾਰ ਰਹਿੰਦੇ ਹਨ, ਪਰ ਮੈਨੀਟੋਲ ਦੀ ਅਣਹੋਂਦ ਵਿੱਚ, ਸਿਰਫ਼ ਸਪਰੇਅ-ਡ੍ਰਾਈ ਕਰਨ ਨਾਲ ਹੀ ਇਨਕੈਪਸੂਲੇਟਡ ਕਣ ਪੈਦਾ ਹੁੰਦੇ ਸਨ। ਇਸ ਦੇ ਉਲਟ, ਮੈਨੀਟੋਲ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਡ੍ਰਾਈ ਕੀਤੇ NPs ਦੇ FTIR-ATR ਸਪੈਕਟ੍ਰਲ ਨਤੀਜੇ ਚਿਟੋਸਨ, TPP, ਅਤੇ ਇਨਸੁਲਿਨ ਦੇ ਭੌਤਿਕ ਮਿਸ਼ਰਣ ਦੇ ਬਹੁਤ ਸਮਾਨ ਸਨ। ਇਹ ਨਤੀਜਾ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਚਿਟੋਸਨ, TPP ਅਤੇ ਇਨਸੁਲਿਨ ਵਿਚਕਾਰ ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕ ਹੁਣ ਮੈਨੀਟੋਲ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਡ੍ਰਾਈ ਕੀਤੇ NPs ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਨਹੀਂ ਹਨ। ਕ੍ਰਾਇਓਪ੍ਰੋਟੈਕਟੈਂਟ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਡ੍ਰਾਈ ਕਰਨ ਦੌਰਾਨ NPs ਦੀ ਬਣਤਰ ਨਸ਼ਟ ਹੋ ਗਈ ਸੀ, ਜੋ ਕਿ SEM ਨਤੀਜਿਆਂ (ਚਿੱਤਰ 2a) ਵਿੱਚ ਦੇਖੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ। ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੇਟਿਡ ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਦੇ ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨ ਅਤੇ FTIR ਨਤੀਜਿਆਂ ਦੇ ਆਧਾਰ 'ਤੇ, ਸਿਰਫ ਲਾਇਓਫਿਲਾਈਜ਼ਡ, ਸਪਰੇਅ-ਡ੍ਰਾਈ ਕੀਤੇ, ਅਤੇ ਮੈਨੀਟੋਲ-ਮੁਕਤ NPs ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਪੁਨਰਗਠਨ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਅਤੇ ਮੈਨੀਟੋਲ-ਮੁਕਤ NPs ਲਈ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ ਕਿਉਂਕਿ ਮੈਨੀਟੋਲ-ਮੁਕਤ NPs ਦੇ ਸੜਨ ਦੌਰਾਨ ਡੀਹਾਈਡਰੇਸ਼ਨ। ਚਰਚਾ ਕਰੋ।
ਡੀਹਾਈਡਰੇਸ਼ਨ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਲਈ ਸਟੋਰੇਜ ਅਤੇ ਹੋਰ ਫਾਰਮੂਲੇਸ਼ਨਾਂ ਵਿੱਚ ਮੁੜ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ। ਸਟੋਰੇਜ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਸੁੱਕੇ NPs ਦੀ ਪੁਨਰਗਠਨ ਕਰਨ ਦੀ ਸਮਰੱਥਾ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਫਾਰਮੂਲੇਸ਼ਨਾਂ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਗੋਲੀਆਂ ਅਤੇ ਫਿਲਮਾਂ ਵਿੱਚ ਉਹਨਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਲਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ। ਅਸੀਂ ਦੇਖਿਆ ਹੈ ਕਿ ਮੈਨੀਟੋਲ ਦੀ ਅਣਹੋਂਦ ਵਿੱਚ ਸਪਰੇਅ-ਸੁੱਕੇ ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਦਾ ਔਸਤ ਕਣ ਆਕਾਰ ਪੁਨਰਗਠਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਥੋੜ੍ਹਾ ਜਿਹਾ ਵਧਿਆ ਹੈ। ਦੂਜੇ ਪਾਸੇ, ਮੈਨੀਟੋਲ ਦੇ ਨਾਲ ਸਪਰੇਅ-ਸੁੱਕੇ ਅਤੇ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਸੁੱਕੇ ਇਨਸੁਲਿਨ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ ਦੇ ਕਣ ਦਾ ਆਕਾਰ ਕਾਫ਼ੀ ਵਧਿਆ (ਸਾਰਣੀ 1)। ਇਸ ਅਧਿਐਨ (ਸਾਰਣੀ 1) ਵਿੱਚ ਸਾਰੇ NPs ਦੇ ਪੁਨਰਗਠਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ PDI ਅਤੇ EE ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਬਦਲਾਅ ਨਹੀਂ ਆਇਆ (p > 0.05)। ਇਹ ਨਤੀਜਾ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਕਣ ਦੁਬਾਰਾ ਘੁਲਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਬਰਕਰਾਰ ਰਹੇ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਮੈਨੀਟੋਲ ਨੂੰ ਜੋੜਨ ਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਲਾਇਓਫਿਲਾਈਜ਼ਡ ਅਤੇ ਸਪਰੇਅ-ਸੁੱਕੇ ਮੈਨੀਟੋਲ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ (ਸਾਰਣੀ 1) ਦੇ ਇਨਸੁਲਿਨ ਲੋਡਿੰਗ ਵਿੱਚ ਬਹੁਤ ਕਮੀ ਆਈ। ਇਸਦੇ ਉਲਟ, ਮੈਨੀਟੋਲ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਸਪਰੇਅ-ਸੁੱਕੇ NPs ਦੀ ਇਨਸੁਲਿਨ ਲੋਡ ਸਮੱਗਰੀ ਪਹਿਲਾਂ ਵਾਂਗ ਹੀ ਰਹੀ (ਸਾਰਣੀ 1)।
ਇਹ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਜਾਣਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ ਲੋਡਿੰਗ ਜਦੋਂ ਡਰੱਗ ਡਿਲੀਵਰੀ ਦੇ ਉਦੇਸ਼ਾਂ ਲਈ ਵਰਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਤਾਂ ਇਹ ਬਹੁਤ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੁੰਦਾ ਹੈ। ਘੱਟ ਲੋਡਿੰਗ ਵਾਲੇ NPs ਲਈ, ਥੈਰੇਪੀਟਿਕ ਥ੍ਰੈਸ਼ਹੋਲਡ ਤੱਕ ਪਹੁੰਚਣ ਲਈ ਬਹੁਤ ਵੱਡੀ ਮਾਤਰਾ ਵਿੱਚ ਸਮੱਗਰੀ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਇੰਨੀਆਂ ਉੱਚ NP ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦੀ ਉੱਚ ਲੇਸਦਾਰਤਾ ਕ੍ਰਮਵਾਰ ਮੌਖਿਕ ਪ੍ਰਸ਼ਾਸਨ ਅਤੇ ਟੀਕੇ ਲਗਾਉਣ ਵਾਲੇ ਫਾਰਮੂਲੇਸ਼ਨਾਂ ਵਿੱਚ ਅਸੁਵਿਧਾ ਅਤੇ ਮੁਸ਼ਕਲ ਵੱਲ ਲੈ ਜਾਂਦੀ ਹੈ 22। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਨੂੰ ਗੋਲੀਆਂ ਅਤੇ ਲੇਸਦਾਰ ਬਾਇਓਫਿਲਮਾਂ 23, 24 ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਵੀ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਲਈ ਘੱਟ ਲੋਡਿੰਗ ਪੱਧਰਾਂ 'ਤੇ ਵੱਡੀ ਮਾਤਰਾ ਵਿੱਚ NPs ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ, ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਵੱਡੀਆਂ ਗੋਲੀਆਂ ਅਤੇ ਮੋਟੀਆਂ ਬਾਇਓਫਿਲਮਾਂ ਹੁੰਦੀਆਂ ਹਨ ਜੋ ਮੌਖਿਕ ਐਪਲੀਕੇਸ਼ਨਾਂ ਲਈ ਢੁਕਵੀਆਂ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੀਆਂ। ਇਸ ਲਈ, ਉੱਚ ਇਨਸੁਲਿਨ ਲੋਡ ਵਾਲੇ ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੇਟਿਡ NPs ਬਹੁਤ ਫਾਇਦੇਮੰਦ ਹਨ। ਸਾਡੇ ਨਤੀਜੇ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਕਿ ਮੈਨੀਟੋਲ-ਮੁਕਤ ਸਪਰੇਅ-ਸੁੱਕੇ NPs ਦਾ ਉੱਚ ਇਨਸੁਲਿਨ ਲੋਡ ਇਹਨਾਂ ਵਿਕਲਪਿਕ ਡਿਲੀਵਰੀ ਤਰੀਕਿਆਂ ਲਈ ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਆਕਰਸ਼ਕ ਫਾਇਦੇ ਪੇਸ਼ ਕਰ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਸਾਰੇ ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੇਟਿਡ NPs ਨੂੰ ਤਿੰਨ ਮਹੀਨਿਆਂ ਲਈ ਫਰਿੱਜ ਵਿੱਚ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। SEM ਨਤੀਜਿਆਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ ਤਿੰਨ ਮਹੀਨਿਆਂ ਦੇ ਸਟੋਰੇਜ ਦੌਰਾਨ ਸਾਰੇ ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੇਟਿਡ NPs ਦੀ ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨ ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਖਾਸ ਬਦਲਾਅ ਨਹੀਂ ਆਇਆ (ਚਿੱਤਰ 4)। ਪਾਣੀ ਵਿੱਚ ਪੁਨਰਗਠਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਸਾਰੇ NPs ਨੇ EE ਵਿੱਚ ਥੋੜ੍ਹੀ ਜਿਹੀ ਕਮੀ ਦਿਖਾਈ ਅਤੇ ਤਿੰਨ ਮਹੀਨਿਆਂ ਦੇ ਸਟੋਰੇਜ ਅਵਧੀ (ਸਾਰਣੀ 2) ਦੌਰਾਨ ਲਗਭਗ ਥੋੜ੍ਹੀ ਜਿਹੀ ਮਾਤਰਾ (~5%) ਇਨਸੁਲਿਨ ਛੱਡਿਆ। ਹਾਲਾਂਕਿ, ਸਾਰੇ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ ਦੇ ਔਸਤ ਕਣ ਦਾ ਆਕਾਰ ਵਧਿਆ। ਮੈਨੀਟੋਲ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਸਪਰੇਅ-ਡ੍ਰਾਈ ਕੀਤੇ NPs ਦਾ ਕਣ ਆਕਾਰ 525 nm ਤੱਕ ਵਧ ਗਿਆ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਮੈਨੀਟੋਲ ਵਾਲੇ ਸਪਰੇਅ-ਡ੍ਰਾਈ ਅਤੇ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਡ੍ਰਾਈ ਕੀਤੇ NPs ਦਾ ਕ੍ਰਮਵਾਰ 872 ਅਤੇ 921 nm ਤੱਕ ਵਧ ਗਿਆ (ਸਾਰਣੀ 2)।
ਤਿੰਨ ਮਹੀਨਿਆਂ ਲਈ ਸਟੋਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੇਟਿਡ ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਦੀ ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨ: (a) ਮੈਨੀਟੋਲ ਵਾਲੇ ਲਾਇਓਫਿਲਾਈਜ਼ਡ ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਦੀ SEM ਤਸਵੀਰ; (b) ਮੈਨੀਟੋਲ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਸਪਰੇਅ-ਸੁੱਕੇ ਇਨਸੁਲਿਨ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ ਦੀ SEM ਤਸਵੀਰ; (c) ਮੈਨੀਟੋਲ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਸਪਰੇਅ-ਸੁੱਕੇ ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਦੀਆਂ SEM ਤਸਵੀਰਾਂ।
ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਮੈਨੀਟੋਲ ਨਾਲ ਸਪਰੇਅ-ਡ੍ਰਾਈ ਕੀਤੇ ਪੁਨਰਗਠਿਤ ਇਨਸੁਲਿਨ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ ਅਤੇ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਡ੍ਰਾਈ ਕੀਤੇ ਗਏ (ਚਿੱਤਰ S2) ਵਿੱਚ ਪ੍ਰੀਪੀਟੇਟਸ ਦੇਖੇ ਗਏ। ਇਹ ਵੱਡੇ ਕਣਾਂ ਦੇ ਪਾਣੀ ਵਿੱਚ ਸਹੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਲਟਕ ਨਾ ਜਾਣ ਕਾਰਨ ਹੋ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਉਪਰੋਕਤ ਸਾਰੇ ਨਤੀਜੇ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ ਸਪਰੇਅ ਸੁਕਾਉਣ ਦੀ ਤਕਨੀਕ ਇਨਸੁਲਿਨ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ ਨੂੰ ਡੀਹਾਈਡਰੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਚਾ ਸਕਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਇਨਸੁਲਿਨ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ ਦੇ ਉੱਚ ਲੋਡਿੰਗ ਨੂੰ ਬਿਨਾਂ ਕਿਸੇ ਫਿਲਰ ਜਾਂ ਕ੍ਰਾਇਓਪ੍ਰੋਟੈਕਟੈਂਟ ਦੇ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਡੀਹਾਈਡਰੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਪਾਚਨ ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ NPs ਦੀ ਸੁਰੱਖਿਆ ਯੋਗਤਾ ਦਾ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਨ ਕਰਨ ਲਈ pH = 2.5 ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ ਪੇਪਸਿਨ, ਟ੍ਰਾਈਪਸਿਨ ਅਤੇ α-ਕਾਈਮੋਟ੍ਰੀਪਸਿਨ ਨਾਲ ਇਨਸੁਲਿਨ ਧਾਰਨ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਗਈ। ਡੀਹਾਈਡਰੇਟਿਡ NPs ਦੀ ਇਨਸੁਲਿਨ ਧਾਰਨ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਤਾਜ਼ੇ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ NPs ਨਾਲ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ, ਅਤੇ ਮੁਫਤ ਇਨਸੁਲਿਨ ਨੂੰ ਇੱਕ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ, ਤਿੰਨੋਂ ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਇਲਾਜਾਂ ਵਿੱਚ ਮੁਫਤ ਇਨਸੁਲਿਨ 4 ਘੰਟਿਆਂ ਦੇ ਅੰਦਰ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਇਨਸੁਲਿਨ ਮਿਟਾਉਣ ਦਾ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ (ਚਿੱਤਰ 5a–c)। ਇਸਦੇ ਉਲਟ, ਮੈਨੀਟੋਲ ਨਾਲ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਡ੍ਰਾਈ ਕੀਤੇ NPs ਅਤੇ ਮੈਨੀਟੋਲ ਦੇ ਨਾਲ ਜਾਂ ਬਿਨਾਂ ਸਪਰੇਅ-ਡ੍ਰਾਈ ਕੀਤੇ NPs ਦੇ ਇਨਸੁਲਿਨ ਮਿਟਾਉਣ ਦੇ ਟੈਸਟਿੰਗ ਨੇ ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਪਾਚਨ ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ ਇਹਨਾਂ NPs ਦੀ ਕਾਫ਼ੀ ਜ਼ਿਆਦਾ ਸੁਰੱਖਿਆ ਦਿਖਾਈ, ਜੋ ਕਿ ਤਾਜ਼ੇ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਦੇ ਸਮਾਨ ਸੀ (ਚਿੱਤਰ 1).5a–c)। ਪੇਪਸਿਨ, ਟ੍ਰਾਈਪਸਿਨ ਅਤੇ α-ਕਾਈਮੋਟ੍ਰੀਪਸਿਨ ਵਿੱਚ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ ਦੀ ਮਦਦ ਨਾਲ, ਕ੍ਰਮਵਾਰ 4 ਘੰਟਿਆਂ ਦੇ ਅੰਦਰ 50%, 60%, ਅਤੇ 75% ਤੋਂ ਵੱਧ ਇਨਸੁਲਿਨ ਨੂੰ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ (ਚਿੱਤਰ 5a–c)। ਇਹ ਇਨਸੁਲਿਨ-ਰੱਖਿਆ ਯੋਗਤਾ ਖੂਨ ਦੇ ਪ੍ਰਵਾਹ ਵਿੱਚ ਇਨਸੁਲਿਨ ਦੇ ਉੱਚ ਸੋਖਣ ਦੀ ਸੰਭਾਵਨਾ ਨੂੰ ਵਧਾ ਸਕਦੀ ਹੈ25। ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਕਿ ਮੈਨੀਟੋਲ ਦੇ ਨਾਲ ਜਾਂ ਬਿਨਾਂ ਸਪਰੇਅ ਸੁਕਾਉਣ ਅਤੇ ਮੈਨੀਟੋਲ ਨਾਲ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਸੁਕਾਉਣ ਨਾਲ ਡੀਹਾਈਡਰੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ NPs ਦੀ ਇਨਸੁਲਿਨ-ਰੱਖਿਆ ਯੋਗਤਾ ਨੂੰ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਰੱਖਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੇਟਿਡ ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਦੀ ਸੁਰੱਖਿਆ ਅਤੇ ਰਿਹਾਈ ਵਿਵਹਾਰ: (a) ਪੈਪਸਿਨ ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਇਨਸੁਲਿਨ ਦੀ ਸੁਰੱਖਿਆ; (b) ਟ੍ਰਾਈਪਸਿਨ ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਇਨਸੁਲਿਨ ਦੀ ਸੁਰੱਖਿਆ; (c) α-ਕਾਈਮੋਟ੍ਰੀਪਸਿਨ ਘੋਲ ਦੁਆਰਾ ਇਨਸੁਲਿਨ ਦੀ ਸੁਰੱਖਿਆ; (d) pH = 2.5 ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੇਟਿਡ NPs ਦਾ ਰਿਹਾਈ ਵਿਵਹਾਰ; (e) pH = 6.6 ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੇਟਿਡ NPs ਦਾ ਰਿਹਾਈ ਵਿਵਹਾਰ; (f) pH = 7.0 ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੇਟਿਡ NPs ਦਾ ਰਿਹਾਈ ਵਿਵਹਾਰ।
ਇਨਸੁਲਿਨ ਪ੍ਰਤੀਰੋਧ 'ਤੇ ਇਨਸੁਲਿਨ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰਨ ਲਈ, ਪੇਟ, ਡਿਓਡੇਨਮ ਅਤੇ ਉਪਰਲੀ ਛੋਟੀ ਆਂਦਰ ਦੇ pH ਵਾਤਾਵਰਣ ਦੀ ਨਕਲ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, ਤਾਜ਼ੇ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਅਤੇ ਪੁਨਰਗਠਿਤ ਸੁੱਕੇ ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਨੂੰ 37 °C 'ਤੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਬਫਰਾਂ (pH = 2.5, 6.6, 7.0) ਵਿੱਚ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਵੱਖ-ਵੱਖ ਵਾਤਾਵਰਣਾਂ ਵਿੱਚ ਰਿਹਾਈ ਵਿਵਹਾਰ। ਗੈਸਟਰੋਇੰਟੇਸਟਾਈਨਲ ਟ੍ਰੈਕਟ ਦਾ ਟੁਕੜਾ। pH = 2.5 'ਤੇ, ਇਨਸੁਲਿਨ-ਲੋਡ ਕੀਤੇ NPs ਅਤੇ ਰੈਜ਼ੋਲਿਊਬਲਾਈਜ਼ਡ ਸੁੱਕੇ ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਨੇ ਪਹਿਲੇ ਇੱਕ ਘੰਟੇ ਦੇ ਅੰਦਰ ਇੱਕ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਬਰਸਟ ਰੀਲੀਜ਼ ਦਿਖਾਇਆ, ਜਿਸ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਅਗਲੇ 5 ਘੰਟਿਆਂ ਵਿੱਚ ਹੌਲੀ ਰੀਲੀਜ਼ ਹੋਈ (ਚਿੱਤਰ 5d)। ਸ਼ੁਰੂਆਤ ਵਿੱਚ ਇਹ ਤੇਜ਼ ਰੀਲੀਜ਼ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਅਣੂਆਂ ਦੇ ਤੇਜ਼ ਸਤਹ ਡੀਸੋਰਪਸ਼ਨ ਦਾ ਨਤੀਜਾ ਹੈ ਜੋ ਕਣ ਦੀ ਅੰਦਰੂਨੀ ਬਣਤਰ ਵਿੱਚ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਸਥਿਰ ਨਹੀਂ ਹਨ। pH = 6.5 'ਤੇ, ਇਨਸੁਲਿਨ-ਲੋਡ ਕੀਤੇ NPs ਅਤੇ ਪੁਨਰਗਠਿਤ ਸੁੱਕੇ ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਨੇ 6 ਘੰਟਿਆਂ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਨਿਰਵਿਘਨ ਅਤੇ ਹੌਲੀ ਰੀਲੀਜ਼ ਦਿਖਾਇਆ, ਕਿਉਂਕਿ ਟੈਸਟ ਘੋਲ ਦਾ pH NPs-ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਘੋਲ (ਚਿੱਤਰ 5e) ਦੇ ਸਮਾਨ ਸੀ। pH = 7 'ਤੇ, NPs ਅਸਥਿਰ ਸਨ ਅਤੇ ਪਹਿਲੇ ਦੋ ਘੰਟਿਆਂ ਦੇ ਅੰਦਰ ਲਗਭਗ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਸੜ ਗਏ ਸਨ (ਚਿੱਤਰ 5f)। ਇਹ ਇਸ ਲਈ ਹੈ ਕਿਉਂਕਿ ਚੀਟੋਸਨ ਦਾ ਡੀਪ੍ਰੋਟੋਨੇਸ਼ਨ ਉੱਚ pH 'ਤੇ ਹੁੰਦਾ ਹੈ, ਜਿਸਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਇੱਕ ਘੱਟ ਸੰਖੇਪ ਪੋਲੀਮਰ ਨੈੱਟਵਰਕ ਅਤੇ ਲੋਡ ਕੀਤੇ ਇਨਸੁਲਿਨ ਦੀ ਰਿਹਾਈ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।
ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਮੈਨੀਟੋਲ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਸਪਰੇਅ-ਸੁੱਕੇ ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਨੇ ਹੋਰ ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੇਟਿਡ NPs (ਚਿੱਤਰ 5d–f) ਨਾਲੋਂ ਤੇਜ਼ ਰੀਲੀਜ਼ ਪ੍ਰੋਫਾਈਲ ਦਿਖਾਇਆ। ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਪਹਿਲਾਂ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਹੈ, ਮੈਨੀਟੋਲ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਸੁੱਕੇ ਪੁਨਰਗਠਿਤ ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਨੇ ਸਭ ਤੋਂ ਛੋਟਾ ਕਣ ਆਕਾਰ ਦਿਖਾਇਆ। ਛੋਟੇ ਕਣ ਇੱਕ ਵੱਡਾ ਸਤਹ ਖੇਤਰ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਇਸ ਲਈ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਸੰਬੰਧਿਤ ਦਵਾਈ ਕਣ ਸਤਹ 'ਤੇ ਜਾਂ ਨੇੜੇ ਹੋਵੇਗੀ, ਜਿਸਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਡਰੱਗ ਰਿਲੀਜ਼ ਹੋਵੇਗੀ26।
NPs ਦੀ ਸਾਈਟੋਟੌਕਸਿਟੀ ਦੀ ਜਾਂਚ MTT ਪਰਖ ਦੁਆਰਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਚਿੱਤਰ S4 ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ, ਸਾਰੇ ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੇਟਿਡ NPs ਦਾ 50-500 μg/ml ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 'ਤੇ ਸੈੱਲ ਵਿਵਹਾਰਕਤਾ 'ਤੇ ਕੋਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨਹੀਂ ਪਾਇਆ ਗਿਆ, ਜੋ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ ਕਿ ਸਾਰੇ ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੇਟਿਡ NPs ਨੂੰ ਇਲਾਜ ਵਿੰਡੋ ਤੱਕ ਪਹੁੰਚਣ ਲਈ ਸੁਰੱਖਿਅਤ ਢੰਗ ਨਾਲ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਜਿਗਰ ਮੁੱਖ ਅੰਗ ਹੈ ਜਿਸ ਰਾਹੀਂ ਇਨਸੁਲਿਨ ਆਪਣੇ ਸਰੀਰਕ ਕਾਰਜ ਕਰਦਾ ਹੈ।HepG2 ਸੈੱਲ ਇੱਕ ਮਨੁੱਖੀ ਹੈਪੇਟੋਮਾ ਸੈੱਲ ਲਾਈਨ ਹੈ ਜੋ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਹੈਪੇਟੋਸਾਈਟ ਅਪਟੇਕ ਮਾਡਲ ਵਜੋਂ ਵਰਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ। ਇੱਥੇ, HepG2 ਸੈੱਲਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਡ੍ਰਾਈਇੰਗ ਅਤੇ ਸਪਰੇਅ-ਡ੍ਰਾਈਇੰਗ ਤਰੀਕਿਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਡੀਹਾਈਡਰੇਟਡ NPs ਦੇ ਸੈਲੂਲਰ ਅਪਟੇਕ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। 25 μg/mL ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 'ਤੇ ਮੁਫਤ FITC ਇਨਸੁਲਿਨ ਨਾਲ ਕਈ ਘੰਟਿਆਂ ਦੇ ਇਨਕਿਊਬੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਫਲੋ ਸਾਇਟੋਮੈਟਰੀ ਅਤੇ ਵਿਜ਼ਨ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਕਨਫੋਕਲ ਲੇਜ਼ਰ ਸਕੈਨਿੰਗ ਦੁਆਰਾ ਸੈਲੂਲਰ ਅਪਟੇਕ, ਤਾਜ਼ੇ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ FITC ਇਨਸੁਲਿਨ-ਲੋਡ ਕੀਤੇ NPs ਅਤੇ ਡੀਹਾਈਡਰੇਟਡ FITC ਇਨਸੁਲਿਨ-ਲੋਡ ਕੀਤੇ NPs ਬਰਾਬਰ ਇਨਸੁਲਿਨ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 'ਤੇ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪੀ (CLSM) ਨਿਰੀਖਣ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ। ਮੈਨੀਟੋਲ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਲਾਇਓਫਿਲਾਈਜ਼ਡ NPs ਡੀਹਾਈਡਰੇਸ਼ਨ ਦੌਰਾਨ ਨਸ਼ਟ ਹੋ ਗਏ ਸਨ ਅਤੇ ਇਸ ਟੈਸਟ ਵਿੱਚ ਮੁਲਾਂਕਣ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਮੈਨੀਟੋਲ ਦੇ ਨਾਲ ਅਤੇ ਬਿਨਾਂ ਤਾਜ਼ੇ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਇਨਸੁਲਿਨ-ਲੋਡ ਕੀਤੇ NPs, ਮੈਨੀਟੋਲ ਨਾਲ ਲਾਇਓਫਿਲਾਈਜ਼ਡ NPs, ਅਤੇ ਮੈਨੀਟੋਲ (ਚਿੱਤਰ 6a) ਦੇ ਨਾਲ ਅਤੇ ਬਿਨਾਂ ਸਪਰੇਅ-ਡ੍ਰਾਈਇੰਗ NPs ਦੀ ਇੰਟਰਾਸੈਲੂਲਰ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਤੀਬਰਤਾ 4.3, 2.6, ਸੀ। 2.4, ਅਤੇ 4.1-ਗੁਣਾ ਮੁਫ਼ਤ ਵਾਲੇ ਨਾਲੋਂ ਵੱਧ। FITC-ਇਨਸੁਲਿਨ ਸਮੂਹ, ਕ੍ਰਮਵਾਰ (ਚਿੱਤਰ 6b)। ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਕਿ ਇਨਕੈਪਸੂਲੇਟਡ ਇਨਸੁਲਿਨ ਮੁਫ਼ਤ ਇਨਸੁਲਿਨ ਨਾਲੋਂ ਸੈਲੂਲਰ ਗ੍ਰਹਿਣ ਵਿੱਚ ਵਧੇਰੇ ਸ਼ਕਤੀਸ਼ਾਲੀ ਹੈ, ਮੁੱਖ ਤੌਰ 'ਤੇ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ ਪੈਦਾ ਕੀਤੇ ਗਏ ਇਨਸੁਲਿਨ-ਲੋਡਡ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ ਦੇ ਛੋਟੇ ਆਕਾਰ ਦੇ ਕਾਰਨ।
ਤਾਜ਼ੇ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ NPs ਅਤੇ ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੇਟਿਡ NPs ਨਾਲ 4 ਘੰਟਿਆਂ ਦੇ ਇਨਕਿਊਬੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ HepG2 ਸੈੱਲ ਦਾ ਗ੍ਰਹਿਣ: (a) HepG2 ਸੈੱਲਾਂ ਦੁਆਰਾ FITC-ਇਨਸੁਲਿਨ ਗ੍ਰਹਿਣ ਦੀ ਵੰਡ। (b) ਫਲੋ ਸਾਇਟੋਮੈਟਰੀ (n = 3) ਦੁਆਰਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤੇ ਗਏ ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਤੀਬਰਤਾ ਦਾ ਜਿਓਮੈਟ੍ਰਿਕ ਔਸਤ, *P < 0.05 ਮੁਫਤ ਇਨਸੁਲਿਨ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ।
ਇਸੇ ਤਰ੍ਹਾਂ, CLSM ਚਿੱਤਰਾਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ ਤਾਜ਼ੇ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ FITC-ਇਨਸੁਲਿਨ-ਲੋਡਡ NPs ਅਤੇ FITC-ਇਨਸੁਲਿਨ-ਲੋਡਡ ਸਪਰੇਅ-ਡ੍ਰਾਈਡ NPs (ਮੈਨੀਟੋਲ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ) ਦੀ FITC ਫਲੋਰੋਸੈਂਸ ਤੀਬਰਤਾ ਦੂਜੇ ਨਮੂਨਿਆਂ (ਚਿੱਤਰ 6a) ਨਾਲੋਂ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਮਜ਼ਬੂਤ ​​ਸੀ। ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਮੈਨੀਟੋਲ ਦੇ ਜੋੜ ਦੇ ਨਾਲ, ਘੋਲ ਦੀ ਉੱਚ ਲੇਸਦਾਰਤਾ ਨੇ ਸੈਲੂਲਰ ਗ੍ਰਹਿਣ ਪ੍ਰਤੀ ਵਿਰੋਧ ਨੂੰ ਵਧਾਇਆ, ਜਿਸਦੇ ਨਤੀਜੇ ਵਜੋਂ ਇਨਸੁਲਿਨ ਪ੍ਰਸਾਰ ਘੱਟ ਗਿਆ। ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਕਿ ਮੈਨੀਟੋਲ-ਮੁਕਤ ਸਪਰੇਅ-ਡ੍ਰਾਈਡ NPs ਨੇ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਸੈਲੂਲਰ ਗ੍ਰਹਿਣ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਿਤ ਕੀਤੀ ਕਿਉਂਕਿ ਦੁਬਾਰਾ ਘੁਲਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਉਨ੍ਹਾਂ ਦੇ ਕਣ ਦਾ ਆਕਾਰ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਡ੍ਰਾਈਡ NPs ਨਾਲੋਂ ਛੋਟਾ ਸੀ।
ਚਾਈਟੋਸਨ (ਔਸਤ ਅਣੂ ਭਾਰ 100 KDa, 75–85% ਡੀਐਸੀਟਾਈਲੇਟਿਡ) ਸਿਗਮਾ-ਐਲਡਰਿਚ ਤੋਂ ਖਰੀਦਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। (ਓਕਵਿਲ, ਓਨਟਾਰੀਓ, ਕੈਨੇਡਾ)। ਸੋਡੀਅਮ ਟ੍ਰਾਈਪੋਲੀਫਾਸਫੇਟ (ਟੀਪੀਪੀ) ਵੀਡਬਲਯੂਆਰ (ਰੈਡਨੋਰ, ਪੈਨਸਿਲਵੇਨੀਆ, ਅਮਰੀਕਾ) ਤੋਂ ਖਰੀਦਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ ਵਰਤਿਆ ਜਾਣ ਵਾਲਾ ਰੀਕੌਂਬੀਨੈਂਟ ਮਨੁੱਖੀ ਇਨਸੁਲਿਨ ਫਿਸ਼ਰ ਸਾਇੰਟਿਫਿਕ (ਵਾਲਥਮ, ਐਮਏ, ਅਮਰੀਕਾ) ਤੋਂ ਸੀ। ਫਲੋਰੇਸੀਨ ਆਈਸੋਥਿਓਸਾਈਨੇਟ (ਐਫਆਈਟੀਸੀ)-ਲੇਬਲ ਵਾਲਾ ਮਨੁੱਖੀ ਇਨਸੁਲਿਨ ਅਤੇ 4′,6-ਡਾਇਮੀਡੀਨੋ-2-ਫੇਨੀਲਿੰਡੋਲ ਡਾਈਹਾਈਡ੍ਰੋਕਲੋਰਾਈਡ (ਡੀਏਪੀਆਈ) ਸਿਗਮਾ-ਐਲਡਰਿਚ ਤੋਂ ਖਰੀਦੇ ਗਏ ਸਨ। (ਓਕਵਿਲ, ਓਨਟਾਰੀਓ, ਕੈਨੇਡਾ)। ਹੇਪਜੀ2 ਸੈੱਲ ਲਾਈਨ ਏਟੀਸੀਸੀ (ਮਾਨਸਾਸ, ਵਰਜੀਨੀਆ, ਅਮਰੀਕਾ) ਤੋਂ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਬਾਕੀ ਸਾਰੇ ਰੀਐਜੈਂਟ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣਾਤਮਕ ਜਾਂ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫਿਕ ਗ੍ਰੇਡ ਸਨ।
0.1% ਐਸੀਟਿਕ ਐਸਿਡ ਵਾਲੇ ਡਬਲ ਡਿਸਟਿਲਡ ਵਾਟਰ (DD ਵਾਟਰ) ਵਿੱਚ ਘੋਲ ਕੇ 1 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਮਿਲੀਲੀਟਰ CS ਘੋਲ ਤਿਆਰ ਕਰੋ। TPP ਅਤੇ ਇਨਸੁਲਿਨ ਦੇ 1 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਘੋਲ ਨੂੰ ਕ੍ਰਮਵਾਰ DD ਪਾਣੀ ਅਤੇ 0.1% ਐਸੀਟਿਕ ਐਸਿਡ ਵਿੱਚ ਘੋਲ ਕੇ ਤਿਆਰ ਕਰੋ। ਪ੍ਰੀ-ਇਮਲਸ਼ਨ ਇੱਕ ਪੌਲੀਟ੍ਰੋਨ PCU-2-110 ਹਾਈ ਸਪੀਡ ਹੋਮੋਜਨਾਈਜ਼ਰ (ਬ੍ਰਿੰਕਮੈਨ ਇੰਡ. ਵੈਸਟਬਰੀ, NY, USA) ਨਾਲ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਤਿਆਰੀ ਦੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਇਸ ਪ੍ਰਕਾਰ ਹੈ: ਪਹਿਲਾਂ, 2 ਮਿਲੀਲੀਟਰ TPP ਘੋਲ ਨੂੰ 4 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਇਨਸੁਲਿਨ ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਜੋੜਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਮਿਸ਼ਰਣ ਨੂੰ 30 ਮਿੰਟ ਲਈ ਹਿਲਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ। ਫਿਰ, ਮਿਸ਼ਰਤ ਘੋਲ ਨੂੰ ਹਾਈ-ਸਪੀਡ ਸਟਰਾਈਂਗ (10,000 rpm) ਦੇ ਅਧੀਨ ਇੱਕ ਸਰਿੰਜ ਰਾਹੀਂ CS ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਡ੍ਰੌਪਵਾਈਜ਼ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਮਿਸ਼ਰਣਾਂ ਨੂੰ 30 ਮਿੰਟ ਲਈ ਇੱਕ ਬਰਫ਼ ਦੇ ਇਸ਼ਨਾਨ ਵਿੱਚ ਹਾਈ-ਸਪੀਡ ਸਟਰਾਈਂਗ (15,000 rpm) ਦੇ ਅਧੀਨ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਡ ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਖਾਸ pH ਵਿੱਚ ਐਡਜਸਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਇਨਸੁਲਿਨ ਦੇ ਕਣ ਦੇ ਆਕਾਰ ਨੂੰ ਹੋਰ ਸਮਰੂਪ ਕਰਨ ਅਤੇ ਘਟਾਉਣ ਲਈ। NPs, ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ ਇੱਕ ਪ੍ਰੋਬ-ਟਾਈਪ ਸੋਨੀਕੇਟਰ (UP 200ST, Hielscher Ultrasonics, Teltow, Germany) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਇੱਕ ਬਰਫ਼ ਦੇ ਇਸ਼ਨਾਨ ਵਿੱਚ ਵਾਧੂ 30 ਮਿੰਟ ਲਈ ਸੋਨੀਕੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਇਨਸੁਲਿਨ NPS ਨੂੰ Z-ਔਸਤ ਵਿਆਸ, ਪੌਲੀਡਿਸਪਰਸਿਟੀ ਇੰਡੈਕਸ (PDI) ਅਤੇ ਜ਼ੀਟਾ ਸੰਭਾਵੀ ਲਈ ਡਾਇਨਾਮਿਕ ਲਾਈਟ ਸਕੈਟਰਿੰਗ (DLS) ਮਾਪਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਲਾਈਟਾਈਜ਼ਰ 500 (ਐਂਟੋਨ ਪਾਰ, ਗ੍ਰੈਜ਼, ਆਸਟਰੀਆ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ 25°C 'ਤੇ DD ਪਾਣੀ ਵਿੱਚ ਪਤਲਾ ਕਰਕੇ ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨ ਅਤੇ ਆਕਾਰ ਵੰਡ ਨੂੰ ਹਿਟਾਚੀ H7600 ਟ੍ਰਾਂਸਮਿਸ਼ਨ ਇਲੈਕਟ੍ਰੌਨ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪ (TEM) (ਹਿਟਾਚੀ, ਟੋਕੀਓ, ਜਾਪਾਨ) ਦੁਆਰਾ ਦਰਸਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ ਬਾਅਦ ਵਿੱਚ ਹਿਟਾਚੀ ਇਮੇਜਿੰਗ ਸੌਫਟਵੇਅਰ (ਹਿਟਾਚੀ, ਟੋਕੀਓ, ਜਾਪਾਨ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਚਿੱਤਰਾਂ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਦੀ ਐਨਕੈਪਸੂਲੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ (EE) ਅਤੇ ਲੋਡਿੰਗ ਸਮਰੱਥਾ (LC) ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨ ਲਈ, NPs ਨੂੰ 100 kDa ਦੇ ਅਣੂ ਭਾਰ ਕੱਟ-ਆਫ ਦੇ ਨਾਲ ਅਲਟਰਾਫਿਲਟਰੇਸ਼ਨ ਟਿਊਬਾਂ ਵਿੱਚ ਪਾਈਪੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ 30 ਮਿੰਟ ਲਈ 500 xg 'ਤੇ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਫਿਲਟਰੇਟ ਵਿੱਚ ਅਣ-ਐਨਕੈਪਸੂਲੇਟਡ ਇਨਸੁਲਿਨ ਨੂੰ ਐਜਿਲੈਂਟ 1100 ਸੀਰੀਜ਼ HPLC ਸਿਸਟਮ (ਐਜਿਲੈਂਟ, ਸੈਂਟਾ ਕਲਾਰਾ, ਕੈਲੀਫੋਰਨੀਆ, ਅਮਰੀਕਾ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਮਾਤਰਾਬੱਧ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਕੁਆਟਰਨਰੀ ਪੰਪ, ਆਟੋਸੈਂਪਲਰ, ਕਾਲਮ ਹੀਟਰ, ਅਤੇ ਡੀਏਡੀ ਡਿਟੈਕਟਰ। ਇਨਸੁਲਿਨ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਇੱਕ C18 ਕਾਲਮ (ਜ਼ੋਰਬੈਕਸ, 3.5 μm, 4.6 mm × 150 mm, ਐਜਿਲੈਂਟ, ਯੂਐਸਏ) ਦੁਆਰਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ 214 nm 'ਤੇ ਪਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਮੋਬਾਈਲ ਪੜਾਅ ਐਸੀਟੋਨਾਈਟ੍ਰਾਈਲ ਅਤੇ ਪਾਣੀ ਸੀ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ 0.1% TFA ਸੀ, ਗਰੇਡੀਐਂਟ ਅਨੁਪਾਤ 10/90 ਤੋਂ 100/0 ਤੱਕ ਸੀ, ਅਤੇ 10 ਮਿੰਟ ਲਈ ਚੱਲਿਆ। ਮੋਬਾਈਲ ਪੜਾਅ ਨੂੰ 1.0 ਮਿਲੀਲੀਟਰ/ਮਿੰਟ ਦੀ ਪ੍ਰਵਾਹ ਦਰ 'ਤੇ ਪੰਪ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਕਾਲਮ ਤਾਪਮਾਨ 20 °C 'ਤੇ ਸੈੱਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਸਮੀਕਰਨਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ EE ਅਤੇ LC ਦੇ ਪ੍ਰਤੀਸ਼ਤ ਦੀ ਗਣਨਾ ਕਰੋ।(1) ਅਤੇ ਸਮੀਕਰਨ (2)।
ਇਨਸੁਲਿਨ NP ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਉਣ ਲਈ 2.0 ਤੋਂ 4.0 ਤੱਕ ਦੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ CS/ਇਨਸੁਲਿਨ ਅਨੁਪਾਤ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਗਈ। ਤਿਆਰੀ ਦੌਰਾਨ CS ਘੋਲ ਦੀ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਮਾਤਰਾ ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤੀ ਗਈ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਇਨਸੁਲਿਨ/TPP ਮਿਸ਼ਰਣ ਨੂੰ ਸਥਿਰ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ। ਸਾਰੇ ਘੋਲ (ਇਨਸੁਲਿਨ, TPP ਅਤੇ CS) ਜੋੜਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਮਿਸ਼ਰਣ ਦੇ pH ਨੂੰ ਧਿਆਨ ਨਾਲ ਨਿਯੰਤਰਿਤ ਕਰਕੇ ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਨੂੰ 4.0 ਤੋਂ 6.5 ਦੀ pH ਰੇਂਜ ਵਿੱਚ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਦੇ ਗਠਨ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਇਨਸੁਲਿਨ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ ਦੇ EE ਅਤੇ ਕਣ ਆਕਾਰ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਵੱਖ-ਵੱਖ pH ਮੁੱਲਾਂ ਅਤੇ CS/ਇਨਸੁਲਿਨ ਪੁੰਜ ਅਨੁਪਾਤ 'ਤੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਨੂੰ ਐਲੂਮੀਨੀਅਮ ਦੇ ਕੰਟੇਨਰ 'ਤੇ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਕੁਝ ਟੇਪ ਨਾਲ ਕੱਸੇ ਹੋਏ ਟਿਸ਼ੂ ਨਾਲ ਢੱਕਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਇਸ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਪੇਚ ਕੀਤੇ ਕੰਟੇਨਰਾਂ ਨੂੰ ਇੱਕ ਲੈਬਕੋਨਕੋ ਫ੍ਰੀਜ਼ੋਨ ਫ੍ਰੀਜ਼ ਡ੍ਰਾਇਅਰ (ਲੈਬਕੋਨਕੋ, ਕੈਨਸਸ ਸਿਟੀ, MO, USA) ਵਿੱਚ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਜੋ ਇੱਕ ਟ੍ਰੇ ਡ੍ਰਾਇਅਰ ਨਾਲ ਲੈਸ ਸੀ। ਸੁੱਕੇ ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ ਤਾਪਮਾਨ ਅਤੇ ਵੈਕਿਊਮ ਪ੍ਰੈਸ਼ਰ ਨੂੰ -10 °C, ਪਹਿਲੇ 2 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ 0.350 ਟੋਰ, ਅਤੇ 24 ਘੰਟਿਆਂ ਦੇ ਬਾਕੀ 22 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ 0 °C ਅਤੇ 0.120 ਟੋਰ 'ਤੇ ਸੈੱਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਬੁਚੀ ਮਿੰਨੀ ਸਪਰੇਅ ਡ੍ਰਾਇਅਰ B-290 (BÜCHI, ਫਲਾਵਿਲ, ਸਵਿਟਜ਼ਰਲੈਂਡ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਇਨਕੈਪਸੂਲੇਟਡ ਇਨਸੁਲਿਨ ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਚੁਣੇ ਗਏ ਸੁਕਾਉਣ ਦੇ ਮਾਪਦੰਡ ਸਨ: ਤਾਪਮਾਨ 100 °C, ਫੀਡ ਪ੍ਰਵਾਹ 3 L/ਮਿੰਟ, ਅਤੇ ਗੈਸ ਪ੍ਰਵਾਹ 4 L/ਮਿੰਟ।
ਡੀਹਾਈਡਰੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਅਤੇ ਬਾਅਦ ਵਿੱਚ ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਨੂੰ FTIR-ATR ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਸਕੋਪੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਦਰਸਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੇਟਿਡ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ ਦੇ ਨਾਲ-ਨਾਲ ਮੁਫ਼ਤ ਇਨਸੁਲਿਨ ਅਤੇ ਚਾਈਟੋਸਨ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਇੱਕ ਸਪੈਕਟ੍ਰਮ 100 FTIR ਸਪੈਕਟਰੋਫੋਟੋਮੀਟਰ (ਪਰਕਿਨਐਲਮਰ, ਵਾਲਥਮ, ਮੈਸੇਚਿਉਸੇਟਸ, ਯੂਐਸਏ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜੋ ਇੱਕ ਯੂਨੀਵਰਸਲ ATR ਸੈਂਪਲਿੰਗ ਐਕਸੈਸਰੀ (ਪਰਕਿਨਐਲਮਰ, ਵਾਲਥਮ, ਮੈਸੇਚਿਉਸੇਟਸ, ਯੂਐਸਏ) ਨਾਲ ਲੈਸ ਸੀ। 4000-600 cm2 ਦੀ ਫ੍ਰੀਕੁਐਂਸੀ ਰੇਂਜ ਵਿੱਚ 4 cm2 ਦੇ ਰੈਜ਼ੋਲਿਊਸ਼ਨ 'ਤੇ 16 ਸਕੈਨਾਂ ਤੋਂ ਸਿਗਨਲ ਔਸਤ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।
ਸੁੱਕੇ ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਦੇ ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ Helios NanoLab 650 ਫੋਕਸਡ ਆਇਨ ਬੀਮ-ਸਕੈਨਿੰਗ ਇਲੈਕਟ੍ਰੌਨ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪ (FIB-SEM) (FEI, Hillsboro, Oregon, USA) ਦੁਆਰਾ ਲਏ ਗਏ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਡ੍ਰਾਈ ਅਤੇ ਸਪਰੇਅ-ਡ੍ਰਾਈ ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਦੇ SEM ਚਿੱਤਰਾਂ ਦੁਆਰਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਮੁੱਖ ਪੈਰਾਮੀਟਰ ਵੋਲਟੇਜ 5 keV ਅਤੇ ਕਰੰਟ 30 mA ਸੀ।
ਸਾਰੇ ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੇਟਿਡ ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਨੂੰ dd ਪਾਣੀ ਵਿੱਚ ਦੁਬਾਰਾ ਘੋਲਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਉਨ੍ਹਾਂ ਦੀ ਗੁਣਵੱਤਾ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨ ਲਈ ਪਹਿਲਾਂ ਦੱਸੇ ਗਏ ਉਸੇ ਢੰਗ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕਣਾਂ ਦੇ ਆਕਾਰ, PDI, EE ਅਤੇ LC ਦੀ ਦੁਬਾਰਾ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਗਈ। ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਤੱਕ ਸਟੋਰੇਜ ਤੋਂ ਬਾਅਦ NPs ਦੇ ਗੁਣਾਂ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰਕੇ ਐਨਹਾਈਡ੍ਰੋਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਦੀ ਸਥਿਰਤਾ ਨੂੰ ਵੀ ਮਾਪਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ, ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਸਾਰੇ NPs ਨੂੰ ਤਿੰਨ ਮਹੀਨਿਆਂ ਲਈ ਫਰਿੱਜ ਵਿੱਚ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਤਿੰਨ ਮਹੀਨਿਆਂ ਦੀ ਸਟੋਰੇਜ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, NPs ਨੂੰ ਰੂਪ ਵਿਗਿਆਨਿਕ ਕਣਾਂ ਦੇ ਆਕਾਰ, PDI, EE ਅਤੇ LC ਲਈ ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਡੀਹਾਈਡਰੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ NPs ਦੀ ਸੁਰੱਖਿਆ ਵਿੱਚ ਇਨਸੁਲਿਨ ਦੀ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ੀਲਤਾ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨ ਲਈ, 45 ਮਿ.ਲੀ. ਵਾਲੇ ਸਿਮੂਲੇਟਡ ਗੈਸਟ੍ਰਿਕ ਤਰਲ (pH 1.2, ਜਿਸ ਵਿੱਚ 1% ਪੇਪਸੀਨ), ਆਂਦਰਾਂ ਦੇ ਤਰਲ (pH 6.8, ਜਿਸ ਵਿੱਚ 1% ਟ੍ਰਾਈਪਸਿਨ ਹੈ) ਜਾਂ ਕਾਈਮੋਟ੍ਰੀਪਸਿਨ ਘੋਲ (100 ਗ੍ਰਾਮ/ਮਿਲੀਲੀਟਰ, ਫਾਸਫੇਟ ਬਫਰ ਵਿੱਚ, pH 7.8) ਵਿੱਚ 5 ਮਿ.ਲੀ. ਪੁਨਰਗਠਿਤ NPs ਨੂੰ ਘੋਲ ਦਿਓ। ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ 100 rpm ਦੀ ਅੰਦੋਲਨ ਗਤੀ ਨਾਲ 37°C 'ਤੇ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਘੋਲ ਦਾ 500 μL ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸਮੇਂ ਦੇ ਬਿੰਦੂਆਂ 'ਤੇ ਇਕੱਠਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ HPLC ਦੁਆਰਾ ਇਨਸੁਲਿਨ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਤਾਜ਼ੇ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਅਤੇ ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੇਟਿਡ ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਦੇ ਇਨ ਵਿਟਰੋ ਰੀਲੀਜ਼ ਵਿਵਹਾਰ ਦੀ ਜਾਂਚ ਡਾਇਲਸਿਸ ਬੈਗ ਵਿਧੀ (ਮੌਲੀਕਿਊਲਰ ਵੇਟ ਕੱਟ-ਆਫ 100 kDa, ਸਪੈਕਟਰਾ ਪੋਰ ਇੰਕ.) ਦੁਆਰਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। ਪੇਟ, ਡਿਓਡੇਨਮ ਅਤੇ ਉਪਰਲੀ ਛੋਟੀ ਆਂਦਰ ਦੇ pH ਵਾਤਾਵਰਣ ਦੀ ਨਕਲ ਕਰਨ ਲਈ ਤਾਜ਼ੇ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਅਤੇ ਪੁਨਰਗਠਿਤ ਸੁੱਕੇ NPs ਨੂੰ ਕ੍ਰਮਵਾਰ pH 2.5, pH 6.6, ਅਤੇ pH 7.0 (0.1 M ਫਾਸਫੇਟ-ਬਫਰਡ ਖਾਰਾ, PBS) 'ਤੇ ਤਰਲ ਪਦਾਰਥਾਂ ਵਿੱਚ ਡਾਇਲਾਈਜ਼ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਸਾਰੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ 200 rpm 'ਤੇ ਲਗਾਤਾਰ ਹਿੱਲਦੇ ਹੋਏ 37 °C 'ਤੇ ਇਨਕਿਊਬੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। 5 mL ਡਾਇਲਸਿਸ ਬੈਗ ਦੇ ਬਾਹਰ ਤਰਲ ਨੂੰ ਹੇਠ ਲਿਖੇ ਸਮੇਂ 'ਤੇ ਐਸਪੀਰੇਟ ਕਰੋ: 0.5, 1, 2, 3, 4, ਅਤੇ 6 ਘੰਟੇ, ਅਤੇ ਤੁਰੰਤ ਤਾਜ਼ੇ ਡਾਇਲਿਸੇਟ ਨਾਲ ਵਾਲੀਅਮ ਨੂੰ ਭਰ ਦਿਓ। HPLC ਦੁਆਰਾ ਤਰਲ ਵਿੱਚ ਇਨਸੁਲਿਨ ਗੰਦਗੀ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ ਤੋਂ ਇਨਸੁਲਿਨ ਛੱਡਣ ਦੀ ਦਰ ਦੀ ਗਣਨਾ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ (ਸਮੀਕਰਨ 3) ਵਿੱਚ ਇਨਕੈਪਸੂਲੇਟ ਕੀਤੇ ਕੁੱਲ ਇਨਸੁਲਿਨ ਦੇ ਜਾਰੀ ਕੀਤੇ ਗਏ ਮੁਫਤ ਇਨਸੁਲਿਨ ਦੇ ਅਨੁਪਾਤ ਤੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।
ਮਨੁੱਖੀ ਹੈਪੇਟੋਸੈਲੂਲਰ ਕਾਰਸੀਨੋਮਾ ਸੈੱਲ ਲਾਈਨ HepG2 ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਡੁਲਬੇਕੋ ਦੇ ਮੋਡੀਫਾਈਡ ਈਗਲਜ਼ ਮੀਡੀਅਮ (DMEM) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ 60 ਮਿਲੀਮੀਟਰ ਵਿਆਸ ਵਾਲੇ ਪਕਵਾਨਾਂ ਵਿੱਚ ਉਗਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ ਜਿਸ ਵਿੱਚ 10% ਭਰੂਣ ਬੋਵਾਈਨ ਸੀਰਮ, 100 IU/mL ਪੈਨਿਸਿਲਿਨ, ਅਤੇ 100 μg/mL ਸਟ੍ਰੈਪਟੋਮਾਈਸਿਨ29 ਸੀ। ਸੱਭਿਆਚਾਰਾਂ ਨੂੰ 37°C, 95% ਸਾਪੇਖਿਕ ਨਮੀ, ਅਤੇ 5% CO2 'ਤੇ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਅਪਟੇਕ ਅਸੈਸ ਲਈ, HepG2 ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ 8-ਵੈੱਲ ਨਨਕ ਲੈਬ-ਟੇਕ ਚੈਂਬਰ ਸਲਾਈਡ ਸਿਸਟਮ (ਥਰਮੋ ਫਿਸ਼ਰ, NY, USA) 'ਤੇ 1 × 105 ਸੈੱਲ/ml 'ਤੇ ਸੀਡ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਸਾਈਟੋਟੌਕਸਿਟੀ ਅਸੈਸ ਲਈ, ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ 5 × 104 ਸੈੱਲ/ml ਦੀ ਘਣਤਾ 'ਤੇ 96-ਵੈੱਲ ਪਲੇਟਾਂ (ਕੋਰਨਿੰਗ, NY, USA) ਵਿੱਚ ਸੀਡ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
MTT ਪਰਖ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਤਾਜ਼ੇ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਅਤੇ ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੇਟਿਡ ਇਨਸੁਲਿਨ NPs30 ਦੀ ਸਾਈਟੋਟੌਕਸਿਟੀ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। HepG2 ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ 5 × 104 ਸੈੱਲ/mL ਦੀ ਘਣਤਾ 'ਤੇ 96-ਖੂਹ ਪਲੇਟਾਂ ਵਿੱਚ ਸੀਡ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਟੈਸਟਿੰਗ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ 7 ਦਿਨਾਂ ਲਈ ਕਲਚਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਨੂੰ ਕਲਚਰ ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ (50 ਤੋਂ 500 μg/mL) ਵਿੱਚ ਪਤਲਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਫਿਰ ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। 24 ਘੰਟਿਆਂ ਦੇ ਇਨਕਿਊਬੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ PBS ਨਾਲ 3 ਵਾਰ ਧੋਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ 0.5 mg/ml MTT ਵਾਲੇ ਮਾਧਿਅਮ ਨਾਲ ਵਾਧੂ 4 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ ਇਨਕਿਊਬੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। Tecan infinite M200 pro spectrophotometer ਪਲੇਟ ਰੀਡਰ (Tecan, Männedorf, Switzerland) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ 570 nm 'ਤੇ ਪੀਲੇ ਟੈਟਰਾਜ਼ੋਲਿਅਮ MTT ਤੋਂ ਜਾਮਨੀ ਫੋਰਮਾਜ਼ਾਨ ਤੱਕ ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਕਮੀ ਨੂੰ ਮਾਪ ਕੇ ਸਾਈਟੋਟੌਕਸਿਟੀ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
NPs ਦੀ ਸੈਲੂਲਰ ਅਪਟੇਕ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਨਫੋਕਲ ਲੇਜ਼ਰ ਸਕੈਨਿੰਗ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪੀ ਅਤੇ ਫਲੋ ਸਾਇਟੋਮੈਟਰੀ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੁਆਰਾ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ। Nunc Lab-Tek ਚੈਂਬਰ ਸਲਾਈਡ ਸਿਸਟਮ ਦੇ ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਨੂੰ ਮੁਫ਼ਤ FITC-ਇਨਸੁਲਿਨ, FITC-ਇਨਸੁਲਿਨ-ਲੋਡਡ NPs ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ ਉਸੇ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 'ਤੇ 25 μg/mL ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੇਟਿਡ FITC-ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਦਾ ਪੁਨਰਗਠਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ 4 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ ਇਨਕੁਬੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ PBS ਨਾਲ 3 ਵਾਰ ਧੋਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ 4% ਪੈਰਾਫਾਰਮਲਡੀਹਾਈਡ ਨਾਲ ਫਿਕਸ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ। ਨਿਊਕਲੀ ਨੂੰ 4′,6-ਡਾਇਮੀਡੀਨੋ-2-ਫੇਨੀਲਿੰਡੋਲ (DAPI) ਨਾਲ ਰੰਗਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਇੱਕ Olympus FV1000 ਲੇਜ਼ਰ ਸਕੈਨਿੰਗ/ਟੂ-ਫੋਟੋਨ ਕਨਫੋਕਲ ਮਾਈਕ੍ਰੋਸਕੋਪ (ਓਲੰਪਸ, ਸ਼ਿੰਜੁਕੂ ਸਿਟੀ, ਟੋਕੀਓ, ਜਾਪਾਨ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਇਨਸੁਲਿਨ ਸਥਾਨੀਕਰਨ ਦੇਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ। ਪ੍ਰਵਾਹ ਸਾਇਟੋਮੈਟਰੀ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ, 10 μg/mL ਮੁਫ਼ਤ FITC-ਇਨਸੁਲਿਨ, FITC-ਇਨਸੁਲਿਨ-ਲੋਡਡ NPs, ਅਤੇ ਰੈਜ਼ੋਲਿਊਬਲਾਈਜ਼ਡ ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੇਟਿਡ FITC-ਇਨਸੁਲਿਨ NPs ਦੀ ਇੱਕੋ ਜਿਹੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਜੋੜੀ ਗਈ ਸੀ। 96-ਖੂਹ ਵਾਲੀਆਂ ਪਲੇਟਾਂ ਨੂੰ HepG2 ਸੈੱਲਾਂ ਨਾਲ ਸੀਡ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ 4 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ ਇਨਕਿਊਬੇਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ। 4 ਘੰਟਿਆਂ ਦੇ ਇਨਕਿਊਬੇਟ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਸੈੱਲਾਂ ਨੂੰ ਹਟਾ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ FBS ਨਾਲ 3 ਵਾਰ ਧੋਤਾ ਗਿਆ। ਪ੍ਰਤੀ ਨਮੂਨਾ 5 × 104 ਸੈੱਲਾਂ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ BD LSR II ਫਲੋ ਸਾਈਟੋਮੀਟਰ (BD, ਫ੍ਰੈਂਕਲਿਨ ਲੇਕਸ, ਨਿਊ ਜਰਸੀ, ਸੰਯੁਕਤ ਰਾਜ) ਦੁਆਰਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ।
ਸਾਰੇ ਮੁੱਲਾਂ ਨੂੰ ਔਸਤ ± ਮਿਆਰੀ ਵਿਵਹਾਰ ਵਜੋਂ ਦਰਸਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ। ਸਾਰੇ ਸਮੂਹਾਂ ਵਿਚਕਾਰ ਤੁਲਨਾਵਾਂ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਇੱਕ-ਪਾਸੜ ANOVA ਜਾਂ IBM SPSS ਅੰਕੜੇ 26 ਦੁਆਰਾ Mac (IBM, Endicott, New York, USA) ਲਈ t-ਟੈਸਟ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ p < 0.05 ਨੂੰ ਅੰਕੜਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਮੰਨਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।
ਇਹ ਅਧਿਐਨ ਬਲਕਿੰਗ ਏਜੰਟਾਂ ਜਾਂ ਕ੍ਰਾਇਓਪ੍ਰੋਟੈਕਟੈਂਟਸ ਸਮਰੱਥਾ ਅਤੇ ਉੱਚ ਲੋਡ ਸਮਰੱਥਾ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਮਿਆਰੀ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਡ੍ਰਾਈੰਗ ਤਰੀਕਿਆਂ ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ ਬਿਹਤਰ ਪੁਨਰਗਠਨ ਦੇ ਨਾਲ ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਡ ਚਾਈਟੋਸਨ/ਟੀਪੀਪੀ/ਇਨਸੁਲਿਨ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ ਨੂੰ ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੇਟ ਕਰਨ ਲਈ ਸਪਰੇਅ ਡ੍ਰਾਈਵਿੰਗ ਦੀ ਲਚਕਤਾ ਅਤੇ ਯੋਗਤਾ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ। ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਇਨਸੁਲਿਨ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲਜ਼ ਨੇ ਔਸਤਨ 318 ਐਨਐਮ ਕਣ ਆਕਾਰ ਅਤੇ 99.4% ਦੀ ਐਨਕੈਪਸੂਲੇਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੀ। ਡੀਹਾਈਡਰੇਸ਼ਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ SEM ਅਤੇ FTIR ਨਤੀਜਿਆਂ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ ਗੋਲਾਕਾਰ ਬਣਤਰ ਸਿਰਫ ਸਪਰੇਅ-ਸੁੱਕੇ NPs ਵਿੱਚ ਮੈਨੀਟੋਲ ਦੇ ਨਾਲ ਅਤੇ ਬਿਨਾਂ ਅਤੇ ਮੈਨੀਟੋਲ ਨਾਲ ਲਾਇਓਫਿਲਾਈਜ਼ਡ ਵਿੱਚ ਬਣਾਈ ਰੱਖੀ ਗਈ ਸੀ, ਪਰ ਮੈਨੀਟੋਲ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਲਾਇਓਫਿਲਾਈਜ਼ਡ NPs ਡੀਹਾਈਡਰੇਸ਼ਨ ਦੌਰਾਨ ਸੜ ਗਏ ਸਨ। ਪੁਨਰਗਠਨ ਯੋਗਤਾ ਟੈਸਟ ਵਿੱਚ, ਮੈਨੀਟੋਲ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਸਪਰੇਅ-ਸੁੱਕੇ ਇਨਸੁਲਿਨ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲਜ਼ ਨੇ ਸਭ ਤੋਂ ਛੋਟਾ ਔਸਤ ਕਣ ਆਕਾਰ ਅਤੇ ਪੁਨਰਗਠਨ 'ਤੇ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਲੋਡਿੰਗ ਦਿਖਾਈ। ਇਹਨਾਂ ਸਾਰੇ ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੇਟਿਡ NPs ਦੇ ਰੀਲੀਜ਼ ਵਿਵਹਾਰ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ ਉਹ pH = 2.5 ਅਤੇ pH = 7 ਦੇ ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਜਾਰੀ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ, ਅਤੇ pH = 6.5 ਦੇ ਘੋਲ ਵਿੱਚ ਬਹੁਤ ਸਥਿਰ ਸਨ। ਹੋਰ ਮੁੜ-ਘੁਲਣ ਵਾਲੇ ਡੀਹਾਈਡ੍ਰੇਟਿਡ NPs ਦੇ ਮੁਕਾਬਲੇ, NPs ਮੈਨੀਟੋਲ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਸਪਰੇਅ-ਡ੍ਰਾਈ ਨੇ ਸਭ ਤੋਂ ਤੇਜ਼ ਰੀਲੀਜ਼ ਦਿਖਾਈ। ਇਹ ਨਤੀਜਾ ਸੈਲੂਲਰ ਅਪਟੇਕ ਪਰਖ ਵਿੱਚ ਦੇਖੇ ਗਏ ਨਤੀਜੇ ਦੇ ਅਨੁਕੂਲ ਹੈ, ਕਿਉਂਕਿ ਮੈਨੀਟੋਲ ਦੀ ਅਣਹੋਂਦ ਵਿੱਚ ਸਪਰੇਅ-ਡ੍ਰਾਈ NPs ਨੇ ਤਾਜ਼ੇ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ NPs ਦੀ ਸੈਲੂਲਰ ਅਪਟੇਕ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨੂੰ ਲਗਭਗ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਬਣਾਈ ਰੱਖਿਆ। ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦੇ ਹਨ ਕਿ ਮੈਨੀਟੋਲ-ਮੁਕਤ ਸਪਰੇਅ ਸੁਕਾਉਣ ਦੁਆਰਾ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸੁੱਕੇ ਇਨਸੁਲਿਨ ਨੈਨੋਪਾਰਟਿਕਲ ਹੋਰ ਐਨਹਾਈਡ੍ਰਸ ਖੁਰਾਕ ਰੂਪਾਂ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਮੌਖਿਕ ਗੋਲੀਆਂ ਜਾਂ ਬਾਇਓਐਡੈਸਿਵ ਫਿਲਮਾਂ ਵਿੱਚ ਅੱਗੇ ਪ੍ਰੋਸੈਸਿੰਗ ਲਈ ਸਭ ਤੋਂ ਢੁਕਵੇਂ ਹਨ।
ਬੌਧਿਕ ਸੰਪਤੀ ਦੇ ਮੁੱਦਿਆਂ ਦੇ ਕਾਰਨ, ਮੌਜੂਦਾ ਅਧਿਐਨ ਦੌਰਾਨ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਅਤੇ/ਜਾਂ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤੇ ਗਏ ਡੇਟਾਸੈੱਟ ਜਨਤਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਉਪਲਬਧ ਨਹੀਂ ਹਨ, ਪਰ ਵਾਜਬ ਬੇਨਤੀ 'ਤੇ ਸੰਬੰਧਿਤ ਲੇਖਕਾਂ ਤੋਂ ਉਪਲਬਧ ਹਨ।
ਕਾਗਨ, ਏ. ਟਾਈਪ 2 ਡਾਇਬਟੀਜ਼: ਸਮਾਜਿਕ ਅਤੇ ਵਿਗਿਆਨਕ ਉਤਪਤੀ, ਡਾਕਟਰੀ ਪੇਚੀਦਗੀਆਂ, ਅਤੇ ਮਰੀਜ਼ਾਂ ਅਤੇ ਹੋਰਾਂ ਲਈ ਪ੍ਰਭਾਵ। (ਮੈਕਫਾਰਲੇਨ, 2009)।
ਸਿੰਘ, ਏਪੀ, ਗੁਓ, ਵਾਈ., ਸਿੰਘ, ਏ., ਜ਼ੀ, ਡਬਲਯੂ. ਅਤੇ ਜਿਆਂਗ, ਪੀ. ਇਨਸੁਲਿਨ ਐਨਕੈਪਸੂਲੇਸ਼ਨ ਦਾ ਵਿਕਾਸ: ਕੀ ਹੁਣ ਮੌਖਿਕ ਪ੍ਰਸ਼ਾਸਨ ਸੰਭਵ ਹੈ? ਜੇ. ਫਾਰਮੇਸੀ.ਬਾਇਓ-ਫਾਰਮੇਸੀ.ਰਿਜ਼ਰਵੋਇਰ.1, 74–92 (2019)।
ਵੋਂਗ, ਸੀਵਾਈ, ਅਲ-ਸਲਾਮੀ, ਐੱਚ. ਅਤੇ ਦਾਸ, ਸੀਆਰ ਸ਼ੂਗਰ ਦੇ ਇਲਾਜ ਲਈ ਓਰਲ ਇਨਸੁਲਿਨ-ਲੋਡਡ ਲਿਪੋਸੋਮ ਡਿਲੀਵਰੀ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ ਵਿੱਚ ਹਾਲੀਆ ਤਰੱਕੀ। ਵਿਆਖਿਆ। ਜੇ. ਫਾਰਮੇਸੀ।549, 201–217 (2018)।